实验用小型猪地方标准研究(D07080200720701)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：黄宏刚冯书堂公维华程佳月杨述林更多>>
- 相关机构：华中农业大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所广西大学更多>>
- 发文基金：实验用小型猪地方标准研究国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应。本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究。
- 苏晓鸥乔俊文赵德明杨利峰周向梅尹晓敏杨建民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白ORF7基因
- 小型猪微卫星标记多重PCR体系的建立与应用被引量：5
- 2009年
- 目的建立实验用小型猪微卫星标记的多重PCR体系和进行实验猪群的遗传监测。方法利用3种不同荧光标记的微卫星引物结合ABI3700遗传分析仪测序的方法,通过筛选和优化反应条件,建立可用于实验用小型猪遗传质量控制的稳定的多重PCR反应体系。在此基础上进一步检测实验用小型猪近交群体的遗传变异以验证建立体系的效率。结果筛选出了2组理想的组合:组合1包括SW742、S0228和S0218座位,复性温度58℃和56℃;组合2包括S0155、SW902和S0227三个座位,复性温度为60℃和58℃。组合内不同座位标记不同的荧光染料。还以此检测了实验用小型猪群体中的遗传变异。结论初步建立了中国三种实验用小型猪微卫星标记检测的多重PCR体系,为快速、大通量、准确的小型猪遗传监测提供了初步的技术基础。
- 公维华张宁波程佳月杨述林黄宏刚冯书堂王爱德甘世祥李奎
- 关键词：微卫星多重PCR
