中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(B2F100306)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：林密马军武张晓霞冯霞代鹏更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库的构建被引量：2
- 2013年
- 为构建抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库,利用Trizol试剂提取BALB/c鼠脾B淋巴细胞RNA,采用RT-PCR两步法扩增BALB/c鼠重链可变区和轻链可变区基因,用重叠延伸PCR技术构建抗口蹄疫病毒scFv基因库;在scFv cDNA双链末端加上EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,形成的双链cDNA两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端;将其与含EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体连接,经体外包装,BLT5403菌株增殖,文库扩增,进行体外亲和筛选。所构建的文库库容量的原始浓度为1×107 PFU/mL,扩增后文库浓度为9.6×1013 PFU/mL。随机挑取50个噬菌斑进行PCR鉴定,均为阳性,大小约800bp。经测序,序列完全正确。结果表明,成功构建了抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库。
- 张晓霞马军武周广青代鹏林密冯霞
- 关键词：口蹄疫单链抗体
- 利用核糖体展示技术筛选口蹄疫病毒单链抗体基因
- 2012年
- 目的:利用核糖体展示技术筛选口蹄疫病毒特异性单链抗体基因。方法:在已构建好的核糖体展示文库的基础上,利用核糖体展示技术,经过5轮的体外转录、体外转译、亲和筛选和RT-PCR,将得到的序列进行测序分析。结果:筛选到FMDV scFv基因,且基因得到富集。结论:实验运用核糖体展示技术,以FMDV抗原和纯化的146S病毒粒子为靶标筛选到了FMDV scFv基因,将为scFv用于FMD的基础研究、免疫学研究以及为预防、治疗和诊断提供帮助,也为研制FMD的快速诊断技术奠定先前基础。
- 代鹏周广青林密冯霞马军武张晓霞
- 关键词：口蹄疫病毒单链抗体核糖体展示
