广东省自然科学基金(021798)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 带有引导序列的抗-D抗体可变区基因的扩增和序列分析被引量：1
- 2003年
- 目的 :从引导区扩增获得高度特异性和亲和力的抗 -D抗体的可变区基因 ,并进行序列分析。方法 :提取 1株分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株的总RNA ,从引导区设计引物 ,RT -PCR扩增抗 -D抗体的可变区基因 ,分别对扩增产物进行分子克隆和测序。结果 :用重链引物和轻链引物分别扩增出 4 4 0bp和 4 10bp的特异带。序列分析表明 ,其核苷酸及其所推导的氨基酸 (AA)序列符合人Ig可变区基因的序列特征。结论 :获得了抗 -D抗体可变区基因 ,为基因工程抗 -D的研制及Rh新生儿溶血病的预防提供物质基础。
- 曹开源付涌水徐霖袁广卿黄小荣戴淑琴汤永平
- 关键词：抗体单克隆聚合酶链反应可变区基因基因扩增RH新生儿溶血病
- 抗-D抗体Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:于大肠杆菌表达抗-D抗体Fab段基因,为真核载体表达完整的人抗-D抗体奠定基础。方法:将已克隆测序的Fab段基因亚克隆到pComb3噬粒载体,用PCR和限制性内切酶酶切鉴定后于大肠杆菌进行表达,表达产物用SDS-PAGE和ELISA等方法分析。结果:SDS-PAGE电泳表明重组克隆表达了1条约48kD的蛋白条带,ELISA结果显示,所表达的抗体和Rh+的人红细胞呈阳性反应,和Rh-红细胞反应为阴性,阴性对照和Rh+及Rh-红细胞反应均为阴性。结论:于大肠杆菌表达了具有抗原结合特性的人抗-D抗体Fab段抗体分子。
- 付涌水江朝富李树浓徐霖袁广卿曹开源
- 关键词：抗体抗-D基因克隆基因表达大肠杆菌
- 人源性抗-D基因工程抗体在真核细胞CHO中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的于真核细胞系CHO细胞中表达人源性抗-D基因工程抗体,为人源性抗-D基因工程抗体在临床上的应用打下坚实的基础。方法脂质体法将真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选阳性克隆细胞。通过ELISA法检测培养上清中人IgG的表达量。应用化学发光WesternBlotting法对真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO细胞中的表达进行鉴定。结果pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选12～14d后有阳性克隆长出,未转染细胞则全部死亡。筛选出的各阳性细胞克隆经扩大培养及ELISA定量检测其上清人IgG含量最高为4.05ng/ml。WesternBlotting显示上清和细胞内均有人IgG重链和轻链的表达。结论所构建的真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO真核细胞系表达成功,可产生人源化的IgG重链和轻链。
- 曹开源徐霖付涌水袁广卿黄小荣
- 关键词：抗-D抗体真核表达载体基因表达
- 完整人抗-D抗体分子表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础。方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和к轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定。结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功。结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体。
- 付涌水江朝富曹开源李树浓
- 关键词：抗-D抗体
