北京市优秀人才培养资助(20081D0301300095)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：郑晓静李自慧曹廷明贾红彦邢爱英更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌Rv0808基因的克隆、表达、纯化及抗原性研究
- 2012年
- 目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)体内诱导基因Rv0808,并制备多克隆抗体,研究其编码蛋白的抗原性,了解诊断应用价值。方法高保真PCR扩增Rv0808基因,克隆入表达载体pET-30a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),测序正确的克隆用IPTG诱导表达。用镍柱纯化重组蛋白,然后用纯化蛋白免疫新西兰白兔,制备和纯化多克隆抗体。将重组蛋白分别与多克隆抗体和结核病患者血清进行Western blot鉴定,并尝试用多克隆抗体进行免疫组化染色检测巨噬细胞中M.tb。结果成功构建了pET-30a(+):Rv0808重组表达载体。经过重组蛋白的可溶性表达及纯化后,SDS-PAGE结果显示在66kD处有一单一蛋白条带。将此蛋白免疫新西兰白兔后获得了效价为6400的多克隆抗体。重组蛋白与多克隆抗体可以发生免疫反应,但却不能检测出结核患者血清中的相应抗体。用此多克隆抗体也无法检测出巨噬细胞中的M.tb。结论结核分枝杆菌Rv0808编码蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,但可能对于结核病的诊断价值较小。
- 李自慧杜博平贾红彦古淑香邢爱英周立娟曹廷明郑晓静刘忠泉杜凤娇张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌抗原
- 结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA的克隆表达及免疫组织化学分析
- 2013年
- 目的克隆、表达结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA,并制备多克隆抗体进行免疫组织化学分析,研究其免疫原性、免疫反应性及体内表达情况。方法采用高保真PCR法扩增结核分枝杆菌mshA基因,将基因克隆入表达载体pET30a(+),证实序列正确后转化入大肠埃希菌BL21(DE3),并采用IPTG诱导表达。将重组蛋白大量表达纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行亲和纯化,用重组MSHA蛋白与其多克隆抗体进行Westernblot鉴定。制备感染结核分枝杆菌的小鼠肺组织病理切片,尝试用免疫组织化学和抗酸染色法检测感染小鼠肺组织中结核分枝杆菌MSHA蛋白的表达。结果成功扩增片段大小为1443bp的mshA基因,构建了pET30a(+):mshA重组表达载体,对57kD的重组蛋白进行了大量表达及纯化,浓度为4mg/ml。重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价达25600的多克隆抗体,纯化后的多克隆抗体浓度为5.58mg/ml,效价仍达25600。免疫组织化学和抗酸染色显示,小鼠肺组织切片中结核分枝杆菌分布处有深棕色MSHA免疫组织化学反应颗粒。结论结核分枝杆菌MSHA蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,小鼠肺组织内的结核分枝杆菌中存在该蛋白的表达。
- 李自慧杜博平贾红彦张海青周丽娟邢爱英曹廷明郑晓静陈曦张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌抗体免疫组织化学
