国家重点基础研究发展计划(2005CB522408)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 相关作者：于力刘春蕙谭业辉王畅王冠军更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院吉林大学第一医院上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路对人结肠癌细胞增殖及相关基因的影响被引量：7
- 2007年
- 目的探讨野生型 RAF 和 MEK 持续激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路(ERK-MAPK)对人结肠癌细胞增殖及细胞周期相关基因的影响。方法培养人结肠癌细胞系SW1116,脂质体介导 RAF、MEK 基因和空质粒转染,G418筛选阳性克隆。流式细胞仪分析细胞周期,光学显微镜下观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,生长曲线和软琼脂集落形成检测细胞增殖,实时定量 PCR 检测 p21^(WAF1)和 p16^(INK4A)及癌基因 c-myc 转录水平。结果建市稳定表达 RAF 或 MEK 的细胞系,RAF 或 MEK 高表达均能明显降低 G_0/G_1期细胞百分比,促进细胞周期由 G_1向 S 期进行,增加 DNA 合成的 S 期细胞百分比,细胞活力和增殖力升高3～4倍,细胞分裂增殖旺盛。转染 RAF/MEK 质粒后,细胞均呈现 p21^(WAF1)和 p16^(INK4A)转录水平降低,c-myc 转录水平升高。结论 ERK-MAPK 信号通路激活可下调细胞周期相关基因 p21^(WAF1)和 p16^(INK4A)表达,并上调 c-myc表达,减少 G_0期时相,加速 G_1/S 期转化,促进细胞增殖。
- 王霞陆嵘房静远
- 关键词：结肠肿瘤有丝分裂素激活蛋白激酶类细胞增殖
- 转录因子E2F1调控KIR3DL1基因表达的分子机制被引量：1
- 2008年
- 目的研究转录因子E2F1对KIR3DL1基因启动子转录活性的影响，明确其调控KIR3DL1基因表达的分子机制。方法采用PCR方法从K562细胞基因组DNA中扩增突变型KIR3DL1基因启动子序列，将产物连接到pGL3-Basic荧光素酶载体，构建报告重组子；采用染色质免疫共沉淀方法检测E2F1与KIR3DL1启动子在细胞内的结合；采用阳离子脂质体SuperFect包裹突变型和野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子，然后转染K562细胞，染色质免疫共沉淀方法检测E2F1与重组子在细胞内的结合，双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性；将E2F1真核表达载体与野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子共转染K562细胞，双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果成功构建突变型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子，测序证实，在K562细胞KIR3DL1启动子区1个潜在的转录因子E2F1结合位点有1个自然发生的点突变（TTTGGCGC→TrCGGCGC）；E2F1完全不能与K562细胞中突变型KIR3DL1启动子结合，但能与NK-92MI细胞中没有突变的野生型KIR3DL1启动子结合；突变型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子保留了部分与E2F1的结合能力，但其相对荧光素酶活性较野生型降低了50％；共转染E2F1真核表达载体使野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子的相对荧光素酶活性增加为对照组的2倍以上。结论转录因子E2F1参与调控KIR3DL1基因转录激活，E2F1结合位点上CpG二核苷酸的数量和甲基化模式可能影响转录因子E2F1与靶序列的结合。
- 高晓宁于力
- 关键词：基因KIR3DL1转录因子E2F1基因表达
- 急性白血病ZO-1基因表达与甲基化调控关系的研究被引量：12
- 2007年
- 目的探讨人急性白血病细胞系与正常骨髓细胞中ZO-1基因启动子区甲基化状态的差异及其与基因表达的关系。方法应用反转录聚合酶链反应的方法观察3种人白血病细胞株HL60、NK92、Molt4及正常人骨髓有核细胞中ZO-1基因的表达情况;应用甲基化特异性聚合酶链反应的方法分别检测其ZO-1基因启动子区的甲基化状态;应用去甲基化药物处理HL-60细胞,观察处理后ZO-1基因甲基化状态及基因表达的变化。结果在10例正常骨髓细胞均可发现ZO-1基因表达,而在3种白血病细胞系中未见其表达;正常骨髓细胞中ZO-1基因启动子区无甲基化,而在3种白血病细胞中呈完全甲基化;应用去甲基化药物处理HL-60细胞使其ZO-1基因启动子区去甲基化,可重新诱导ZO-1基因的表达。结论ZO-1基因的表达受甲基化状态调控,ZO-1基因可能与白血病发生相关。
- 王畅谭业辉王冠军李薇窦立萍康惠媛刘春蕙于力
- 关键词：白血病早幼粒细胞急性ZO-1甲基化
- 蛋白激酶C-δ阻断剂Rottlerin对人结肠癌细胞的影响及其机理被引量：4
- 2006年
- 目的研究蛋白激酶C-δ(PKC-δ)阻断剂Rottlerin对人结肠癌细胞的影响及其机理。方法培养人结肠癌细胞SW1116,以Rottlerin 10μmol／L干预24 h,并以DMSO为对照。以定量RT- PCR检测DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,Dnmt)1、3a、3b和抑癌基因APC、p21WAF1和p16INK4A基因转录水平;流式细胞仪分析细胞周期;光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果PKC-δ阻断剂Rottlerin可抑制Dnmt1和Dnmt3a表达,上调APC、p21WAF1和p16INK4A转录;Rottlerin明显增加G0／G1期细胞百分比(P=0．02),显著降低G2／M期细胞百分比(P=0．01);Rottlerin可使细胞胞浆增加,体积增大,细胞变得肿胀,轮廓模糊,细胞核分裂相明显减少。结论PKC-δ阻断剂Rottlerin通过调控DNA甲基化水平以及阻断MAPK途径,抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖。
- 陈朝飞房静远翁玉蓉孙丹凤王霞陆嵘
- 关键词：ROTTLERIN人结肠癌细胞
- 5-氮杂胞苷可通过降低K562细胞miRNA-17-19b的表达抑制细胞增殖
- 2010年
- 本研究探讨miRNA-17-19b在不同细胞系的表达差异。用5-氮杂胞苷(5-aza)处理miRNA-17-19b表达水平相对较高的K562细胞系,观察其对miRNA-17-19b表达水平的影响。提取K562细胞系、HL-60细胞系、NB-4细胞系、HeLa细胞系、慢性髓系白血病(CML)病人外周血白细胞及动员后的正常人外周血白细胞总RNA,在多聚腺苷酸(ployA)加尾后进行逆转录,用荧光时实定量PCR的方法检测以上细胞miRNA-17-19b的相对表达水平。分别在24、48、72小时用2.5μmol/L的5-氮杂胞苷处理K562细胞系,在96小时后收集细胞,用荧光时实定量PCR的方法检测处理前后miRNA-17-19b的表达水平变化。抑制miR-19a在K562细胞系的功能,观察其对K562细胞增殖的影响。结果表明:K562细胞系及CML病人外周血白细胞的miRNA-17-19b的表达水平高于动员后的正常人外周血白细胞。对miR-17-19b表达水平相对较高的K562细胞系,5-氮杂胞苷处理可降低其miRNA-17-19b表达水平,通过抑制miR-19a的功能可以抑制K562细胞系的增殖。结论:与正常人外周血白细胞相比较,miRNA-17-19b在K562细胞系及CML病人的外周血白细胞中的表达水平较高,5-氮杂胞苷可抑制miRNA-17-19b在K562细胞系的表达,其中对miR-19a影响尤其显著;体外抑制miRNA-19a的功能可抑制K562细胞系的增殖。
- 杨洋李永辉高丽王莉莉于力
- 关键词：MICRORNAK562细胞系CML白血病
- 急性白血病ZO-1基因启动子区甲基化状态分析及其临床意义被引量：3
- 2008年
- 目的探讨紧密连接蛋白-1（Zonula oecludem-1，ZO-1）基因启动子区甲基化状态在人急性白血病（AL）发生、发展中的作用及作为通用性基因标志物的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）检测白血病细胞系HL60、Molt4、NK92和40例非恶性血液病以及81例AL骨髓ZO-1基因启动子区的甲基化状态。结果ZO-1基因启动子区在白血病细胞系中呈完全甲基化状态；而在40例非恶性血液病标本中均为非甲基化；81例AL标本中甲基化阳性率为60．49％（49／81），其中难治复发组为92．86％（13／14），高于初诊未治疗组65．85％（27／41）及完全缓解组34．62％（9／26）；急性髓细胞白血病组61．54％（32／52）与急性淋巴细胞白血病组58．62％（17／29）比较差异无统计学意义。结论首次证明ZO-1基因启动子区高甲基化状态在人AL中具有较高的特异性，与疾病发生、发展密切相关，可作为一个新的白血病通用分子标志。
- 王畅王冠军谭业辉李薇刘春蕙于力
- 关键词：白血病甲基化ZO-1基因
