安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2012A161)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王林定曾宪聪汪小五张莹刘淑均更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽医科大学第一附属医院安庆市第一人民医院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定
- 2014年
- 目的选用人巨细胞病毒(HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒,诱导其表达,纯化目的蛋白;并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列,设计合理引物;各基因片段用Overlap方法连接,并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株,经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化,获得目的蛋白,采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白,采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HCMV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒,并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。
- 曾宪聪汪小五陈伟王林定
- 关键词：人巨细胞病毒免疫反应性
- 安徽省安庆地区卡波肉瘤相关疱疹病毒感染的危险因素分析被引量：3
- 2014年
- 目的探讨安徽省安庆地区卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 006份普通健康人群血清进行KSHV抗体检测。结果在检测的1 006份血样中,KSHV抗体的总阳性率为5.3%,其中男性为5.6%,女性为5.5%。KSHV感染率与梅毒感染有显著相关性,但是其与年龄、性别、血型及乙肝五项间无明显相关性。结论中国安徽安庆地区的普通健康人群KSHV的感染率较低,其中KSHV的感染率与性病梅毒感染具有显著相关性。
- 段强张莹曾宪聪汪小五吴悦杜爱能刘璐璐陈振刘淑均李进王林定
- 关键词：血清阳性率
- 安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究被引量：6
- 2013年
- 目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检测的1 008份血样中,KSHV抗体的总阳性率为4.3%,其中男为3.9%,女为4.6%。统计学分析结果显示,KSHV感染率没有性别差异,在年龄上也基本无差异。结论在中国安徽北部地区的普通人群KSHV的感染率较低,且KSHV的感染与年龄及性别之间无明显相关性。
- 张莹曾宪聪汪小五刘淑均李进王林定
- 关键词：血清阳性率
- 肺炎支原体P1蛋白的制备及其应用的初步研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究肺炎支原体(MP)特异性抗原免疫反应性及检测合肥地区138份儿童血清样本感染MP的情况,并初步分析其危险因素。方法构建含r P1-513基因的克隆和表达质粒分别命名为T-r P1-513和PQE-80L-r P1-513。诱导PQE-80L-r P1-513重组菌蛋白表达。Western blot法检测其免疫反应性和ELISA法筛选血清样本感染MP的阳性标本。结果 Western blot法检测约30 ku的r P1-513蛋白有免疫反应性。ELISA法筛选出34份阳性血清,同时用商业MP ELISA试剂盒检测出24份阳性血清,两种P1蛋白作为抗原ELISA检测法检出率分别为24.6%和17.4%,且两个检出率差异有统计学意义(P<0.05)。MP感染与C-反应蛋白有显著相关性,但与性别、年龄、白细胞无相关性。结论初步证明r P1-513蛋白具有免疫反应性,且以此蛋白构建的ELISA法有较高的灵敏度和特异性,为临床诊断MP提供一定的帮助。
- 汪小五曾宪聪陈伟王林定
- 关键词：肺炎支原体儿童
- 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒亚型分析研究被引量：2
- 2012年
- 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒为双链DNA病毒,基因组全长为160～170 kb。该病毒基因最早于1994年由美国哥伦比亚大学病理学家Chang等用代表性差异分析法首先在艾滋病患者并发的卡波氏肉瘤组织中发现。常用于KSHV亚型分析的基因片段有:ORF26、ORF75、K1、K15等。基于ORF26分型,最初采用的是330 bp和233 bp的ORF26基因片段,可将KSHV分为A、B、C三个亚型。目前,根据K1基因的多态性,主要将KSHV分为A、B、C、D、E、F亚型,各亚型在氨基酸水平上具有15%～30%的区别。目前,已知的K15有3个等位基因,分别是:P亚型、M亚型和N亚型。其中,N亚型与M型的核苷酸水平差异则高达90%。基于ORF75可以将KSHV分为A、B、C及N亚型。其中,A亚型主要流行于经典的KS患者,而B、C亚型主要见于非洲地区,同时所有亚型都在美国AIDS相关的KS患者中有发现。
- 张莹欧阳新星曾先聪俞海洋李进刘淑均王林定
- 关键词：K1亚型分析
- 卡波肉瘤相关疱疹病毒ORFK12蛋白初步研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORFK12基因在大肠杆菌的表达及表达的蛋白在普通人群中检测KSHV的感染情况。方法设计一对特异性引物,以BCBL-1细胞总DNA为模板,采用PCR方法扩增KSHV ORFK12基因。构建含目的基因的重组质粒命名为PQE-80L-K12和诱导蛋白表达。采用ELISA法和Western blot法筛查临床收集的血清标本中感染KSHV的情况。结果异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后的PQE-80L-K12重组菌经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示有一个约10 ku的融合表达蛋白为ORFK12蛋白。采用ELISA法和Western blot法检测显示ORFK12蛋白能与KSHV阳性血清反应。结论 KSHV ORFK12基因在大肠杆菌中表达,表达的ORFK12蛋白在实验室检测感染KSHV有一定的辅助作用。
- 汪小五曾宪聪陈伟张莹吴悦杜爱能刘璐璐王林定
