重庆市自然科学基金(CSTC2010BB5190)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：周振华陈康宁赵海霞汪思嘉孟召友更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内皮祖细胞移植对大鼠短暂性大脑中动脉栓塞的治疗作用
- 2012年
- 目的观察内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)移植在治疗大鼠短暂性大脑中动脉栓塞(transientmiddle cerebral artery occlusion,tMCAO)中的作用,探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在其中的可能作用机制。方法培养、鉴定大鼠骨髓来源EPCs,通过颈内动脉移植到大鼠tMCAO模型。实验动物分为2组:PBS对照组、EPCs移植组,分别观察第1、3、5、7天各项指标。采用HE染色,观察大鼠缺血部位病理变化,采用TUNEL法检测嗅周皮质神经元凋亡情况、免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况、Western blot检测缺血局部脑组织VEGF表达。结果 EPCs移植后第5天,大鼠缺血嗅周皮质TUNEL阳性细胞数逐渐减少到最低值(54.68±3.12),Caspase-3蛋白表达也逐渐降低最低值(31.24±2.73),对应的局部脑组织VEGF表达则逐渐升高到最高值(0.99±0.03),EPCs移植组各时相点与PBS对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EPCs移植tMCAO大鼠可抑制神经元凋亡,减轻缺血导致的神经损伤,部分作用机制可能是通过旁分泌VEGF降低Caspase-3活性这一途径实现的。
- 廖少华范沁林吴娅王皓香陈康宁周振华
- 关键词：内皮祖细胞旁分泌神经元凋亡
- A20人工锌指转录因子真核载体的构建及其对内皮细胞炎症反应的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察A20基因的人工锌指转录因子(zinc finger-artificial transcription factor,ZF-ATF)对内源性A20基因及内皮细胞炎症反应的影响。方法根据人A20基因的序列,设计出其ZF-ATF,合成靶序列Oligo DNA,退火形成双链DNA,与通过BamHⅠ和KpnⅠ酶切后的载体连接产生ZF-ATF真核载体,质粒转化感受态细菌DH5α,筛选阳性克隆,提取质粒,限制性内切酶酶切鉴定,鉴定阳性克隆进行测序。质粒DNA转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),通过Western blot检测A20蛋白的表达,用脂多糖(LPS)诱导HUVEC细胞产生炎症反应,利用Western blot检测NF-κB p65的表达情况,利用ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8等的水平。结果限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实合成的含ATF的真核载体寡核苷酸链插入正确,Western blot证实转染HUVEC后A20蛋白表达显著增加。ELISA法检测结果表明,在LPS刺激后,空载体组及空白组细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α表达均明显上调,而ZF-ATF转染组没有明显上调,与空载体组及空白组比较,有统计学差异(P<0.05,P<0.01);Western blot证实在LPS刺激后ZF-ATF转染组NF-κB p65的表达(19.8±4.5)较空载体组(90.2±5.9)及空白组(96.3±3.3)显著下调(P<0.01)。结论成功构建人工锌指转录因子真核表达载体,且能够启动内源性A20的稳定表达,并发挥其抗炎等作用。
- 孟召友赵海霞黄嘉璐汪思嘉陈康宁周振华
- 关键词：人工转录因子抗炎作用
