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雷公藤TwCYP88A1基因全长cDNA克隆与表达分析被引量：1: 2018年; 目的：研究雷公藤萜类成分的生物合成相关基因,在雷公藤转录组信息数据的基础上,以雷公藤悬浮细胞为研究材料,克隆Tw CYP88A1基因。方法：采用c DNA末端快速扩增技术（RACE）克隆雷公藤Tw CYP88A1基因,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）分析其组织表达谱。结果：Tw CYP88A1 c DNA全长1 594 bp,编码491个氨基酸,等电点9.16,相对分子质量55.957 k Da,具有半胱氨酸铁血红素配体信号活性催化位点。植物组织表达分析表明Tw CYP88A1基因在雷公藤叶中的表达量最高,根中最低。结论：从雷公藤悬浮细胞中克隆得到Tw CYP88A1基因全长c DNA,对其进行生物信息学分析,揭示其组织表达谱,为深入分析雷公藤细胞色素P450酶、解析雷公藤萜类化合物的生物合成下游途径奠定基础。; 陈上王秀娟张逸风高伟; 关键词：雷公藤聚合酶链式反应悬浮细胞细胞色素P450

合成生物学在中药资源可持续利用研究中的应用被引量：27: 2014年; 中药药用活性成分是中药的物质基础。随着合成生物学技术在紫杉醇、青蒿素和丹参酮等研究及生产中的成功应用,合成生物学用于中药资源可持续利用研究逐渐受到广泛关注。本文综述了合成生物学的发展及中药资源可持续利用面临的机遇,国内外药用活性成分合成生物学研究现状及进展;探讨了合成生物学在中药资源可持续利用中的应用;并分析了发展中药合成生物学研究的关键技术方法;预测合成生物学生产将成为中药资源可持续利用的重要途径之一。; 黄璐琦高伟周雍进; 关键词：中药资源活性成分合成生物学

雷公藤贝壳杉烯酸氧化酶基因的全长cDNA克隆与表达分析被引量：2: 2017年; 贝壳杉烯酸氧化酶(kaurenoic acid oxidase)是二萜赤霉素生物合成途径上的关键酶,参与植物生长发育等重要生物学过程。该文根据雷公藤转录组数据设计特异性引物,采用PCR技术克隆得到贝壳杉烯酸氧化酶全长c DNA序列,并进行生物信息学分析;使用实时定量PCR(qRT-PCR)研究基因的诱导表达水平。克隆得到Tw KAO长度为1 874 bp,编码487个氨基酸,蛋白相对分子质量56.02 k Da,理论等电点8.89;经茉莉酸甲酯(Me JA)诱导后,Tw KAO基因相对表达量在12 h达到峰值;经植株组织表达分析证实,Tw KAO基因在雷公藤的叶中表达量最高,根中最低。该研究首次克隆得到雷公藤KAO基因,并分析其mRNA表达特征,为深入研究雷公藤生长发育以及萜类活性成分次生代谢研究奠定基础。; 张逸风苏平胡添源周家伟关红雨高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤克隆生物信息学分析

雷公藤PTEN基因全长克隆及表达分析被引量：1: 2017年; 目的获得雷公藤Tripterygium wilfordii磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸肌醇3-磷酸酶(Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate 3-phosphatase,PTEN)基因的c DNA全长,并预测其生物学功能。方法根据雷公藤转录组数据设计引物,对雷公藤PTEN(TwPTEN)基因进行全长克隆;通过生物信息学方法对得到的TwPTEN基因进行分析,主要包括多重序列比对,蛋白结构预测和构建进化树分析等。结果根据分析结果 TwPTEN基因全长为2 247 bp,共编码614个氨基酸,等电点为5.84,相对分子质量为66 900,多重序列比对显示其与其他植物的PTEN基因具有较高的同源性。雷公藤悬浮细胞经外源茉莉酸甲酯(Me JA)诱导后,实时荧光定量结果显示,TwPTEN的表达量明显增加,并在12 h达到最高,提示PTEN基因与植物的次生代谢产物的产生有关。结论本研究首次从雷公藤悬浮细胞中克隆得到PTEN基因,为进一步研究TwPTEN基因的功能奠定基础。; 周家伟刘雨佳胡添源高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析

雷公藤单萜合酶基因TwMS的克隆及蛋白表达分析被引量：4: 2017年; 该研究克隆得到1条雷公藤单萜合酶基因TwMS。其完整开放阅读框为1797bp,编码579个氨基酸,相对分子质量为69.75kDa、理论等电点为5.37。生物信息学分析表明,TwMS具有单萜合酶的特征结构域,属于萜类合酶TPSb亚家族。实时荧光定量PCR检测显示,经茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后,TwMS的相对表达量显著上调,并在24 h达到最高。此外,该研究在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达TwMS蛋白,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。; 胡添源苏平张逸风关红雨周家伟童宇茹高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析基因表达分析蛋白表达

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国家自然科学基金(81373906)