福建省自然科学基金(C0310001)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 佛波酯处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶C-γ2的意义被引量：1
- 2007年
- 目的探讨佛波酯(TPA)处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶Cγ-2(PLCγ-2)的意义。方法通过DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌MGC80-3细胞的影响;借助核浆分离手段获得胃癌细胞核浆蛋白,并通过免疫印迹(Western blotting)检测TPA对PLCγ-2蛋白表达水平影响;通过免疫荧光技术处理,激光扫描共焦显微镜观察胃癌细胞内PLCγ-2蛋白的定位和转运;用PLCγ-2的抑制剂(U73122)预处理细胞,免疫印迹和激光扫描共焦显微镜分别检测其对TPA作用胃癌细胞内PLCγ-2的影响;以及荧光显微镜下观察分析U73122是否影响TPA对胃癌细胞的作用。结果TPA诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡;同时TPA提高PLCγ-2蛋白表达水平,并诱导其发生核浆转运;其抑制剂(U73122)可以降低TPA对PLCγ-2蛋白表达水平的作用,但并不能影响TPA诱导胃癌细胞凋亡;而TPA诱导的PLCγ-2核浆转运却没有被PLCγ-2抑制剂(U73122)阻止。结论尽管TPA提高了胃癌MGC80-3细胞中PLCγ-2表达水平,但PLCγ-2表达水平和TPA诱导的胃癌MGC80-3凋亡没有直接关系,而其核浆转运可能与TPA诱导的胃癌细胞凋亡相关。
- 张兵夏春
- 关键词：佛波酯蛋白表达免疫印迹法
- 蛋白激酶B在佛波酯诱导人胃癌细胞系凋亡中的作用
- 2008年
- 目的探讨佛波酯(TPA)诱导胃癌细胞系凋亡过程中蛋白激酶B(PKB)的作用。方法通过BrdU处理,流式细胞术检测以及DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌BGC-823细胞的影响;免疫印迹法检测TPA对PKB蛋白表达水平、磷酸化的影响;核浆分离获得核浆蛋白,用于免疫印迹法检测TPA对胃癌细胞内PKB和其Ser 473位点磷酸化的核浆表达影响,以及激光扫描共焦显微镜观察TPA是否改变胃癌细胞内PKB的分布。结果TPA诱导BGC-823细胞凋亡;TPA下调BGC-823细胞内PKB蛋白表达,并且与TPA作用时间和TPA浓度呈正相关,与PP2A降解作用无关;TPA抑制PKB的Ser 473位点磷酸化,而对其Thr 308位点磷酸化没有明显影响;TPA下调细胞核内PKB的表达以及Ser 473位点的磷酸化;TPA并不改变PKB在胃癌细胞内的分布。结论PKB的抑制作用可能参与TPA诱导胃癌细胞凋亡过程;由TPA诱导的胃癌细胞凋亡可能部分是由于细胞核内PKB蛋白表达和Ser 473位点磷酸化下降所致。
- 张兵夏春
- 关键词：佛波酯蛋白激酶B免疫印迹法BGC-823细胞
- 大鼠腓肠肌内蛋白激酶B各亚型表达的年龄差异被引量：1
- 2008年
- 目的研究大鼠腓肠肌内蛋白激酶B(Akt/PKB)各亚型伴随年龄变化的表达差异。方法用反转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(westernblotting)检测老年组(30月龄)和青年组(6月龄)大鼠腓肠肌内Akt各亚型mRNA和蛋白表达,并统计分析比较。结果(1)30月龄组大鼠腓肠肌内Akt1与Akt2的mRNA水平均高于6月龄组(t=7.124,P=0.000;t=2.598,P=0.021),Akt3差异无显著性(t=0.460,P=0.653)。(2)两组间Akt1蛋白表达水平无显著变化(t=0.469,P=0.646),30月龄组Akt1的Thr308磷酸化水平低于6月龄组的表达,有显著差异(t=-9.861,P=0.000);30月龄组Akt2的蛋白水平高于6月龄组的表达,有显著差异(t=7.522,P=0.000);Akt3蛋白表达在两组间无差异(t=0.058,P=0.955)。结论大鼠腓肠肌中Akt三种亚型伴随年龄改变表达存在差异,推测Akt各亚型在此过程中可能发挥不同功效。
- 张兵夏春陈福
- 关键词：AKT1AKT2腓肠肌
