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氟他胺联合去雄激素环境诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型的建立: 目的建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型。方法将雄激素依赖的父代前列腺癌LNCaP细胞去雄激素培养5代后,加入终浓度为1.0×10mol/L的氟他胺培养20代,再提高氟他胺浓度到5.0×10mol/L,培养35代,并以此L...; 陶志华许刚陈兵华毛易捷何晶晶吴伟林晓梅陈占国沈默周武; 关键词：雄激素非依赖细胞株氟他胺前列腺癌; 文献传递

氟他胺联合去雄激素环境诱导的雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型的建立被引量：6: 2009年; 采用氟他胺联合去雄激素环境联合诱导培养的方法在体外建立一株雄激素非依赖性前列腺癌细胞系。倒置显微镜下观察细胞形态学变化;采用CCK-8法测定细胞生长率;流式细胞技术检测细胞周期和Bcl-2、Bax的表达变化。结果显示,第1～20代实验组细胞形态瘦长,第30代后细胞大部分呈扁平状,同时呈聚集生长,而对照组细胞形态始终呈长梭形;不同代数的实验组LNCaP细胞在氟他胺浓度为5.0×10-6mol/L的去雄激素培养液中的细胞生长率总体呈上升趋势;氟他胺和去雄激素环境对实验组LNCaP细胞的细胞周期均无明显影响,而对照组LNCaP细胞的生长受氟他胺和去雄激素环境影响而受到抑制;实验组第60代LNCaP细胞Bcl-2平均荧光强度明显高于对照组,而Bax平均荧光强度与对照组间无显著差异。结果表明LNCaP细胞在氟他胺和去雄激素环境下能形成雄激素非依赖性前列腺癌细胞,这为其发病机制的研究提供了合适的实验对象。; 许刚毛易捷陈兵华何晶晶陶志华林晓梅陈占国沈默; 关键词：雄激素非依赖性氟他胺前列腺癌

前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因异常甲基化检测及临床意义被引量：7: 2009年; 目的:检测前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因异常甲基化,探讨其甲基化与前列腺癌临床病理特征间的关系。方法:采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific polymerase chain reaction,NMSP)法对57例前列腺癌组织和35例良性前列腺增生组织进行甲基化检测,分析其甲基化的发生与前列腺癌临床病理特征间的关系。结果:前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因甲基化检出率显著高于良性前列腺增生组织(GSTP1:61.4%vs 2.9%;DAPK:43.9%vs 8.6%;均P<0.01)。GSTP1基因甲基化率在不同Gleason评分间具有明显差异(χ2=11.53,P=0.001),而在不同年龄、前列腺特异性抗原(PSA)和临床分期之间差异却无显著性(χ2=0.111,1.662和1.975,均P>0.05);DAPK基因甲基化率在不同年龄、PSA、Gleason评分和不同临床分期之间均无明显差异(χ2=0.071、0.002、1.290和2.309,P均>0.05)。结论:GSTP1和DAPK基因异常甲基化与前列腺癌的发生与发展相关,可有助于前列腺癌的诊断。; 何晶晶毛易捷许刚吴伟陶志华沈默吴秀玲陈占国周武; 关键词：前列腺肿瘤甲基化

前列腺癌患者外周血中前列腺癌抗原3基因和前列腺特异性抗原基因联合检测的意义被引量：1: 2009年; 目的评价外周血前列腺癌抗原3基因（prostate cancer antigen3，PCA3mRNA）和前列腺特异性抗原基因（prostate specific antigen，PSAmRNA）联合检测对前列腺癌（PCa）及对其微转移诊断的价值。方法用双重荧光实时定量逆转录（dFQ—RT）-PCR对49例PCa和71例前列腺增生（BPH）患者外周血PCA3mRNA和PSAmRNA进行定量检测，通过受试者工作特征（ROC）曲线评价其在PCa诊断和微转移监测中的价值。结果PCa组外周血PCA3mRNA含量明显高于BPH组[2362（〈30—7421）拷贝／ml比〈30拷贝／ml，Z=-6．66，P〈0．01]，而PSAmRNA含量也明显高于BPH组[3425（908—36639）拷贝／ml比〈200拷贝／ml，Z=-6．40，P〈0．01]；PCa组外周血PCA3mRNA和PSAmRNA的阳性率随临床分期增高而增加[B期：均为30．0％（3／10），C期：60．0％（9／15）和86．7％（13／15），D期：91．7％（22／24）和91．7％（22／24）；X^2分别为13．534和16．451，P均〈0．01]，同时也随Gleason评分增高而增加[2—4分：20．0％（1／5）和40．0％（2／5）；5～7分：66．7％（12／18）和72．2％（13／18）；8～10分：84．6％（22／26）和92．3％（24／26）x^2分别为8．895和8．015，P均〈0．05]；ROC曲线显示，当PCA3mRNA和PSAmRNA临界值分别为846拷贝／ml和280拷贝／ml时，诊断PCa敏感度分别为69．4％（34／49）和81．7％（40／49），特异度分别为90．1％（64／71）和77．5％（55／71）；而联合检测时其敏感度可增至85．7％（42／49），但特异度下降为76．1％（54／71）。PCA3mRNA诊断PCa微转移的敏感度和特异度分别为90．9％（20／22）和84．7％（11／13）。结论外周血PCA3mRNA和PSAmRNA检测是PCa诊断的良好指标，而联合检测可弥补PCA3mRNA敏感度低和PSAmRNA特异度低的不足，而更有利于PCa诊断；PCA3mRNA可能为PCa微转移诊断的良好指标。; 林晓梅许刚吴伟陈伟陶志华翁志梁陈凤萍吴秀玲陈晓东李澄棣; 关键词：前列腺肿瘤肿瘤转移抗原肿瘤前列腺特异抗原逆转录聚合酶链反应

PCA3基因在前列腺组织发育中的表达被引量：1: 2009年; 探索PCA3基因在前列腺组织发育过程中的表达情况。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法检测18例胎儿、27例良性前列腺增生(BPH)患者和15例前列腺癌(PCa)患者前列腺组织中的PCA3 mRNA、AMACR mRNA和PSA mRNA的表达情况。结果在胎儿前列腺组18例标本中均未检测到PCA3 mRNA的表达,不同胎龄组(13～17周、18～21周、22～25周)中PSA mRNA含量无统计学差异(P>1.05),13～17周组与18～21周组、13～17周组与22～25周组中AMACR mRNA含量都有显著性差异(P<0.05),18～21周组与22～25周组AMACR mRNA含量无统计学差异(P>0.05)。胎儿前列腺组、BPH组和PCa组中的AMACR mRNA和PSA mRNA含量逐步增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。PCA3基因在胚胎组织中不表达,在前列腺肿瘤时过表达,提示PCA3基因可能是作为前列腺肿瘤发生时的重要的调节基因。而AMACR和PSA基因在胚胎组织中表达,只是在前列腺肿瘤发生时过表达。; 郑彦博胡王强郭飞陶志华沈默陈占国周武戴美洁; 关键词：PCA3 胎儿前列腺 AMACR PSA

尿液跨膜丝氨酸蛋白酶2基因和ETS转录因子家族成员相关基因融合体在前列腺癌诊断中的价值被引量：2: 2009年; 目的评价尿液跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）基因和ETS转录因子家族成员相关基因（ERG）融合体与前列腺特异性抗原（PSA）mRNA比值测定在前列腺癌诊断中价值。方法建立TMPRSS2和ERG基因融合体（TMPRSS2：ERG）mRNA及PSAmRNA荧光定量逆转录（FQ—RT）-PCR检测方法，TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值以2^-△ct。进行计算。同时，用该方法检测107例前列腺良性增生（BPH）患者和99例前列腺癌（PCa）患者尿液中的TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值，并分析该指标对PCa的诊断价值及与PCa临床分期、Gleason评分和PSA水平间的关系。结果PCa组TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值明显高于BPH组（0．101比0．000；U=2290．500，P〈0．01）；但其在PCa不同临床分期、Gleason评分、PSA组之间的差异均无统计学意义（X^2值分别为3．293、0．002、1．745，P均〉0．05）。TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．784（95％C1：0．707～0．860），当以3．0×10^-5。为临界值时，其诊断PCa的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为75．8％（75／99）、94．4％（101／107）、92．6％（75／81）、80．8％（101／125）和85．4％（176／206）；但其敏感度在PCa不同临床分期、Gleason评分、PSA组之间的差异均无统计学意义（X^2值分别为3．572、2．278、3．707，P均〉0．05）。结论尿液TMPRSS2：ERGmRNA／PSAmRNA比值在PCa诊断中具有较好的特异度和敏感度，有望成为PCa联合诊断的候选指标，但不能作为PCa病情监测和判断预后的指标。; 毛易捷何晶晶许刚戴美洁陈伟陈占国周武吴伟吴秀玲陶志华; 关键词：前列腺肿瘤丝氨酸内肽酶类癌基因蛋白质类逆转录聚合酶链反应

前列腺癌组织中多基因异常甲基化检测及临床意义被引量：2: 2009年; 目的探讨前列腺癌组织中RARβ2、GSTP1和DAPK基因异常甲基化，与前列腺癌临床病理特征间的关系，硬其在前列腺癌诊断中价值。方法采用巢式甲基化特异性PCR（nested methylation specific polymerase chain reaction，NMSP）法对57例前列腺癌组织和35例良性前列腺增生（BPH）组织进行甲基化检测；分析其甲基化的发生与前列腺癌临床病理特征间的关系，以及在前列腺癌诊断中价值。结果前列腺癌组织中RARβ2、GSTP1和DAPK基因甲基化检出率显著高于BPH组织（RARβ2：52．6％对0％；GSTP1：61．4％对2．9％；DAPK：43．9％对8．6％；均P〈0．01）。RARβ2基因甲摹化率在前列腺癌不同Gleason评分和不同临床分期之间差异有统计学意义（4～7分对8～10分：34．8％对64．7％，B、C期对D期：37．0％对66．7％，x^2=4．927和x^2=5．004，P=0．026和P=0．025）；GSTP1基因甲基化率在不同Gleason评分间差异有统计学意义（4～7分对8～10分：43．5％对73．5％．x^2=11．530，P=0．001），而在不同临床分期之间差异无统计学意义（B、C期对D期：51．9％对70．0％，x^2=1．975，P=0．16）；DAPK基因甲基化率在不同Gleason评分和不同临床分期之间差异均无统计学意义（4～7分对8～10分：39．1％对50．0％．B、C期对D期：33．3％对53．3％，x^2=1．290和x^2=2．309，均P〉0．05）。GSTP1基因诊断敏感度最高为61．4%（35／57），特异度为97．1％（34／35）；RARβ2基因特异度最高为100％（35／35），敏感度为52．6％（30／／57）；DAPK基因的诊断敏感度和特异度分别为43．9％和91．4％（25／57和32／33）。而RARβ2、GSTP1和DAPK基因甲基化联合检测能明显提高前列腺癌诊断敏感度，但诊断特异度却有所下降。结论RARβ2、GSTP1和DAPK基因异常甲基化与前列腺癌的发生与发展相关，可作为前列腺癌的诊断有效指标之一。; 何晶晶毛易捷许刚吴伟陶志华沈默吴秀玲陈占国周武陈伟; 关键词：前列腺肿瘤基因 DNA甲基化

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浙江省自然科学基金(Y207516)

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