湖北省自然科学基金(2000J075)
- 作品数：12 被引量：34H指数：7
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- 肺生物基质及鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞影响的研究被引量：14
- 2002年
- 目的 研究细胞外基质 (ECM)对日本血吸虫培养细胞生存、生长的影响 ,佐证 ECM有利于培养细胞的生存、生长。方法 将虫龄 2 1d的日本血吸虫细胞接种于预先涂有肺生物基质、鼠尾胶的培养瓶和小盖玻片上常规培养 ,分别在光镜及扫描电镜下观察、拍照 ,并运用酶细胞化学方法进行培养细胞的乳酸脱氢酶 (L DH)染色。对照组未涂生物基质。结果 与对照组相比 ,实验组细胞饱满 ,弹性好 ,立体感强 ,存活时间长 ,L DH活性强 ,对高温具一定的耐受性 ;尤其是肺基质中培养的细胞 ,酶活性最强 ,培养 6 0 d的细胞仍观察到具有分裂能力。结论 ECM能改善日本血吸虫培养细胞生存、生长的微环境。实验组间比较 。
- 陈迪才董惠芬蒋明森朱俊勇钟沁萍
- 关键词：日本血吸虫培养细胞细胞外基质
- 日本血吸虫培养细胞磷酸酶细胞化学的动态变化被引量：4
- 2004年
- 目的 :研究体外培养的日本血吸虫成虫细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的变化规律。方法 :将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI16 4 0含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,培养 7,14 ,2 1,35和 4 9d时 ,分别运用改良的Gomori钙 -钴法和Gomori硫化铅法进行AKP和ACP染色。结果 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫成虫培养细胞的AKP和ACP活性均渐减弱。培养 2 1d后 ,所有培养细胞的AKP活性开始减弱 ;培养至 4 9d ,AKP阴性反应细胞所占比例增大 ,但仍有较多细胞具AKP活性 ;而ACP活性在培养 14d时 ,有的细胞显著增强 ,有的却明显减弱 ;培养至 35d ,所有细胞的ACP活性减弱 ,并出现ACP阴性反应的空泡状细胞 ;至 4 9d ,大部分细胞的ACP反应为阴性。结论 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫培养细胞的AKP、ACP活性均减弱 ,AKP、ACP活性的强弱可以作为评价血吸虫细胞培养条件优劣的指标 ;培养细胞呈分批、逐步退化。
- 蒋明森刘晴董惠芬朱俊勇钟沁萍
- 关键词：日本血吸虫培养细胞磷酸酶
- 日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究被引量：9
- 2004年
- 目的 通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法 联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmoL/L β-巯基乙醇和1mmoL/L丙酮酸钠。培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度。结果 日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞。统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数日,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高。统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标。日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能;
- 董惠芬彭延蒋明森明珍平钟沁萍
- 关键词：日本血吸虫细胞培养
- 细胞外基质促日本血吸虫培养细胞贴壁作用的研究被引量：9
- 2004年
- 目的 研究肝、肺生物基质及鼠尾胶三种细胞外基质 (ECM )对日本血吸虫培养细胞的促贴壁作用。方法 灌注法获取 2 1d虫龄的日本血吸虫虫体 ,冷消化法制备细胞悬液 ,将密度为 2× 10 6/ml的细胞悬液分别接种于均匀铺敷三种基质及未铺敷基质 (对照 )的各组培养瓶中进行培养 ,定时计数贴壁细胞数 ,计算贴壁率。结果 随着培养时间从 8h— 4 8h ,各组日本血吸虫细胞的贴壁率逐渐增高 ,4 8h后下降。同一培养时间 ,基质不同 ,细胞的贴壁率不同。培养 4 8h时细胞的贴壁率 ,鼠尾胶组、肝与肺基质组分别为 6 3 2 7%、4 8 95 %、4 5 36 % ;统计学处理发现 ,它们之间差异显著 ;鼠尾胶组与肝、肺基质组比较 ,p <0 0 1;肝与肺基质组之间比较 ,p <0 0 5 ;对照组与各基质组比较 ,均具显著差异 (p <0 0 1)。 结论 ECM对日本血吸虫培养细胞具有明显的促贴壁作用。其中 ,鼠尾胶对日本血吸虫细胞的促贴壁作用最强 ,其次是肝生物基质 ;肺生物基质的促贴壁作用相对较弱 ,但也强于对照组 (p <0 0 1)。
- 朱俊勇董惠芬蒋明森钟沁萍张兆仁胡世全
- 关键词：细胞外基质日本血吸虫细胞培养细胞贴壁
- 基质对日本血吸虫培养细胞SDH和LDH影响的研究被引量：16
- 2002年
- 目的 研究细胞外基质 (ECM)对日本血吸虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (L DH)代谢活力的影响 ,筛选适合培养细胞存活、生长的生物基质。 方法 将虫龄 2 1d的日本血吸虫细胞接种于预先涂有肝、肺、鼠尾胶等不同生物基质的小盖玻片上常规培养 ,运用酶细胞化学方法 ,在培养第 3d进行 SDH染色 ,第 7d作 L DH染色 ,显微镜观察并拍照 ,图像分析仪测定其含量 ,并作统计分析。 结果 不同 ECM培养的细胞 ,其 SDH、 L DH活性不同 ,着色颗粒颜色按对照组、鼠尾胶组、肺基质组、肝基质组依次加深。定量分析结果显示 ,肝、肺基质组培养细胞 SDH含量与对照组差异显著 (P<0 .0 1) ,而鼠尾胶组与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 )。各基质组培养细胞的 L DH含量与对照组比较 ,差异显著 (P<0 .0 1) ;各基质组之间两两比较差异亦具有显著性。肝基质组培养细胞内两种酶含量最高。 结论 肝基质最适合日本血吸虫培养细胞的存活与生长。
- 朱俊勇董惠芬蒋明森钟沁萍刘晴
- 关键词：基质日本血吸虫琥珀酸脱氢酶
- 肝基质与MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究肝基质与甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质的影响。方法日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片（实验1组）和铺敷有肝基质的小盖玻片上（随机分为实验2组和3组），培养于含20％小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。培养第4d，实验1组和3组细胞分别在含3μg/ml MNNG的常规培养基中培养48h，彻底清洗后继续用常规培养基培养；实验2组细胞用不含MNNG的常规培养基处理相同时间。培养第4w。均换用含5％小牛血清的低血清培养基培养。培养第5～7w，每周取各组细胞进行高碘酸雪夫（PAS）染色和唾液淀粉酶处理后的PAS染色，观察培养细胞内糖类物质的含量及分布变化。取培养第6w（MNNG作用后第5w）的各组染色细胞，用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖含量的光密度，并作统计学分析。结果实验3组细胞与实验1、2组比较，PAS染色显示的四种类型细胞其着色均显著增强，淀粉酶处理后的PAS染色显示细胞内糖原含量增多，差异均具显著性（P〈0．01）。培养过程中，第二类细胞数目逐渐增多，体积增大；分裂细胞增多。这种状况在MNNG处理后第5w最为明显。结论肝基质和MNNG联合可显著增强日本血吸虫培养细胞的糖代谢和分裂增殖能力，二者具协同作用能力。
- 明珍平钟沁萍董惠芬蒋明森张兆仁
- 关键词：日本血吸虫培养细胞肝基质甲基硝基亚硝基胍
- 日本血吸虫培养细胞内糖类物质的动态变化及肝基质对其的影响被引量：4
- 2005年
- 目的研究日本血吸虫成虫培养细胞内糖类物质的动态变化以及肝基质培养对其的影响。方法将虫龄为32d的日本血吸虫成虫细胞随机分为2组,实验1组(普通组)细胞接种于普通小盖玻片上,实验2组(肝基质组)细胞接种于预先铺敷有肝基质的盖玻片上,细胞培养基为RPMI-1640(含20%小牛血清附加常量抗生素)。每周取各组细胞进行高碘酸雪夫(PAS)染色和淀粉酶处理后的PAS染色,观察培养细胞内糖类物质的水平及分布变化。在培养第1周和第5周分别取2组染色细胞,用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖水平的A值,并做统计学分析。结果随着培养时间的延长,实验1组的4种类型细胞的糖水平逐渐减少,细胞内不含糖原;而实验2组细胞的糖原和糖类物质逐渐增加。培养第1周,2组细胞几乎均不含糖原,但实验1组细胞的糖水平高于实验2组,差异有统计学意义(u=7.10,P<0.01)。培养第5周,实验1组细胞糖原仍甚少,而实验2组细胞的糖原水平明显增加(u=9.32,P<0.01);并且实验2组细胞的糖水平显著高于实验1组细胞(u=16.89,P<0.01)。培养过程中,实验1组未见分裂细胞,但实验2组可观察到分裂细胞。结论日本血吸虫培养细胞内糖类物质随培养时间的延长逐渐减少;肝基质能增强培养细胞合成糖物质和生长增殖能力。
- 明珍平董惠芬钟沁萍刘昌军蒋明森张兆仁
- 关键词：组织细胞化学细胞外基质
- 日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学的研究被引量：5
- 2002年
- 目的 :研究日本血吸虫成虫培养细胞内的糖类物质。方法 :将 32d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液 ,接种在小盖玻片上 ,置含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的RPMI 16 4 0培养基中培养 ;至培养第 6d ,用高碘酸雪夫 (PAS)法显示培养细胞中的糖类物质 ;阿新蓝 PAS法显示培养细胞中的酸性粘多糖 ;用淀粉酶处理后的PAS染色以鉴定细胞内的糖原。在Olympus BH2 显微镜下观察 ,统计细胞类型 ,拍照 ;HPIAS 2 0 0 0图像分析仪测定含量 ,统计分析不同细胞类型间的差异。结果 :日本血吸虫成虫培养细胞的类型不同 ,所含的糖类成分有所不同 ,有较多培养细胞内既有糖原 ,也有酸性粘多糖 ,以及中性粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等其它糖类物质 ;大多数细胞几乎不含糖原和酸性粘多糖 ;另有少数细胞仅含糖原和酸性粘多糖 ,以糖原为主 ,极少数细胞以酸性粘多糖为主。结论 :日本血吸虫成虫培养细胞内既含糖原 ,也含酸性粘多糖 ,以及中性粘多糖、粘蛋白、糖蛋白。
- 刘昌军董惠芬蒋明森钟沁萍朱俊勇
- 关键词：日本血吸虫成虫培养细胞糖类细胞化学
- β-巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响被引量：14
- 2004年
- 目的研究β鄄巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响。方法将18d虫龄的日本血吸虫童虫细胞联合法接种于小盖玻片上。实验被随机分为4个组,分别为对照组、β鄄巯基乙醇组、肝基质组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组。培养第7天,对各组细胞进行核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)与乳酸脱氢酶(LDH)细胞化学染色,并结合图像分析比较4个组培养细胞的AgNORs水平及LDH活性。结果与对照组比较,肝基质组、β鄄巯基乙醇组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组培养细胞的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度以及LDH的平均光密度等4个参数均有不同程度升高(P<0.01)。其中,以β鄄巯基乙醇组培养细胞的4个参数升高最显著,β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组次之,肝基质组升高幅度最小。统计学分析显示,除β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组与β鄄巯基乙醇组之间的AgNORs及LDH平均光密度两两比较差异无显著意义(P>0.05),其余组间3个参数两两比较差异均有显著意义(P<0.01或P<0.05)。结论β鄄巯基乙醇与肝基质均能促进日本血吸虫培养细胞的增殖、代谢,但β鄄巯基乙醇的作用比肝基质显著;二者联合使用对培养细胞的增殖无协同作用。
- 彭延董惠芬蒋明森钟沁萍胡世全
- 关键词：肝基质日本血吸虫细胞培养乳酸脱氢酶
- 日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统形态及基质对其结构的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 研究日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统的三维结构及细胞外基质 (ECM)对其的作用。方法 用高锰酸钾作固定剂 ,制备日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统标本 ,扫描电镜下观察。结果 日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统由膜性小管、小泡相互连接构成小型扁囊样网络结构。基质中细胞的内质网膜系统较对照组发达、丰富 ;基质的种类不同 ,培养细胞内质网膜系统的形态各异。鼠尾胶中细胞多由膜性小管和小泡构成 ,其网眼数目较少 ,可见伪足样结构 ;伪足较短 ,也由膜性小管或小泡构成管囊状网络。肺基质中细胞几乎均为小管 ,小泡极少 ;网眼和伪足数目增多 ,伪足呈针状。肝基质中细胞的内质网膜系统与肺基质中的相似 ,但网眼和伪足数目更多 ,伪足细长 ,呈纤维状。结论 ECM可明显影响日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统形态 ;ECM的种类不同 。
- 董惠芬朱俊勇钟沁萍明珍平蒋明森徐明星
- 关键词：日本血吸虫培养细胞整装细胞外基质
