国家自然科学基金(308013540)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- PDECGF-siRNA诱导膀胱癌细胞凋亡机制的探讨
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰技术沉默血小板源性内皮生长因子基因(platelet-derived endothelial cell growth factor,PDECGF)表达诱导人膀胱癌细胞凋亡的机制。方法针对人PDECGF mRNA序列设计合成编码干扰RNA(siRNA)的DNA模板,siRNA;构建含RNA聚合酶启动子Ⅲ转录载体pRNAT-U6/Neo并能形成发夹结构小干扰RNA(siRNA)的psiPDECGF质粒;用其转染人膀胱癌T24细胞株,采用RT-PCR、Western印迹法观察转染前后PDECGF基因及相关基因表达变化,采用凋亡DNA琼脂糖凝胶电泳及吖啶橙/溴化乙啶染色法观察细胞凋亡。结果显示PDECGF siRNA对膀胱癌T24细胞中PDECGF基因表达产生明显抑制作用;转染psiPDECGF-2细胞组PDECGF mRNA水平明显降低,上述重组质粒可诱导T24细胞凋亡,同时caspase-3、p53蛋白水平明显增高。结论证实psiPDECGF-2可抑制PDECGF在T24细胞的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。其机制与caspase-3、p53蛋白水平表达增高有关。
- 金宁张灵肖博晗孔祥波
- 关键词：膀胱癌RNA干扰凋亡
- PDECGF特异性RNA抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究
- 2009年
- 目的利用RNA干扰技术在裸鼠膀胱癌动物模型中通过抑制靶向沉默血小板源性内皮生长因子基因(PDECGF)的表达,探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用。方法将psiPDECGF-1及-2稳定转染的阳性T24细胞株及其他对照组直接接种于裸鼠皮下,观察肿瘤细胞生长及成瘤情况、测定肿瘤体积的变化;免疫组化检查PDECGF蛋白表达;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果裸鼠体内成瘤实验发现siRNA2组第21天时成瘤率只有50%,而其他各组成瘤率为100%。siRNA2组生长速度明显慢于其他3组,siRNA2组不仅成瘤延迟,且生长速度明显慢于其他3组(P<0.01)。免疫组化证实siRNA2组肿瘤组织PDECGF蛋白表达最低;TUNEL检测siRNA2组细胞凋亡数明显多于其他3组(P<0.05)。结论PDECGF siRNA载体稳定转染细胞株体内实验可见膀胱癌细胞成瘤率降低,成瘤延迟及肿瘤生长速度减慢,癌细胞凋亡增多。PDECGF siRNA在裸鼠体内依然对膀胱癌细胞有明显抑制作用。
- 金宁张灵肖博晗常喜华
- 关键词：膀胱癌RNA干扰
