天津市教委科研基金(20110121)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
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- 胰岛素样生长因子-1和转化生长因子-β3对人肌腱细胞表型分化标志物mRNA表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的 观察在无血清条件下,不同浓度的胰岛素样生长因子（IGF）-1和转化生长因子（TGF）-β3在人肌腱细胞体外培养中对人肌腱细胞的表型及其标志物基因表达的影响.方法 在不添加胎牛血清（FBS）的α-MEM培养基中,加入IGF-1 （50μg/L）、TGF-β3（10 μg/L）以及IGF-1（50 μg/L）＋ TGF-β3（10μg/L）,同时使用10％的FBS作为阳性对照组,用天狼猩红染色细胞观察细胞第14天的表型变化,同时在细胞培养第14天提取各组细胞mRNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）测定人肌腱细胞表型及分化标志物Scleraxis、Tenomodulin、Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ）以及核心蛋白聚糖（Decorin）的基因表达.结果 在没有添加FBS的条件下,各实验组及对照组细胞形态均未出现表型变异,与阳性对照组的细胞比较,IGF-1（50 μg/L）＋TGF-β3（10 μg/L）组的细胞形态呈现出较强分化状态,有较多的胶原产生,同时胶原纤维的排列浓密有序并呈现出平型排列的胶原纤维形态,与阳性对照组极为类似.与阳性对照组比较,IGF-1（50tμg/L）＋TGF-β3（l0 μg/L）组的肌腱细胞表型标志物的基因表达比值明显上调（Scleraxis为132.5,=3.35,P＜0.01;Tenomodulin为536.3,t=115.89,P＜0.01;Collagen Ⅰ为5.22,t =5.94,P＜0.01及Decorin为1.40,t=5.67,P＜0.05）,差异有统计学意义.结论 在不使用FBS的α-MEM培养基中添加IGF-1（50 μg/L）＋TGF-β3（10μg/L）可维持人肌腱细胞表型,胶原纤维产生类似于添加10％ FBS培养的肌腱细胞,同时上调肌腱细胞的表型及分化标志物的mRNA表达.
- 姜月梅邱轶伟张鑫张鹏朱理玮
- 关键词：肌腱细胞转化生长因子-Β3
- 不同浓度血小板衍生因子BB和碱性成纤维细胞生长因子对人肌腱细胞增殖和胶原形成的影响被引量：5
- 2013年
- 目的观察低浓度血清条件下不同浓度的血小板衍生因子BB（PDGBB）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在人肌腱细胞体外培养中对人肌腱细胞的增殖和胶原形成的影响。方法在含0％和1％胎牛血清（FBS）的a—MEM培养基中，加入PDGFBB（5、10、50ug/L），bFGF（5、10、50ug/L）进行人肌腱细胞培养，10％FBS的培养组作为对照组。使用拉马拉蓝测定细胞增殖速度及天狼猩红染色定量肌腱细胞胶原产生。结果培养基内加入50ug/LPDGFBB＋50ug／LbFGF可以把FBS的使用量降至1％，并达到10％FBS的增殖速率（约4倍增加），差异无统计学意义（P〉0．05）；50ug／LPDGFBB＋50UG/LbFGF明显抑制肌腱细胞胶原形成（0．211±0．002）ug，与对照组比较[（0．485±0．068）ng]，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论使用50ug/LPDGFBB＋50ug／LbFGF添加于d—MEM培养基，可以把FBS使用量降至1％，不但可以达到10％FBS的增殖速率，还能够抑制肌腱细胞的胶原产生。
- 邱轶伟姜月梅张鑫张鹏朱理玮
- 关键词：肌腱细胞血小板衍生因子碱性成纤维细胞生长因子
- 不同浓度胰岛素样生长因子-1和转化生长因子β—3对人肌腱细胞存活和胶原合成的影响被引量：6
- 2012年
- 目的为肌腱组织工程筛选出一种优化的人肌腱细胞培养基，即使在不添加胎牛血清（fetalbovineserum，FBS）的条件下，通过优化培养基构成维持其存活并分化。方法在α—MEM培养基中，加入最佳组合的生长因子（growthfactors，GF），同时加入不同浓度的FBS（0、1％、5％和10％）和不同浓度的IGF-1（0、10、50ng／ml），TGFβ—3（0、1、10ng／ml），用拉马拉蓝染色法检测人肌腱细胞的生存情况、增殖速度，用天狼星红定量胶原合成。结果在无FBS情况下，含有10ng／mlTGFβ—3和50ng／mlIGF-1两种生长因子的α-MEM培养基中培养14d后，人肌腱细胞依旧存活（6228．68±43．87），高于其他实验组，但低于10％FBS对照组（13576．74±286．75，t=41．29，P〈0．05），胶原合成量[（0．322±0．003）ng]明显大于未添加生长因子组（t=4．13～5．93，P〈0．05）。结论添加50ng／mlIGF-1和10ng／mlTGFβ—3优化的α-MEM培养基可维持人肌腱细胞存活长达14d并促进肌腱细胞分化，而不必添加FBS。
- 邱轶伟朱理玮张鑫张鹏
- 关键词：细胞存活胶原胰岛素样生长因子I转化生长因子Β3
- 组合应用血小板衍生因子BB和碱性成纤维细胞生长因子对人肌腱细胞表型和表型及分化标志物mRNA表达的影响
- 2013年
- 目的观察不同浓度的血小板衍生因子BB（PDGFBB）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人肌腱细胞的表型和表型标志物基因表达的影响。方法在添加1％胎牛血清（FBS）的d—MEM培养基中，加入PDGFBB（50g／L）、bFGF（50μg/L）以及50μg/LPDGFBB＋50μg/LbFGF，使用10％的FBS为阳性对照，用天狼星红染色细胞观察细胞表型变化，在细胞培养第14天提取各组细胞mRNA，采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT—qPCR）的方法测定人肌腱细胞表型及分化标志物基因表达。结果在添加了1％FBS条件下，各实验组及对照组细胞形态均未发现表型变异，与阳性对照组比较，1％FBS＋50μg/LPDGF。B-4-50μg／LbFGF组的细胞形态呈现出较弱分化，产生胶原较少，胶原纤维的排列杂乱没有阳性对照那样的浓密有序及平型排列的胶原纤维形态。与阳性对照组比较，1％FBS＋50μg／LPDGF8B＋50μg／LbFGF组的肌腱细胞表型标志物的基因表达的比值明显下调[Scleraxis（Scx）和Decorin（Dcn）0．33，t=374．055；Tenomodulin（Tnmd）0．003，t=28199．418；I型胶原（ColI）0．57，f=164．195；Dcn0．26，t=177．520]，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论使用1％FBS的α-MEM培养基中添加50μg/LPDGFBB＋50μg／LbFGF可维持人肌腱细胞表型，胶原纤维产生较添加10％FBS培养的细胞明显减少，同时下调肌腱细胞的表型及分化标志物的mRNA表达。
- 邱轶伟姜月梅张鹏张鑫朱理玮
- 关键词：肌腱细胞碱性成纤维细胞生长因子
