广西特聘专家专项经费资助项目(2011B020)
- 作品数：169 被引量：653H指数：12
- 相关作者：谢芝勋谢丽基邓显文谢志勤刘加波更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学广西师范大学更多>>
- 发文基金：广西特聘专家专项经费资助项目广西壮族自治区科技攻关计划国家百千万人才工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- H6亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2012年
- 本研究旨在建立一种快速、特异、敏感的H6亚型禽流感病毒(AIV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。针对H6亚型AIV的血凝素(HA)基因序列保守区设计1对引物,并优化反应条件。结果表明,该方法的最低检测限为1.07×101拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出1 000倍;扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(80.81±0.08)℃,组内变异系数为0.08%～0.99%,组间变异系数为1.85%,可重复性好;对H1、H3、H5、H7、H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒等其他呼吸道病原体无扩增;检测快速,从样本处理到报告结果仅需3.5 h。
- 周辰瑜谢芝勋彭宜刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴
- 关键词：禽流感病毒
- 牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达被引量：4
- 2013年
- 利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-VP7。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,成功扩增了VP7基因,大小为981bp,所表达的重组蛋白大小为40.4ku,与预期值相符,该蛋白能与牛轮状病毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛轮状病毒ELISA检测试剂盒奠定了物质基础。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基罗思思
- 关键词：牛轮状病毒VP7蛋白昆虫细胞
- 牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的表达及ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,结果均较好。用所建立的NS3-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份牛血清样品,检出率为24.8%,与商品化试剂盒比较,符合率为97%。结果表明,本研究建立的NS3-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,适用于BVDV的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒NS3ELISA
- 鸭圆环病毒LAMP可视化检测方法的建立被引量：14
- 2012年
- 根据GenBank中DuCV基因序列,在保守区设计了6条特异性引物,并对反应条件进行优化,建立了一种适用于鸭圆环病毒(DuCV)的环介导等温扩增快速检测方法(LAMP)。该方法对H9亚型禽流感、小鹅瘟、鸭瘟、鸭肝炎、鸭副黏病毒均无扩增反应;且扩增反应只需在常规水浴锅中进行,1小时内即可完成反应;对DuCV模版DNA的最小检测限为10fg,灵敏度是一步法PCR的1000倍。本研究建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合在基层进行DuCV的快速检测。
- 赵光远谢芝勋谢丽基庞耀珊邓显文刘加波范晴
- 关键词：鸭圆环病毒环介导等温扩增
- H11亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 利用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种特异、灵敏和快速的H11亚型禽流感病毒(AIV)RT-LAMP可视化检测方法。根据H11亚型AIV HA基因保守序列,设计6条特异性引物,优化反应条件,进行特异性、敏感性和临床样品检测。结果显示,该方法只能扩增H11亚型AIV,不与其他亚型AIV和禽病病原体发生交叉反应,表明该方法特异性强;对H11亚型AIV RNA的检测下限为10fg,表明该方法敏感性高;在63℃等温条件下作用1h即可完成全部扩增反应;对206份临床样品的检测结果与病毒分离一致。结果表明,本研究中建立的H11-RT-LAMP检测方法具有简便、快速和结果可视化的优点,尤其适合在基层兽医站和养殖场进行快速检测,具有非常广阔的应用前景。
- 罗思思谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴
- 关键词：环介导等温扩增
- 蛋白质组学研究方法及应用的研究进展被引量：7
- 2014年
- 蛋白质是细胞生理功能的具体执行者,并常以蛋白复合体或与核酸相互作用的形式来发挥作用。蛋白质组代表在一定时间和特定条件下,1个细胞、组织或生物个体所表达的全部蛋白,因此蛋白质组会随着时间和空间的改变而发生动态变化。蛋白质组学从整体水平研究蛋白质组的结构、功能、表达模式及其相互作用的方式。根据研究内容的不同,蛋白质组学可分为表达蛋白质组学、结构蛋白质组学和功能蛋白质组学等。研究蛋白质组学有助于了解蛋白的结构、细胞的功能、生命的本质及活动规律,为疾病的诊断、治疗、疫苗及新药开发提供科学依据。研究蛋白质组学的常用手段主要有:双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、质谱、酵母双杂交系统及蛋白芯片法等,文章将对蛋白质组学常用的技术方法及应用进行综述。
- 谭伟黄莉谢芝勋
- 关键词：蛋白质组学双向凝胶电泳质谱蛋白质分析
- 同时鉴别6种鸡病毒性呼吸道病GeXP检测方法的建立被引量：7
- 2013年
- 为了建立一种能够同时鉴别H5、H7、H9亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎6种鸡病毒性呼吸道传染病病原体的GeXP检测方法,本研究根据这些病原体各自的基因保守序列,设计合成了7对特异性引物,优化反应条件,用单一病毒、混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性和准确性,以不同拷贝数的克隆质粒来检测GeXP方法的灵敏度。检测34份临床阳性样品,进一步验证该法的可靠性。结果显示,在7对引物同时存在的GeXP反应体系中,可特异性地扩增出相关6种病毒目的片段,并可在102拷贝/μL水平同时特异地检测出鸡6种病毒性呼吸道传染病,GeXP方法检测34份临床阳性样品结果与病毒分离一致。本研究建立的GeXP方法不仅可高通量检测6种病原体,而且具有特异性强和灵敏度高的特点,适用于临床样品混合感染的快速鉴别诊断,对这6种发病特征及临床症状相似的鸡病毒性呼吸道病的有效防控有很高的实际应用价值。
- 罗思思谢芝勋谢丽基庞耀珊范晴邓显文刘加波谢志勤
- 关键词：多重PCR
- 蝙蝠甲型流感病毒H17N10新亚型的研究进展被引量：6
- 2015年
- 2012年研究人员在蝙蝠中发现了甲型流感病毒H17N10新亚型。蛋白序列及结构分析显示,HA17蛋白及NA10蛋白与已知的甲型流感病毒的血凝素和神经氨酸酶不同,它们不能与唾液酸结合,表明H17N10亚型病毒的HA17蛋白及NA10蛋白可能具有新功能。本文将扼要介绍有关蝙蝠甲型流感病毒H17N10亚型的研究进展。
- 谭伟谢芝勋
- 关键词：唾液酸RNA聚合酶
- 直接免疫荧光检测禽呼肠孤病毒方法的建立被引量：9
- 2012年
- 本研究利用经纯化的原核表达禽呼肠孤病毒(ARV)结构蛋白σ3作为免疫抗原,免疫兔子三次,血清效价达到27时采血分离血清。用硫酸铵沉淀法浓缩纯化血清中的IgG,纯化的IgG用荧光素FITC加以标记。利用制备的荧光标记特异性抗体和对反应条件进行优化,建立了表达σ3蛋白荧光抗体检测ARV的诊断方法。结果经纯化获得特异性抗ARV结构蛋白σ3的荧光标记IgG抗体。用标记的抗体检测ARV病毒感染的单层细胞,出现特异性的荧光。用建立的σ3-FA方法检测接种疑似ARV感染的病料的鸡胚原代成纤维细胞,检出的阳性样品与病毒分离结果一致。表明本研究建立的σ3-FA方法检测ARV病毒有较好的特异性,可用于ARV感染的临床样品检测。
- 谢志勤谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢丽基范晴
- 关键词：禽呼肠孤病毒直接免疫荧光
- 甲型流感病毒NS1、NS2和NS3蛋白的研究进展被引量：11
- 2014年
- 甲型流感病毒基因组含有8个基因节段,其中血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、NP核蛋白(NP)及碱性聚合酶2(PB2)基因只能分别编码1个病毒蛋白质。而M基质蛋白(M)、碱性聚合酶1(PB1)、酸性聚合酶(PA)及NS非结构蛋白(NS)的基因均可编码2种以上的蛋白质,使得甲型流感病毒基因组编码的蛋白质种类多达17种。研究发现M基因编码M1、M2和M42 3种蛋白质;PB1基因编码PB1、PB1-F2和PB1-N40 3种蛋白质;PA基因编码PA、PA-X、PA-N155及PA-N182 4种蛋白质;NS基因则编码NS1、NS2和NS3 3种蛋白质。NS3蛋白于2012年首次报道,它是由NS3mRNA编码的1种新的流感病毒蛋白质。作者将对流感病毒NS基因编码的NS1、NS2和NS3 3种蛋白质的研究进展作简要的介绍。
- 谭伟谢芝勋
- 关键词：甲型流感病毒NS1蛋白NS3蛋白
