国家自然科学基金(81100011)
- 作品数：6 被引量：46H指数：4
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- 相关机构：南京军区福州总医院厦门大学更多>>
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- 1，25-二羟维生素D3对支气管哮喘小鼠气道重塑的影响及其机制被引量：11
- 2013年
- 1，25-二羟维生素D3[1，25-dihydroxyvitaminD3，1，25-（OH）2D3]是体内维生素D最重要的活性代谢产物。既往研究均侧重于1，25-（OH）2D3调控支气管哮喘（简称哮喘）免疫应答及慢性气道炎症反应^[1-2]。
- 宋颖芳赖国祥柳德灵林庆安郑曦林海
- 关键词：25-二羟维生素D3哮喘小鼠气道重塑25-(OH)2D3气道炎症反应
- 1,25-二羟维生素D_3抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织 α-平滑肌肌动蛋白的表达及气道重塑被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对慢性哮喘模型小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及气道重塑的影响。方法:卵白蛋白致敏激发建立慢性哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组。HE染色及天狼星红染色观察各组气道结构及上皮下纤维化,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;Western blot法及实时荧光定量PCR法检测各组的α-SMA表达。结果:(1)哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落、上皮下纤维化及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,而1,25-(OH)2D3的干预可有效减轻上述病理改变;(2)VD组肺组织α-SMA的mRNA及蛋白表达水平均显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05)。结论:1,25-(OH)2D3能降低哮喘小鼠肺组织α-SMA的表达并有效抑制哮喘气道重塑。
- 宋颖芳赖国祥柳德灵林庆安
- 关键词：哮喘气道重塑25-二羟维生素D3Α-平滑肌肌动蛋白
- 1,25-二羟维生素D_3负性调控被动致敏人气道平滑肌细胞中的NF-κB信号通路被引量：13
- 2013年
- 目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对被动致敏人气道平滑肌细胞(HASMCs)中核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:原代培养HASMCs并使之被动致敏,以1,25-(OH)2D3作为干预因素。EMSA法检测NF-κB的DNA结合活性;免疫细胞化学染色技术观察NF-κB p65的核易位情况;Western blotting法检测核因子κB抑制蛋白α(IκBα)及p-IκBα蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR检测维生素D受体(VDR)、维生素D 24-羟化酶(CYP24)和IκBαmRNA的表达水平;放线菌素D处理实验检测IκBαmRNA的表达。结果:(1)1,25-(OH)2D3显著削弱被动致敏HASMCs中NF-κB的DNA结合活性及其亚单位p65的核易位;(2)1,25-(OH)2D3能通过增加被动致敏HASMCs中IκBα的mRNA稳定性及减少其蛋白磷酸化水平2个途径显著上调细胞中IκBα的表达;(3)1,25-(OH)2D3显著上调被动致敏HASMCs中VDR的mRNA表达并诱发其功能性反应。结论:1,25-(OH)2D3能通过上调被动致敏HASMCs中IκBα的表达抑制细胞NF-κB信号通路,且这一作用与VDR有关,这可能是其调控被动致敏HASMCs的重要作用机制。
- 宋颖芳赖国祥柳德灵林庆安廖云海
- 关键词：气道平滑肌细胞1,25-二羟维生素D3
- 1,25-二羟维生素D_3对哮喘气道重塑小鼠模型NF-κB信号通路的调控研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道重塑的干预作用及可能作用机制。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及VitD组。以卵白蛋白(OVA)致敏、反复激发9周(共31次)建立慢性哮喘气道重塑模型。VitD组在每次OVA激发前1 h予以腹腔注射100 ng 1,25-(OH)2D3。对照组用等量生理盐水代替OVA进行致敏和激发。末次激发后24 h处死小鼠。肺组织分别行HE染色和Masson染色,观察各组气道结构及上皮下纤维化,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;蛋白免疫印记法检测肺组织核转录因子-κB(NF-κB)p65的核移位及IκBα、p-IκBα蛋白的表达水平;实时荧光定量(Real-time)PCR检测肺组织中IκBαmRNA表达水平。结果 (1)哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮下纤维化及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,而1,25-(OH)2D3的干预可有效减轻上述病理改变;(2)1,25-(OH)2D3明显抑制哮喘肺组织中NF-κB p65的核移位;(3)1,25-(OH)2D3能通过上调IκBα的mRNA表达并抑制其磷酸化来上调哮喘肺组织中IκBα的蛋白表达。结论 1,25-(OH)2D3可通过负性调控NF-κB信号通路来拮抗哮喘气道重塑。
- 宋颖芳洪景芳柳德灵林庆安赖国祥
- 关键词：哮喘气道重塑1,25-二羟维生素D3核转录因子-ΚBIΚBΑ
- 1,25-二羟维生素D_3对慢性哮喘小鼠气道重塑中MMP-9及NF-κB表达的影响被引量：16
- 2013年
- 目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对慢性哮喘小鼠气道重塑模型肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达及核转录因子κB(NF-κB)活化的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组。卵白蛋白(OVA)致敏、激发建立慢性哮喘气道重塑模型。HE染色及Masson染色观察各组气道结构及上皮下纤维化,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;蛋白免疫印记法检测肺组织NF-κB p65的核移位;蛋白免疫印记法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测IκBα的表达水平;明胶酶谱法及RT-PCR法检测MMP-9的活性及mRNA表达。结果哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮下纤维化及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,而1,25-(OH)2D3的干预可有效减轻上述病理改变。VD组肺组织MMP-9活性为对照组的(3.46±0.57)倍,而哮喘组为对照组的(7.87±0.89)倍(P<0.05);VD组MMP-9 mRNA相对含量为(3.16±0.09),显著低于哮喘组(5.74±0.13)(P<0.05),但仍高于对照组(0.57±0.08)(P<0.05)。1,25-(OH)2D3显著抑制哮喘肺组织中NF-κB p65的核移位并上调IκBα的表达。结论 1,25-(OH)2D3能抑制哮喘肺组织中NF-κB的活化并减少MMP-9表达,进而干预慢性哮喘气道重塑过程。
- 宋颖芳洪景芳柳德灵林庆安叶嘉廖云海赖国祥
- 关键词：哮喘气道重塑1,25-二羟维生素D3核转录因子ΚB
- 维生素D受体特异性shRNA慢病毒载体及ASMCs稳转株的构建被引量：3
- 2020年
- 目的构建特异性靶向大鼠维生素D受体(VDR)基因的RNA干扰慢病毒载体,并筛选构建VDR基因稳定沉默的ASMCs细胞株。方法设计大鼠VDR的4组短发夹状RNA(shRNA)靶序列,合成的DNA双链与线性化的慢病毒LV3载体相连,构建LV3-sh-VDR重组慢病毒质粒。经酶切及测序鉴定后,进行病毒包装和病毒滴度检测,而后转染大鼠ASMCs,分组为干扰组(转染VDR shRNA)、阴性对照组(仅转染慢病毒载体)和空白对照组(未转染载体)。经嘌呤霉素抗性筛选后,建立ASMCs的VDR-shRNA稳定细胞株,用逆转录聚合酶链反应和Western Blotting法分别检测各组ASMC细胞中VDR mRNA及蛋白的表达水平。结果经酶切和测序鉴定,成功构建4个VDR重组慢病毒载体。慢病毒转染ASMCs后,经嘌呤霉素抗性成功筛选到ASMCs的VDR-shRNA稳定细胞株,干扰组ASMCs的VDR mRNA和蛋白的表达量与阴性对照组及空白对照组相比均明显下降。结论成功构建VDR稳定沉默表达的大鼠ASMCs细胞株,为研究VDR对哮喘生物学行为的影响提供细胞模型。
- 高舒玉邹淑梅柳德灵赖国祥宋颖芳
- 关键词：维生素D受体基因RNA干扰慢病毒转染
