国家自然科学基金(81000150)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李伟强项鹏赖文玉张秀明万利更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第二医院中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞基因转导中的应用被引量：1
- 2011年
- 背景:构建一个组成性表达某特定基因同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒载体目前未见报道。目的:观察新型慢病毒载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP在人骨髓间充质干细胞基因转导中的表达。方法:通过PCR在PEDF基因的两端加上attB位点,构建表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP,将表达载体与包装质粒(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞。通过多次感染的方法将慢病毒载体导入人骨髓间充质干细胞,转导后第7天开始使用1～5mg/L嘌呤霉素筛选5d,得到表达PEDF和EGFP的人骨髓间充质干细胞,并进行Western、Elisa的鉴定分析。结果与结论:经PCR和测序证实,慢病毒表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP构建成功;将其成功导入人骨髓间充质干细胞,经过筛选获得纯化的过表达PEDF基因的绿色荧光细胞群。
- 卢晓芳杜晶春李磊赖文玉张秀明李伟强杨霞项鹏
- 关键词：慢病毒人骨髓间充质干细胞PEDFEGFP
- Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系的建立及鉴定被引量：2
- 2011年
- 【目的】建立Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系(iPSC)。【方法】通过组织块贴壁法培养Cdyl-/-的胚胎成纤维细胞(MEF)。将pMx-Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4和hrGFP五种质粒分别转染Plat-E细胞,收集病毒上清,感染Cdyl-/-MEF获得Cdyl-/-iPSC,并对Cdyl-/-iPS细胞的分子标记及体内外分化能力进行检测。【结果】取Cdyl-/-胎鼠皮肤,培养得到增殖旺盛的Cdyl-/-MEF。成功包装逆转录病毒并感染Cdyl-/-MEF,得到胚胎干细胞样的Cdyl-/-iPS细胞。该细胞表达AKP、Oct3/4、SSEA-1,在体内外可以分化为三胚层的细胞类型。【结论】Cdyl-/-iPS细胞具有自我更新和多向分化能力的特性。Cdyl-/-iPS细胞系的建立为研究Cdyl在小鼠早期胚胎发育中的功能提供一个良好的细胞模型。
- 胡晓俊赖文玉万利王涛张秀明李伟强项鹏
- 关键词：基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞
- 慢病毒介导的Isll基因在人骨髓间充质干细胞中的表达
- 2011年
- 目的研究慢病毒介导的Isll基因在人骨髓间充质干细胞（hMsc）中的表达情况，并检测其下游基因Nkx2．5和Flk一1的表达。方法多位点Gateway载体构建技术构建2K7puro／EF1α-Isll慢病毒表达载体（由EF1α启动子启动Isll基因表达）。包装细胞293FT细胞获得慢病毒，再转染至hMSC。利用嘌呤霉素抗性筛选出Isll阳性细胞。应用RT．PCR、Westernblotting检测hMSC中Isll基因在转染后1-6周的mRNA和1—4周的蛋白表达情况。结果成功构建了慢病毒载体EF1α—Isll，转染后hMSC中检测出Isll基因mRNA和蛋白的表达，其mRNA表达随着培养时间延长而上调，第3周表达量（0．65±0．14）较1、2周增多（0．36±0．09，0．37±0．05，均P〈0．05），3周后表达趋于稳定。转染后在无任何诱导剂的情况下，检测到Isll下游基因Nkx2．5的表达，但尚未见Flk-1的表达。结论通过慢病毒载体将Isll基因转染hMSC后，可获得长期稳定的表达，并在无任何诱导剂的情况下，能促进下游基因Nkx2．5的表达。
- 王银芬李伟强方榕刘佳杨达雅胡承恒伍贵富项鹏
- 关键词：慢病毒属转染
