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1株EV71临床分离株的全基因组序列测定和结构分析及对乳鼠致病性研究被引量：3: 2012年; 目的利用课题组前期分离获得的EV71临床分离毒株,对其全基因组序列测定及分析,建立EV71感染的动物模型,分析其基因序列与致病性的关系。方法利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE)分段扩增EV71全长基因,对各扩增片段进行克隆和测序;用软件MEGA 5、RNAstructure 5.3进行基因组结构及特点分析;腹腔注射毒株建立EV71感染的ICR乳鼠模型。结果得到3个部分相互重叠并涵盖全基因组的重组质粒,测序后拼接成全基因序列,命名为EV71 BC08株存入GenBank(JQ514785)。序列分析表明BC08株为EV71C4a基因亚型,其5′非编码区(5′UTR)A627点突变可能影响病毒5′UTR二级结构。BC08株能感染乳鼠并导致其出现神经系统症状,病理学研究表明受染乳鼠肌肉和大脑组织有病毒VP1蛋白表达。结论 BC08毒株基因组全长7 406bp,为C4a亚型,与近年我国EV71流行株有很高的同源性(>95%),但A627点突变可能影响病毒5′UTR二级结构及功能。BC08毒株可感染乳鼠并致病,这对该临床分离株的致病能力提供了直接证据,也为建立EV71感染的乳鼠模型奠定基础。; 刘静陈路佳郭基涛张浩朱萌高萌徐萍彭宜红; 关键词：肠道病毒71型病毒致病性

细胞ERK/MAPK通路参与人类RNA病毒复制致病作用的研究进展被引量：1: 2012年; 病毒与宿主细胞间存在着复杂的相互作用关系,其中细胞信号通路是参与相互作用过程的重要因素。细胞外调节蛋白激酶（extracellular regu-lated protein kinases,ERK）是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路家族中的一个重要信号通路。; 何嘉勰段昊彭宜红; 关键词：ERK信号通路 RNA病毒病毒复制

细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用被引量：4: 2008年; 基于细胞Raf/MEK/ERK信号通路与病毒复制的关系,应用Western印迹检测p-ERK1/2蛋白的表达、用终点滴定法测定病毒增殖量(TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(CPE)等,揭示单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制与ERK通路的关系.结果表明,HSV-2的复制可引起细胞ERK通路的活化;用U0126预先抑制ERK通路的活化,或用特异性siRNA敲减MEK1/2基因的表达可显著地抑制病毒复制.提示ERK信号通路以及MEK1/2蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.该研究对进一步阐明细胞ERK通路各激酶蛋白在病毒复制中的作用机制、寻找抗病毒作用靶标等奠定了良好的基础.; 屠静张浩周琦王波曹眸黄海彭宜红; 关键词：ERK信号通路小干扰RNA

MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制被引量：4: 2010年; 为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础.; 王波丁丽新邓娟张浩朱萌易婷刘静徐萍鲁凤民彭宜红; 关键词：肠道病毒71型细胞外信号调节激酶通路

下调细胞P21^(WAF1/CIP1)基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制被引量：6: 2009年; 为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type2,HSV-2)复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制P21基因表达,应用Western印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平,用终点滴定法测定病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)等3个方面,揭示细胞P21蛋白水平的变化对病毒复制的影响.结果表明,HSV-2在细胞内复制时可引起P21蛋白水平增高;而用特异性siRNA下调细胞P21基因表达时,可显著地抑制HSV-2gB蛋白水平,减少培养细胞上清液中病毒TCID50.提示P21蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.; 周琦张浩王波彭宜红屠静朱萌徐萍; 关键词：P21蛋白小干扰RNA

ERK信号通路:病毒感染依赖的宿主机制及潜在抗病毒靶标被引量：5: 2012年; 细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）通路是20世纪80年代初发现的丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedprotein kinase,MAPK）家族中的一个重要成员,由Raf、MEK（MAPK/ERK kinase）、ERK三个不同层级的激酶蛋白组成,并依次顺序激活。; 彭宜红; 关键词：ERK信号通路病毒小分子抑制剂

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国家高技术研究发展计划(2007AA02Z317)