福建省自然科学基金(C0310036)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：南京军区福州总医院第四军医大学西京医院更多>>
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- 促红细胞生成素基因转染人脐血间充质干细胞治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨转染人促红细胞生成素（EPO）基因的人脐血间充质干细胞（MSCs）脑内移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的治疗效果。方法采用密度梯度离心法从足月新生儿脐血中分离培养MSCs,流式细胞术（FCM）检测细胞表面抗原标记CD29、CD44、CD105、CD34、CD106和HLA-DR。将pcDNA3-EPO经脂质体介导转染人脐血MSCs,经G418筛选后获得稳定转染人EPO基因的人脐血MSCs,用RT-PCR、Western blot鉴定外源人EPO基因在人脐血MSCs中的表达。42只7d龄SD大鼠在建立HIBD模型后分为3组：空白对照组（A组,n=12）,未转染EPO基因的MSCs移植组（B组,n=12）,转染EPO基因的MSCs移植组（C组,n=18）,在建立HIBD模型后第3天经大脑左侧皮层进行细胞移植。细胞移植术后第7天将C组大鼠随机挑选6只处死后进行脑组织免疫化学检测,观察移植细胞在脑内的存活和迁移情况;于移植术后第1、7、14、21、28天对3组大鼠进行改良神经功能损害评分（mNSS）。结果从足月新生儿脐血中分离培养出MSCs,流式细胞仪检测结果为强表达CD29、CD44、CD105,不表达CD34、CD106、HLA-DR;RT-PCR、Western blot结果显示转染人EPO基因的人脐血MSCs体外能表达EPO;移植组大鼠脑组织免疫化学检测发现移植细胞在脑内能够存活,并以移植点为中心向周围迁移;mNSS结果为：C组大鼠于移植术后第14天开始mNSS即低于A组（P〈0.05or P〈0.01）,B组则于移植术后第21天开始低于A组（P〈0.05）;C组与B组比较,于移植术后第21、28天,C组低于B组（P〈0.05）。结论转染人EPO基因的人脐血MSCs脑内移植术后对新生大鼠HIBD具有较好的治疗作用。
- 夏桂枝洪新如陈新民任榕娜王水良
- 关键词：促红细胞生成素间充质干细胞人脐血缺氧缺血性脑损伤
- 人脐血间充质干细胞体外终末分化为神经元样细胞
- 2008年
- 目的:探讨人脐血间充质干细胞体外培养过程中的终末分化方向。方法:采用密度梯度离心法从人脐血中分离培养间充质干细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞表面抗原标记CD29、CD44、CD105、CD34、CD106和HLA-DR;观察人脐血间充质干细胞在体外培养过程中的增殖情况和形态变化,应用RT-PCR和免疫细胞化学方法对P2和P10代人脐血间充质干细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经丝蛋白(NF)的表达情况进行检测。结果:RT-PCR分析证实P10代人脐血间充质干细胞有NSE、NF的mRNA表达,免疫细胞化学检测显示P10代细胞能表达NSE和NF,而P2代人脐血间充质干细胞经RT-PCR和免疫细胞化学检测均无NSE、NF表达。结论:人脐血间充质干细胞在体外培养过程中能终末分化为神经元样细胞。
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- 关键词：间充质干细胞人脐血分化神经元
- 人脐血间充质干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的疗效被引量：2
- 2008年
- 目的探讨脑内移植人脐血间充质干细胞(MSCs)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗效果。方法无菌条件下收集20份健康足月新生儿脐血,采用密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞,再通过贴壁细胞培养法培养出人脐血MSCs。选择P3代人脐血MSCs作为移植细胞,并经5-溴尿嘧啶脱氧核苷(BrdU)体外标记。7日龄SD大鼠30只制备HIBD模型,造模过程中死亡1只,剩余29只分为移植组(n=18)和对照组(n=11)。造模后第3天,在立体定位条件下,移植组大鼠经左侧大脑皮层注入人脐血MSCs,对照组在相同部位注入相同体积的PBS。在细胞移植后第7天,随机选择6只移植组大鼠处死取脑,通过脑组织免疫组织化学检测方法观察移植细胞在脑内的存活、迁移和分化情况。于移植后第1、7、14、21、28天采用改良神经功能损害评分(mNSS)方法对二组大鼠的神经功能进行评价。结果20份足月新生儿脐血中5份培养出人脐血MSCs,培养成功率为25%。移植组大鼠脑组织免疫组织化学检测发现移植细胞在脑内能够存活,并以移植点为中心向周围迁移,其中(12.67±2.73)%的移植细胞分化为星形胶质细胞样细胞,未发现移植细胞向神经元样细胞分化。mNSS检测结果显示,移植第1、7天移植组大鼠mNSS低于对照组,但差异无显著性意义(Pa>0.05),第14、21、28天移植组大鼠mNSS低于对照组,差异有显著性意义(Pa<0.05)。结论人脐血MSCs脑内移植对新生大鼠HIBD具有较好的治疗作用。
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- 关键词：间充质干细胞人脐血
- 人EPO基因真核表达载体的构建及其在人脐血间充质干细胞中的表达
- 2008年
- 目的:构建人EPO基因真核表达载体并转染人脐血间充质干细胞,获得稳定表达人EPO的人脐血间充质干细胞.方法:从人胎肝细胞中提取总RNA,经过RTPCR方法扩增人EPO全长cDNA,应用基因重组技术将EPO cDNA基因亚克隆至pcDNA3真核表达载体内,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pcDNA3-EPO构建的正确性,再将pcDNA3-EPO经脂质体介导转染人脐血间充质干细胞,经G418筛选后获得稳定转染EPO基因的人脐血间充质干细胞,用RT-PCR,Western Blot和细胞免疫化学方法鉴定外源人EPO基因在人脐血间充质干细胞中的表达.结果:酶切和测序结果均证实pcDNA3-EPO构建正确,RT-PCR,Western blot和细胞免疫化学结果显示转染人EPO基因的人脐血间充质干细胞体外能表达EPO.结论:构建成功人EPO基因真核表达载体,转染人脐血间充质干细胞后在体外可获得稳定表达.
- 夏桂枝张国成陈新民洪新如
- 关键词：细胞生成素胎血间质干细胞转染
- 促红细胞生成素与缺氧缺血性脑损伤被引量：9
- 2006年
- 近年来促红细胞生成素(EPO)在中枢神经系统中的作用日益受到人们的重视。EPO和EPO受体(EPOR)的表达在脑内受低氧诱导因子1的调控,在缺氧缺血条件下,EPO和EPOR的表达明显增加;EPO具有直接和间接的神经保护作用,其作用机制为抗神经细胞凋亡、抗炎、抗氧化和促进血管再生等作用;EPO能部分通过血脑屏障,尤其是受到破坏的血脑屏障,大剂量静脉注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)治疗缺氧缺血性脑损伤的临床试验已获得了令人满意的效果,而EPO变异体和低氧诱导因子1诱导剂的研究、EPO的基因治疗等新的治疗策略又为缺氧缺血性脑损伤的治疗开辟了更广阔的应用前景。
- 夏桂枝张国成
- 关键词：红细胞生成素
