国家自然科学基金(81000181)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
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- LacZ转基因小鼠间充质干细胞的分离培养和生物学特性研究被引量：2
- 2011年
- 目的分离培养LacZ转基因小鼠骨髓间充质干细胞(LacZ-MSC),研究其生物学特性。方法用全骨髓贴壁法分离LacZ-MSC,体外扩增,并观察细胞生长特性,流式细胞仪检测细胞周期,成骨成脂诱导试验分析LacZ-MSC转分化特性,X-gal染色法检测其LacZ基因的表达。结果 LacZ-MSC培养4 d后有散在呈针尖状的贴壁细胞,5～8 d后形成集落或融合呈纤维状;体外扩增每只小鼠原代可获得(1～3)×105个细胞,10代可获得(1～3)×1010个细胞总数,10代后的细胞增殖能力下降;细胞周期分析显示,G0/G1期:占78.44%,G2/M期:占5.20%,S期:占16.36%;成骨成脂诱导试验表明,LacZ-MSC细胞具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的潜能;X-gal染色结果表明,LacZ-MSC细胞携带LacZ基因。结论从LacZ转基因小鼠骨髓中成功地分离了携带有LacZ基因的MSC,在体外具有较好的增殖更新能力,3～10代的LacZ-MSC作为组织工程细胞具有广阔的应用前景。
- 毛飞高硕钱晖朱伟严永敏孙靖许文荣
- 关键词：间充质干细胞骨髓LACZ基因
- 间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用。方法用5、10、20和40μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20μg/ml SEA分别诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)4、8、12和24 h后,用实时荧光定量PCR检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,选择SEA的最佳作用浓度和作用时间。将巨噬细胞分成5组,分别为阴性对照组、SEA组、SEA+MSC上清组(MSC组)、SEA+大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)上清组(NRK-52E组)和SEA+DMEM细胞培养基组(DMEM组)。除阴性对照组外,其他各组给予20μg/ml SEA诱导巨噬细胞活化12 h后,MSC组、NRK-52E组和DMEM组换液撤SEA,分别给予MSC培养上清、NRK-52E细胞培养上清和DMEM培养液,继续培养。显微镜观察细胞上清培养12 h后各组细胞形态。实时荧光定量PCR检测细胞上清培养12 h和24 h后TNF-αmRNA水平。蛋白质印迹(Western blotting)分析检测细胞上清培养12 h后转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平。噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞上清培养24 h和48 h后巨噬细胞增殖情况。结果 SEA活化巨噬细胞的最佳浓度和时间分别为20μg/ml和12 h。镜下观察显示,MSC上清培养12 h后,MSC组与SEA组、NRK-52E组和DMEM组相比,细胞变圆,体积明显较小,伪足较少。MSC上清作用12 h和24 h后,MSC组TNF-αmRNA水平分别为阴性对照组的(1.0±0.4)和(1.0±0.5)倍,显著低于NRK-52E组[分别为(10.4±3.9)和(16.5±5.0)倍(12 h:P<0.05;24 h:P<0.01)]和DMEM组[分别为(6.0±2.1)和(2.4±0.7)倍(均P<0.05)]。MSC上清作用12 h后,MSC组蛋白TGF-β1/GAPDH为0.31±0.10,显著低于NRK-52E组(0.88±0.10,P<0.01)和DMEM组(0.58±0.06,P<0.05)。MSC上清作用48 h后,MSC组吸光度(A490值)为0.22±0.05,与NRK-52E组(0.53±0.02)和DMEM组(0.31±0.03)比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MSC培养上清能抑制SEA诱导的巨噬细胞株RAW264.7
- 徐会娟钱晖朱伟张徐严永敏张蕾蕾毛飞许文荣
- 关键词：间质干细胞日本血吸虫可溶性虫卵抗原
- 骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达被引量：6
- 2011年
- 背景:间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。目的:观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。方法:DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。结果与结论:与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P<0.01或P<0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P>0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。
- 毛飞钱晖朱伟严永敏高硕许文荣
- 关键词：类风湿性关节炎骨髓间充质干细胞小鼠
- 果蝇抗病毒免疫
- 2011年
- 果蝇是遗传和发育研究的重要模式生物,对果蝇抗病毒免疫研究有助于了解宿主是如何与病毒互相作用以及宿主几条免疫路径在抗病毒中所起的作用。本文从两方面综述了果蝇抗病毒免疫,即果蝇抗病毒先天免疫路径和核糖核酸干扰(RNAi)抗病毒免疫,这些分析能帮助我们更好地了解果蝇抗病毒免疫的机制和特点。
- 毛飞唐旭东
- 关键词：抗病毒免疫果蝇核糖核酸干扰模式生物先天免疫宿主
- 葡萄籽原花青素诱导F6细胞凋亡作用被引量：1
- 2011年
- 原花青素（procyanidins,PC）是由不同数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成的一类多酚化合物的总称,在水果、蔬菜和饮料中含量丰富。1961年德国Karl等从山楂新鲜果实提取物中首次分离得到原花青素,此后人们相继在葡萄、山楂、花生、银杏等植物中发现原花青素。各国学者对上百种植物原花青素尤其对食物原花青素进行了广泛研究,发现其具有抗氧化、抗衰老、增强心血管活性等多种生物活性和药理作用。
- 毛飞高硕钱晖朱伟严永敏许文荣
- 关键词：原花青素凋亡
- 炎症环境下巨噬细胞对小鼠骨髓间质干细胞迁移能力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨脂多糖(LPS)存在的炎症环境下巨噬细胞株RAW264.7对小鼠骨髓间质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的基因表达及迁移能力的影响。方法:采用全骨髓贴壁法分离小鼠骨髓MSCs,与RAW26 4.7细胞进行Transwell迁移及共培养实验,分为培养液对照组,RAW264.7作用组,LPS作用组及RAW264.7与LPS共作用组。Transwell迁移实验比较各组MSCs的迁移数量,同时qRT-PCR检测各组MSCs表达转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA水平。结果:LPS刺激巨噬细胞活化,使其高表达IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)及MCP-1。RAW264.7作用组MSCs迁移数量多于对照组(P<0.01)。与LPS作用组相比,LPS活化的RAW264.7显著增加MSCs的迁移数量(P<0.01)。qRT-PCR结果显示活化的RAW264.7增加了MSCs的TGF-β1、IL-6和MCP-1 mRNA表达(P<0.05)。结论:炎性条件下巨噬细胞能增强MSCs的迁移能力并改变其细胞因子的表达水平。
- 高硕蔡梦洁毛飞杨婷婷张洁张玲赵露露坎吉克孜.阿不来提钱晖许文荣
- 关键词：骨髓间质干细胞巨噬细胞细胞迁移
