国家教育部博士点基金(20115103110009) 作品数:11 被引量:54 H指数:6 相关作者: 吴卫 潘峰 胡博 王元彪 刘正琼 更多>> 相关机构: 四川农业大学 茂县农业局 四川省中医药科学院 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 医药卫生 更多>>
暗紫贝母产生物碱内生真菌的筛选及生物碱抑菌活性的测定 被引量:6 2012年 目的从暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia内生真菌中筛选产川贝母类生物碱及产活性生物碱的菌株。方法利用生物碱沉淀试剂和薄层层析(TLC)技术检测发酵液中的生物碱,采用平板打孔法分别测定生物碱碱粗提液的抑菌活性,结合形态学特征和ITS序列鉴定筛得的真菌。结果筛得5株能产生物碱的内生真菌(A1、A2、A3、A11、A14),其总生物碱对金黄色葡萄球菌均有抑制作用。其中,A1、A3、A14为镰刀属Fusarium sp.真菌,A2、A11属于粘帚霉属Gliocladium sp.真菌。结论筛选出的内生真菌产生的生物碱与暗紫贝母的不尽相同,但其抑菌效果效果显著,值得进一步研究。 陈鹊 王元彪 刘正琼 邵金凤 代勇 向丽 吴卫关键词:暗紫贝母 内生真菌 生物碱 抑菌活性 川贝母内生真菌抑制酪氨酸酶活性的研究 被引量:3 2017年 本研究通过测定分离自川贝母、瓦布贝母、甘肃贝母和暗紫贝母新鲜鳞茎的15株内生真菌无菌发酵液对酪氨酸酶活性的抑制率,初步评价其次生代谢物的美白活性;并以维生素C作为阳性对照,对抑制能力较强内生真菌发酵产物的石油醚(30~60℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取物的酪氨酸酶活性抑制率进行研究。结果表明,分离自瓦布贝母的内生真菌WBS020、1WBY2和7WBY2的无菌发酵液抑制酪氨酸酶活性的能力显著高于其它菌株,且高温处理后可保持一定稳定性。试验还发现,上述三株菌的乙酸乙酯和正丁醇萃取物对酪氨酸酶的抑制能力显著高于其石油醚萃取物;WBS020的正丁醇萃取物,1WBY2和7WBY2的乙酸乙酯萃取物都表现较强的抑制活性。除此之外,在质量浓度为8 mg/m L时,阳性对照维生素C的抑制能力显著强于其他萃取物,但1WBY2和7WBY2菌株乙酸乙酯萃取物对酪氨酸酶活性的抑制率也可达90.86%±0.81%和88.92%±7.13%,极显著高于其它两种萃取物。说明瓦布贝母内生真菌次生代谢物中存在着美白活性成分,具有潜在的开发利用价值。 苏天骄 吴超 刘琼 肖人峰 潘峰 吴卫关键词:川贝母 内生真菌 酪氨酸酶 瓦布贝母乙醚提取物GC-MS分析及其抗氧化活性评价 被引量:2 2015年 【目的】分析瓦布贝母鳞茎乙醚提取物中化学成分及其抗氧化活性。【方法】瓦布贝母鳞茎干、鲜样分别采用索氏提取法和超声提取法以乙醚为溶剂进行提取,并结合GC-MS分析其化学成分,用面积归一法研究其相对含量,再用DPPH自由基和ABTS+自由基清除法评价其抗氧化活性。【结果】超声提取法提取效率较好,从超声鲜样(CX),索氏鲜样(SX),超声干样(CG)和索氏干样(SG)的提取物中分别鉴定出69,58,73和57种成分,分别占其总成分百分比为62.16%,53.70%,65.18%和58.76%,占其总含量百分比为80.01%,68.91%,68.62%和74.89%。所得成分中十六烷酸、亚油酸乙酯、亚油酸和邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯为主要成分。此外,所有样品都表现出一定的自由基清除活性,CX、SX、CG和SG的DPPH自由基清除率的IC50分别为30.66、29.77、15.99和21.11mg/mL,ABTS+自由基清除率的IC50分别为35.72、21.08、23.40和15.45mg/mL。【结论】不同提取方法和不同样品状态对其主要成分的种类含量影响较小;4种测定样主要成分基本一致,但低含量的成分差别较大;并且瓦布贝母乙醚溶解成分有一定的抗氧化活性;所用GC-MS分析方法简便、快速、灵敏度高,结果可进一步促进对瓦布贝母药效物质基础的认识。 潘峰 张敏敏 董品利 吴卫关键词:瓦布贝母 超声提取 抗氧化活性 产生物碱的甘肃贝母内生真菌的筛选、鉴定及抑菌活性测定 被引量:7 2012年 为了探索甘肃贝母(Fritillaria przewalskii Maxim.)内生真菌的应用价值,以甘肃贝母为材料,研究其内生真菌生物碱类代谢产物的多样性及抑菌活性。利用生物碱沉淀反应和薄层色谱技术(thinlayer chromatograph TLC)检测生物碱类成分,依据平板打孔法测定其抑菌活性,结合形态特征和内转录间隔区(internal transcribed spacer ITS)序列鉴定菌株。从甘肃贝母的健康鳞茎中分离得到13株内生真菌,其中,菌株G6能产生多种生物碱物质。但薄层色谱分析表明,菌株G6代谢的生物碱成分与川贝类生物碱并不一致。测定其抑菌活性发现,总生物碱提取液对金黄色葡萄球菌有显著的抑制效果而对粪肠球菌的抑制作用中等。结合形态学特征及ITS序列信息,菌株G6被鉴定为镰刀菌属接骨木镰刀菌(Fusarium sambucinum)。虽然菌株G6并不能产生与寄主相同的生物碱物质,但其在新生物碱及抑菌化合物的开发利用方面具有一定的价值。 陈鹊 王元彪 刘正琼 邵金凤 吴卫关键词:内生真菌 生物碱 抑菌活性 植物内生真菌产多糖类天然产物研究进展 被引量:3 2020年 植物内生真菌作为一类重要的微生物资源,不仅可在植物组织内生活且不引起植物病变,还能产生大量具有活性的天然产物。植物内生真菌多糖作为一类重要的大分子天然产物,越来越多证据表明其具有重要的研究价值。植物内生真菌的来源、培养和发酵,植物内生真菌均一多糖的理化性质和结构特征等都与其多糖的生理活性密切相关。为此,从菌株选择、培养条件、多糖分离纯化、理化特征、生物活性和对植物的作用等方面对植物内生真菌多糖的研究进行了综述,以期为植物内生真菌多糖的生理生化作用、开发等深入研究提供参考。 潘峰 潘峰 侯凯 吴卫关键词:内生真菌 多糖 发酵培养 理化性质 瓦布贝母内生真菌共培养发酵产物抗氧化活性研究 被引量:1 2017年 采用DPPH自由基清除、ABTS自由基清除及FRAP铁离子还原能力三种方法对五株瓦布贝母内生真菌单培养、两两共培养无菌发酵液进行抗氧化活性研究,再测定活性较高组合发酵液的石油醚(30~60℃)、乙酸乙酯和正丁醇提取物的抗氧化活性,以维生素C作为阳性对照。结果发现在瓦布贝母内生真菌两两共培养中,4WBY1+WBS019、6WBY3+WBS019和WBS019+WBS020三个组合无菌发酵液的抗氧化活性至少在两项抗氧化方法评价下均极显著高于单培养。试验还发现,上述三个组合的乙酸乙酯提物和正丁醇提物的抗氧化活性较强;WBS019+WBS020组合的乙酸乙酯提物在1.8 mg/m L时,对DPPH自由基清除率可达74.38%±0.65%;6WBY3+WBS019组合的正丁醇提取物(IC_(50)=0.25 mg/m L)对ABTS自由基清除作用与维生素C(IC_(50)=0.07mg/m L)相对接近;三个组合的各提取物对Fe3+还原能力均较弱,远低于阳性对照。说明在适当条件下开展内生真菌共培养具有潜在利用价值。 苏天骄 窦明明 潘峰 吴卫关键词:瓦布贝母 内生真菌 共培养 抗氧化 瓦布贝母内生真菌Fusarium redolens 6WBY3多糖的理化性质及抗氧化活性 被引量:11 2017年 【目的】对瓦布贝母内生真菌芳香镰孢菌6WBY3胞外多糖及其抗氧化活性进行研究。【方法】利用液体发酵,有机溶剂脱脂,乙醇沉淀、大孔吸附树脂除色素,酶法和sevag法结合除蛋白、透析除盐等小分子物质、纤维素DE-52阴离子交换柱对胞外多糖进行分离;通过高效凝胶色谱-蒸发光检测器(HPGPC-ELSD)、紫外光谱(UV)、扫描电镜(SEM)、PMP柱前衍生高效液相色谱(PMP-HPLC)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)和氢核磁共振谱(~1H NMR)等方法对胞外多糖的理化特征进行研究;利用DPPH和ABTS自由基清除实验,铁离子螯合实验对其抗氧化活性进行研究。【结果】从菌株6WBY3发酵液中分离出2个均一的胞外多糖6WBY3EPS-3和6WBY3EPS-4,分子量分别约为17.41×10~6 Da和8.84×10~5 Da,主要单糖组分及摩尔比分别为甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=8.16∶4.96∶10.00,甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖=8.08∶1.71∶6.32∶10.00;SEM特征前者呈现不规则多边体结构,后者呈现规则四边体结构;FT-IR和~1H NMR结果表明6WBY3EPS-3含有丰富的半乳呋喃糖和甘露呋喃糖及少量的α-D-吡喃葡萄糖的酸性多糖,而6WBY3EPS-4同样主要为吡喃环糖,并且二者均含有α-和β-糖苷构型异头氢,均以α-构型为主。抗氧化研究结果表明多糖6WBY3EPS-3和6WBY3EPS-4有较弱的DPPH自由基清除能力,中等的ABTS自由基清除能力和中等的铁离子螯合能力。【结论】首次对瓦布贝母内生真菌6WBY3的胞外多糖进行了研究,该研究表明内生真菌6WBY3的胞外多糖具有良好的抗氧化活性,具有开发成抗氧化剂应用于医药食品等工业的潜力。同时本研究也可为其他内生真菌胞外多糖的研究提供理论参考。 潘峰 姚芸欣 唐鑫 吴卫关键词:内生真菌 胞外多糖 抗氧化活性 瓦布贝母内生真菌WBS020多糖理化性质和抗氧化活性 被引量:8 2019年 以一株分离自药用植物瓦布贝母的内生真菌Fusarium tricinctum WBS020为材料,对其胞外多糖进行研究。首先采用多种有机溶剂对WBS020发酵液进行脱脂除杂,用醇沉法获取粗多糖。随后用大孔吸附树脂法除色素,蛋白酶-Sevag联用法除蛋白质,半透膜法除盐等小分子物质,纤维素DEAE-52和Sephadex G-150柱色谱分离法获取纯化多糖。再用HPGPC-ELSD色谱法分析纯化多糖的均一性和平均相对分子质量,用PMP衍生法结合HPLC-DAD色谱法分析单糖组分,用UV、FT-IR分析多糖的部分理化性质。最后利用DPPH和ABTS自由基清除活性及亚铁离子螯合能力评价多糖的抗氧化活性。结果表明,经过一系列的提取分离纯化,得到一个胞外多糖主成分WBS020EPS1-2,其为含有少量结合蛋白质的纯度在95%以上的均一多糖,平均相对分子质量约为3.137×104,主要由甘露糖,鼠李糖,葡萄糖,半乳糖和阿拉伯糖以摩尔比0.43∶0.13∶10.00∶1.92∶0.11组成,同时,还含有一个未知成分,且单糖成分主要为α-构型链接的吡喃糖;此外,多糖WBS020EPS1-2对DPPH自由基清除活性较弱,而对ABTS自由基清除能力和亚铁离子螯合能力则较强,IC50分别为1.93 mg/mL和4.52 mg/mL。 潘峰 张慧慧 许晓燕 杨玉霞 吴卫关键词:胞外多糖 分离纯化 Simultaneous determination of 10 nucleosides and nucleobases from different cultivation years of Fritillaria unibracteata var. wabuensis by HPLC-DAD 被引量:5 2017年 Determination of nucleosides and nucleobases is important for the quality control of Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C. Hsia var. wabuensis (FUW) due to their physiological and pharmacological actions. In the present study, we developed a sensitive and reliable HPLC-diode-array detection method to simultaneously determine ten nucleosides and nucleobases, including cytosine, uracil, cytidine, uridine, thymine, adenine, inosine, guanosine, thymidine and adenosine. Complete separation of all the analytes was achieved on a Zorbax 300 A 300 Extend C18 column with a gradient of methanol-ultrapure water at a flow rate of 1 mL/min in less than 30 min. The diode-array detector wavelength was set at 260 nm for the UV detection of nucleosides and nucleobases. The optimized method provided good linearity (R2〉0.9993 for all the analytes), satisfactory precision (RSD〈3.715%), good repeatability (RSD_〈3.748%) and good recovery (RSD from 97.688% to 102.923%). In addition, the developed method was successfully applied to simultaneous determination of ten nucleosides and nucleobases from FUW, and their content changes of various cultivation time (1-7 years) were further analyzed for the first time. Our findings were useful for ensuring the cultivation time choice of artificial cultivation, quality control, pharmaceutical studies and clinical efficacy of FUW. 潘峰 吴卫 董品利 胡博 官玲亮 舒玲关键词:HPLC-DAD 川贝母内生真菌Fusarium tricinctum CBY11抗氧化活性及代谢成分研究 被引量:9 2017年 结合形态特征和分子生物学方法,将一株分离自川贝母鳞茎的内生真菌CBY11鉴定为Fusarium tricinctum。分别研究其发酵液石油醚提取物(PEE)、乙酸乙酯提取物(EAE)、正丁醇提取物(BAE)和乙醇提取物(ETE)的DPPH自由基清除活性、总抗氧化活性(以ABTS法测定)和总还原力(FRAP法测定),以及其总多酚含量(TPC)、总黄酮含量(TFC)和总皂苷(TSC)含量。结果发现EAE、BAE和ETE均具有较强的DPPH自由基清除活性(IC50分别为1.95mg/m L、1.19mg/m L、1.64mg/m L)和总抗氧化活性(IC50分别为0.43mg/m L、0.58mg/m L、0.43mg/m L),但总还原能力相对较弱;PEE的抗氧化活性整体较低。此外,EAE、BAE和ETE的TPC、TFC及TSC显著高于PEE(P<0.05)。可见TPC、TFC及TSC与抗氧化活性呈现出一定的正相关性。HPLC分析表明EAE含有多种具有较强抗氧化活性的酚酸等物质,如芹菜素。GC/MS分析表明PEE中含有少量抗氧化酚类物质,最主要成分是烷烯烃类。本研究表明川贝母内生真菌CBY11具有产生丰富抗氧化活性成分的能力,具有多种利用价值。 潘峰 苏天骄 邓克莉 伍微 吴卫关键词:川贝母 内生真菌 抗氧化活性 次生代谢产物 GC/MS