国家科技重大专项(2008ZX10003-001)
- 作品数：34 被引量：238H指数：10
- 相关作者：吴雪琼张俊仙阳幼荣梁艳王兰更多>>
- 相关机构：解放军第309医院北京市结核病胸部肿瘤研究所吉林大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PCR-荧光探针法检测临床痰标本结核分枝杆菌的可靠性研究被引量：13
- 2012年
- 目的评价PCR-荧光探针法快速检测Mtb和非结核分枝杆菌(NTM)的临床应用价值。方法应用分枝杆菌核酸检测试剂对1015例痰标本和56株临床分离株进行检测,与Mtb核酸扩增(PCR)荧光(目前临床上认可惟一同类产品)检测结果进行比较。采用SPSS 11.5统计软件进行数据统计处理,采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果PCR-荧光探针法检测痰标本分枝杆菌灵敏度50.3%(373/741),特异度98.9%(271/274);菌阳肺结核标本检测灵敏度97.0%(257/265),菌阴肺结核标本检测灵敏度24.4%(116/476);1015份痰标本中检测出11例非结核分枝杆菌(NTM)核酸阳性标本(占1.1%),经16SrDNA测序确认,准确率100.0%。随机数字量表法抽取138例标本重复进行第2次检测,符合率100.0%。对56株临床分离株(1株Mtb临床分离株,55株NTM临床分离株)检测,准确率100.0%。对临床需要的226份标本同时与达安公司试剂盒检测结果比较,总体符合率95.1%(215/226),经统计学分析,两者之间差异无统计学意义(χ2=2.98,P=0.226)。结论PCR-荧光探针法可快速检测和区分痰标本Mtb与NTM,具有临床推广应用价值。
- 梁建琴高华方李洪敏赵智贤张广宇王金河王甦民刘佳文
- 关键词：分枝杆菌属聚合酶链反应荧光染料
- 结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
- 2012年
- 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子(Rpf)抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷(CFU)计数。结果 (1)疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平:Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E:51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ:Rpf D组(43.9±24.8)pg/ml,Rpf E组(45.9±21.0)pg/ml,BCG组(21.0±11.0)pg/ml,空质粒组(7.9±4.9)pg/ml,生理盐水组(4.7±2.1)pg/ml,空白对照组(5.8±4.7)pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义(F值分别为Rpf D:10.2;Rpf E:12.4;P值均<0.05),与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:15.6,17.8,17.3;Rpf E:17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。(2)淋巴细胞增殖实验CCK-8:Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E:11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验:Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:8.
- 邢爱英刘忠泉刘洋贾红彦李自慧郑晓静曹廷明杜凤娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：分枝杆菌细菌蛋白质类细胞因子类
- 结核分枝杆菌复苏因子E的真核表达及鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的 构建结核分枝杆菌复苏因子E基因的真核表达质粒.方法 PCR扩增结核分枝杆菌复苏因子E基因片段.将片段克隆至PcDNA 3.1（一）载体,重组质粒测序正确后,转染至CHO细胞中,表达复苏因子E蛋白质.RT-PCR检测克隆基因mRNA在真核细胞中的表达,收集并纯化表达的蛋白质,SDS-PAGE分析和Western blot分析检测目的 蛋白的表达,淋巴细胞增殖实验（CCK-8）鉴定表达蛋白的免疫原性.结果 成功构建了结核分枝杆菌复苏因子E基因的真核表达质粒.RT-PCR证实克隆基因mRNA在真核细胞中表达,SDS-PAGE分析和Western blot分析均证实目的 蛋白在真核细胞中成功表达,淋巴细胞增殖实验（CCK-8）进一步证实了表达蛋白具有免疫原性.结论 我们成功构建了复苏因子E真核表达系统.
- 刘忠泉邢爱英贾红彦李自慧郑晓静曹庭明杜风娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：真核表达中国仓鼠卵巢细胞
- 结核分枝杆菌rpoB基因突变与三种利福霉素类抗结核药物耐受相关性研究被引量：10
- 2016年
- 目的研究结核分枝杆菌(Mtb)rpoB基因突变与3种利福霉素类抗结核药物耐受之间的关系,了解Mtb对3种利福霉素类抗结核药物的耐药情况。方法 104例PNB、TCH鉴别培养Mtb阳性患者的临床标本通过绝对浓度法同时进行利福平(RFP)、利福喷丁(RFT)和利福布丁(RFB)药敏试验,并用基因芯片检测Mtb rpoB基因型。结果在104例患者临床标本中,传统药敏试验显示Mtb对RFP、RFT和RFB的耐药率分别为22.1%(其中高耐药率19.2%、低耐药率2.9%)、21.2%(其中高耐药率18.3%、低耐药率2.9%)、20.2%(其中高耐药率11.5%、低耐药率8.7%)。以传统药敏试验为对照,基因芯片检测rpoB基因突变预示RFP、RFT和RFB耐受的灵敏度分别为78.3%(18/23)、77.3%(17/22)和81.0%(17/21),特异性分别为88.9%(72/81)、87.8%(72/82)和88.0%(73/83)。结论 Mtb对3种利福霉素类抗结核药物耐受的一致率高,rpoB基因突变与3种利福霉素类药物耐受密切相关。应用基因芯片可快速检测其耐药基因型,指导临床合理用药。
- 刘银萍王杰张俊仙李洪敏吴雪琼
- 关键词：结核分枝杆菌RPOB基因基因芯片
- 化学发光法与酶联免疫吸附法检测血清抗结核抗体的比较研究被引量：9
- 2012年
- 目的比较化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)与酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)两种抗结核抗体检测试剂盒在结核病辅助诊断中的应用价值。方法分别用CLIA和ELISA检测试剂盒对360例血清标本中的抗结核抗体进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果 CLIA和ELISA两种检测试剂盒对260例活动性肺结核患者血清标本的检出率分别为71.2%(185/260)和58.5%(152/260),差异有统计学意义(P<0.05);100例健康人血清标本中两种试剂盒检测的阴性例数分别为89例和93例,两种试剂盒的特异性分别为89.0%和93.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在结核抗体检测中CLIA检测试剂盒与ELISA检测试剂盒的特异性无显著性差别,CLIA检测试剂盒灵敏度显著高于ELISA检测试剂盒。
- 阳幼荣吴雪琼张俊仙梁艳王兰
- 关键词：结核抗体酶联免疫吸附试验化学发光免疫分析
- 结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
- 2012年
- 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗（resuscitation-promoting factor DNA, Rpf-DNA）对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D（Rpf D—DNA）和复苏因子E（Rpf E-DNA）质粒疫苗，180只BALB／c小鼠（4周龄）分为6组，每组30只，分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫，H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子（Rpf）抗体、IFN—γ；Rpf D、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验；检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2；对肺组织进行病理学检测和细菌负荷（CFU）计数。结果（1）疫苗免疫组血清RpfD、RpfE抗体水平：RpfD组0．32±0．1，RpfE组0．39±0．1，BCG组0．02±0．01，空质粒组0．01±0．0，生理盐水组0．09±0．04，空白对照组0．03±0．01，RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义，F值分别为RpfD：45．6，43．2，45．1，45．7；RpfE：51．6，53．6，51．0，52．2：P值均〈0．01。血清IFN-γ：RpfD组（43．9±24．8）pg／ml，RpfE组（45．9±21．0）pg／ml，BCG组（21．0±11．0）pg／ml，空质粒组（7．9±4．9）pg／ml，生理盐水组（4．7±2．1）pg／ml，空白对照组（5．8±4．7）pg/ml，RpfD、RpfE质粒组与BCG组比较差异有统计学意义（F值分别为RDfD：10．2；RpfE：12.4；P值均〈0．05），与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义，F值分别为RpfD：15．6，17．8，17．3；RpfE：17．5，21．1，20．7P值均（0．01。（2）淋巴细胞增殖实验CCK-8：RpfD组176．0±4．2，RpfE组183．0±4．3，BCG组101．0±1．1，空质粒组100．0±6．8，生理盐水组104．0±8．4，空白对照组116．0±2．2，RDfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义，F值分别为RpfD：9．5，10．1，10．0，9．0；RpfE：11．2，12
- 邢爱英刘忠泉刘洋贾红彦李自慧郑晓静曹廷明杜凤娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：细菌蛋白质类细胞因子类
- 表观遗传和蛋白质翻译后修饰在细菌耐药中的作用被引量：6
- 2015年
- 日益严重的细菌耐药性有可能使人类重回前抗生素时代。细菌的耐药机理多样,深入研究细菌的耐药性形成机理有助于开发控制耐药细菌感染的新措施。表观遗传和蛋白质翻译后修饰在细胞代谢、信号转导、蛋白质降解、调控DNA复制、应激反应等方面都具有重要作用。近年来研究表明表观遗传和蛋白质翻译后修饰在细菌耐药中也扮演着重要的角色。本文总结了DNA甲基化、调控型RNAs等表观遗传因素和磷酸化、琥珀酰基化等蛋白质翻译后修饰因素在细菌耐药性中的调控作用,以期为抗生素靶标选择和抗生素开发设计提供新思路。
- 谢龙祥于召箫郭思瑶李萍Abualgasim Elgaili Abdalla谢建平
- 关键词：表观遗传DNA甲基化蛋白质翻译后修饰细菌耐药
- 用旋转式荧光定量PCR分析甲型H1N1流感病毒传播的特点
- 2010年
- 目的:探讨旋转式荧光定量PCR仪在检测临床标本中的应用价值。方法:通过旋转荧光定量-PCR技术对可疑病例的咽拭子、鼻拭子进行检测。结果2009年检测出甲流患者791例,检出率为38.79%(791/2039);甲型H1N1 157例,检出率为7.7%(157/2039),2010年1-6月检测出甲型H1N1为21例,检出率为1.44%(21/1455)。结论本地区甲型H1N1流感是以普通甲流感染为主,甲型H1N1流感混在其中,本地区的传播高峰是在2009年10月,甲型H1N1流感病毒在2010年来传播呈明显减弱趋势。
- 王安生李洪敏高华方王思贤赵智贤杨楠
- 关键词：甲型H1N1
- 应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性被引量：19
- 2011年
- 目的应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值。方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和50株耐利福平和异烟肼分离株的rpoB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照。结果应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株rpoB基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型。50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致。50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为-15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变;3株katG和13株inhAPCR-基因芯片与基因测序结果不一致。结论应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药。
- 张俊仙吴雪琼阳幼荣梁艳
- 关键词：利福平异烟肼寡核苷酸序列分析
- 结核分枝杆菌重组Mtb81蛋白抗原血清学诊断价值的研究被引量：4
- 2010年
- 目的研究重组Mtb81(rMtb81)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法应用基因工程技术表达、纯化rMtb81蛋白,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测192名健康者和210例肺结核患者血清中抗结核抗体。结果 rMtb81蛋白在大肠埃希菌细胞内以包涵体形式高效表达,表达量占菌体总蛋白的30%左右,相对分子量约80.7kD,具有良好的抗原特异性。在210例结核病患者血清中,103例菌阳患者和107例菌阴患者抗rMtb81抗体的阳性率分别为37.9%和41.1%,总的灵敏度为39.5%。在192例正常人血清中,95例PPD阴性者和97例PPD阳性者抗Mtb81抗体的阳性率分别为1.1%和6.2%。结论 rMtb81蛋白可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。
- 阳幼荣吴雪琼张俊仙梁艳张翠英董梅陈红兵何菊芳
- 关键词：血清学试验重组蛋白质类细菌蛋白质类
