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两种人源性doc1基因真核表达重组质粒的构建及表达被引量：2: 2007年; 目的:构建p12蛋白真核表达重组载体,为基因治疗口腔癌提供基础研究。方法:反转录-聚合酶链式反应克隆出doc1基因ORF读框,两端连入酶切位点,导入真核表达载体pT7-FLAG-4及pEGFP-N1。结果:重组子pT7-FLAG-4-doc1及pEGFP-N1-doc1经限制性酶切分析,PCR鉴定和序列测定为正确重组质粒。结论:成功构建p12蛋白真核表达重组质粒pT7-FLAG-4-doc1及pEGFP-N1-doc1,为今后瞬时和稳定转染细胞提供基础。; 任军陆伟王新木李建虎雷德林刘彦普孙沫逸; 关键词：重组质粒体外表达

CDK2AP1基因的激光捕获显微切割应用研究被引量：1: 2010年; 目的探索联合激光捕获显微切割(lacer capture microdissection,LCM)与RT-PCR在人口腔鳞癌CDK2AP1基因表达研究中的可行性。方法采用LCM技术从人口腔鳞癌组织冰冻切片中获取肿瘤细胞,提取RNA,并对微量RNA进行纯化。然后用RT-PCR验证总RNA中β-actin及CDK2AP1基因表达水平。结果经LCM后总RNA保持较好完整性;RT-PCR验证β-actin及CDK2AP1基因表达完整。结论通过有效的RNA保护方法,使用LCM技术能成功地获取较为均一的研究目的细胞,RNA完整性较好,能用于人口腔鳞癌CDK2AP1基因研究。; 金伟孙沫逸王文勇郑军李建虎任军; 关键词：基因表达激光捕获显微切割 RT-PCR 口腔鳞癌

口腔鳞癌中p12蛋白的表达被引量：2: 2009年; 目的:探讨p12蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与口腔鳞癌发生发展的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法,对40例口腔鳞癌组织,4例重度异常增生,8例口腔粘膜溃疡,6例口腔正常粘膜组织中p12蛋白的表达情况进行检测。结果:口腔鳞癌及重度异常增生组织中p12蛋白的表达明显低于炎性病变及正常粘膜组织。结论:p12蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达常为缺失,说明其作为一种候选抑癌基因在口腔鳞癌的发生中可能起一定作用,且不存在组织部位特异性。; 孙沫逸邵小钧李建虎任军郑军; 关键词：口腔鳞状细胞癌免疫组织化学

DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化被引量：4: 2007年; 目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白。方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,GlutathioneSepharose4B柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC-1长度一致,测序结果与GenBank公布的DOC-1基因序列完全一致,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量38000左右出现新的蛋白表达条带,经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白。结论:成功构建了pGEX-4T-1-DOC-1原核表达载体,表达并纯化出GST-p12重组蛋白,为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础。; 邵小钧孙沫逸李连科陈伟杨耀武李建虎; 关键词：基因克隆基因表达

人舌鳞癌(Tca-8113)细胞cDNA表达文库的建立被引量：1: 2008年; 目的:构建人舌鳞癌(Tca-8113)细胞cDNA文库。方法:用Trizol法提取人舌鳞癌(Tca-8113)细胞的总RNA,使用Oligotex mRNA Mini Kit分离纯化mRNA,使用Library Construction Kit and cDNA SynthesisKit构建人舌鳞癌(Tca-8113)细胞cDNA表达文库。结果:人舌鳞癌(Tca-8113)细胞cDNA表达文库的初始文库滴度为5.4×105pfu/ml,重组率为95%,扩增后文库滴度为7.8×107pfu/ml。结论:成功构建了人舌鳞癌(Tca-8113)细胞cDNA表达文库,为进一步筛选人舌癌相关基因及蛋白奠定了基础。; 张永强孙沫逸戴建武曹立雪胡鹏任军郑军; 关键词：CDNA表达文库

口腔鳞癌组织中doc1基因mRNA表达的意义被引量：3: 2008年; 目的:doc1基因的转录产物p12蛋白与肿瘤的发生、发展密切相关.本研究旨在检测doc1基因mRNA在不同分化的口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中表达的意义。方法:用半定量RT-PCR方法检测30例口腔鳞状细胞癌和20例正常口腔黏膜中doc1基因mRNA的表达,并分析doc1基因mRNA表达量与临床病理特征的关系。结果:doc1基因mRNA在高、中、低分化口腔鳞状细胞癌中的灰度平均值为:1.35±0.04,1.20±0.05,1.08±0.03;正常口腔黏膜上皮doc1mRNA的灰度平均值为:1.58±0.15,表达高于口腔鳞状细胞癌组织,两者之间的差异具有显著性意义,高中低分化的口腔鳞状细胞癌两两比较,均有统计学差异。结论:doc1基因可能在口腔鳞状细胞癌早期具有重要作用,doc1mRNA低表达可能是口腔鳞状细胞癌中的早期事件。; 任军冯源陆伟李建虎杨耀武孙沫逸; 关键词：信使RNA

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陕西省科技攻关计划(2006K09-G104)