广东省科技攻关计划(2KM05503S)
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
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- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学上海中医药大学更多>>
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- 动态张应变下大鼠肌卫星细胞三维培养的形态学观察被引量：3
- 2003年
- 目的探讨三维培养条件下动态张应变对大鼠骨骼肌卫星细胞形态学的影响。方法将牵张应变(10%应变、频率0.2 Hz,每小时加载10 min,共作用48 h)作用于大鼠骨骼肌卫星细胞-支架材料复合物。结果在动态张应变作用下,骨骼肌卫星细胞沿应力方向延伸,并见到肌小管形成;而未施加应力的骨骼肌卫星细胞在各个方向上都有突起,但未见到肌小管形成。结论动态张应变有利于肌纤维理想极性的形成,并有助于组织工程化骨骼肌的构建。
- 熊绍虎李宁赵金梅余磊廖华秦廷武钟世镇
- 关键词：骨骼肌卫星细胞形态学
- 离心作用测定细胞与材料间的粘附力及其初步应用
- 2003年
- 目的:介绍一种简单易行的检测细胞与材料间黏附力的方法。方法:本方法的建立基于离心力在转速一定时与半径成正比的原理。医用石膏制备培养皿固定装置,于培养皿底制备材料薄膜(包括有PLGA,PLGA+COLI,PLGA+COLI+FN),待大鼠骨骼肌卫星细胞悬液与其作用一定时间后,一定转速开动离心机。测定未脱落细胞斑的半径R,取均值。结果:上述三种材料表面未脱落大鼠骨骼肌卫星细胞圆斑半径(R)分别为7.96、15.11、26.10mm,三组间有显著性差异。结论:(1)R的变化可反映细胞与材料间粘附力的改变。(2)利用离心作用检测细胞与材料间的粘附力是可行的,尤其适用于同一种细胞与不同材料间粘附力的比较。(3)COL I和FN的使用可以增加大鼠骨骼肌卫星细胞与PLGA间的粘附。
- 熊绍虎廖华余磊欧阳钧原林钟世镇赵金梅秦廷武
- 关键词：粘附力离心肌卫星细胞
- β-淀粉样蛋白(1-42)对PC12细胞的氧化损伤被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨Aβ(1-42)对PC12细胞的氧化损伤作用。方法:利用不同浓度的Aβ(1-42)处理PC12细胞,采用MTT法、抗氧化酶活性测定以及RT-PCR分析观察Aβ(1-42)对PC12细胞的影响,分析Aβ(1-42)与SeGPx、MnSOD基因表达的关系。结果:随着Aβ(1-42)浓度的增加,SeGPx的表达不断下降;0·1μmol/L Aβ(1-42)能诱导MnSOD的活性增加,Aβ(1-42)对PC12的损伤作用能被acetovanilon(一种抑制内源性自由基产生的化合物)所抑制。结论:Aβ(1-42)能介导PC12细胞内源性自由基的产生增多。
- 邱小忠余磊秦建强王庆志廖华陆云涛武雷杨俊钟世镇欧阳钧
- 关键词：淀粉样Β蛋白PC12细胞线粒体
- 灵长类细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因的进化分析
- 2006年
- 目的:利用玻璃粉吸附法扩增人静脉血中的线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段,对灵长类氧化酶亚基Ⅱ基因进行分子系统学分析。方法:实验于2003-03/2004-10在南方医科大学解剖教研室完成。①玻璃粉吸附法扩增人静脉血中的线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段。②通过Genbank数据库,采用“Blast”的方法进行相似性数据搜寻,选择合适的16种灵长类生物氧化酶亚基Ⅱ基因的686碱基序列片段;采用PAUP4.0DNA序列分析软件进行分析。结果:①利用玻璃粉吸附法成功扩增出了人的氧化酶亚基Ⅱ全基因片段,并对扩增片段进行了序列分析。②根据序列测定结果,结合生物信息学技术研究16种灵长类动物之间的分子进化关系,建立了新的分子进化树,其中一致性指数为0.5608,相似性指数为0.4392。结论:线粒体氧化酶亚基Ⅱ基因片段可以作为进化分析的分子指标。
- 余磊邱小忠廖华秦建强黄美贤戴景兴欧阳钧赵卫东
- 关键词：计算生物学细胞色素C类进化
- 与雪旺细胞联合培养的成肌细胞生物学特性研究被引量：7
- 2003年
- 目的探讨体外联合培养条件下雪旺细胞对成肌细胞生物学特性的影响,为神经化人工肌肉的构建提供理论依据。方法碘酒、酒精消毒后,剥离并获取新生SD乳鼠的臂丛、坐骨神经及小腿三头肌,手术显微镜下彻底剥除其外膜、血管和脂肪,充分剪碎神经和肌肉组织,胰酶、胶原酶混合消化分离,DMEM培养基联合培养雪旺细胞与成肌细胞。倒置相差显微镜观察联合培养状态下两种细胞的形态及生长情况;3HTdR同位素标记掺入及液闪计数,每分钟射线绝对衰变数(DPM)判断雪旺细胞分泌物对成肌细胞增殖的影响;统计不同培养时间的肌管形成率,并采用横纹肌肌动蛋白免疫组织化学显色(SABC)及图像分析检测雪旺细胞对成肌细胞功能分化程度的影响。结果联合培养的成肌细胞生长增殖旺盛,肌管出现早、外形粗长,DPM峰值远高于对照组;横纹肌肌动蛋白反应阳性细胞呈棕褐色,联合培养的成肌细胞胞浆中肌动蛋白灰度值明显高于单独培养的成肌细胞。结论与雪旺细胞联合培养有利于原代培养大鼠成肌细胞的生长、增殖及其功能分化。
- 廖华余磊熊绍虎徐达传钟世镇
- 关键词：雪旺细胞成肌细胞生物学特性细胞培养
- L6细胞复合培养中平行结构支架材料的细胞黏附性观察
- 2005年
- 目的:检测在L6细胞培养过程中,具有平行结构支架材料的生物相容性。方法:将医用可吸收缝线平行折叠并制备成类似圆柱体样,与大鼠L6成肌细胞株体外复合培养。利用扫描电镜观察平行结构支架材料吸附的L6细胞的形态学结构,观察L6细胞在材料上的表面相容性。结果1天后,细胞在支架材料表面黏附、伸展,随时间的延长,显示出沿支架材料纵轴排列趋势,第6天的时候,可以见到类似肌小管的结构。结论:所制备的具有平行结构的支架材料具有良好的生物相容性。
- 余磊熊绍虎邱小忠廖华黄美贤欧阳钧
- γ射线照射诱导大鼠肝细胞线粒体自噬与再生的研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨线粒体自噬在细胞损伤后再生中的作用。方法在体外利用γ射线照射诱导大鼠肝细胞损伤,在亚细胞水平上观察肝细胞的损伤修复情况与线粒体自噬的关系,并利用分子生物学技术进行DNA凋亡片段的分析和线粒体RNA的RT-PCR分析。结果受损线粒体清除过程存在线粒体自噬,随着修复过程的进行细胞DNA凋亡程度下降,细胞自噬现象减少,细胞凋亡和线粒体自噬同时存在于损伤细胞中,通过RT-PCR分析发现肝组织的损伤修复与线粒体自噬后的线粒体再生有关。结论线粒体自噬可能为组织的损伤修复提供某种分子信号,促使新的线粒体再生。
- 邱小忠朴英杰余磊廖华秦建强杨俊焦培峰欧阳钧
- 关键词：Γ射线照射凋亡
- 阿尔茨海默病患者血液细胞线粒体内细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因存在缺失被引量：2
- 2005年
- 目的 调查 2 5例老年痴呆患者血细胞线粒体中细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因的突变情况 ,探讨线粒体DNA突变与阿尔茨海默病 (AD)性老年痴呆发生发展的关系。 方法 采用微量法提取血细胞总DNA直接作为PCR模板 ,进行巢式PCR扩增 ,最后采用DNA序列分析鉴定突变。 结果 在正常老人组 ,只扩增了 2 80bp的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因 (COX2 )扩增片段 ,而在老年痴呆患者中出现了 4 6 4bp和 2 80bp的多态性扩增片段 ,并且发现了 1个 32 0bp的新的线粒体DNA缺失片段 ,1位AD患者的COX2基因存在一种新的缺失后重组现象 ,COX2基因的 1条单链在np75 0 3处断裂 ,另 1条单链在np7785处断裂 ,这两个断裂的游离片段通过插入 1个额外的胞嘧啶核苷酸重新连接起来。 结论 老年痴呆患者中的COX2基因存在片段扩增多态性。
- 邱小忠欧阳钧余磊张黎声陆云涛原林钟世镇
- 携带增强绿色荧光蛋白基因的Id2真核表达载体构建被引量：2
- 2005年
- 目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具。方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;并通过细胞转染技术将Id2基因导入L6成肌细胞中。结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2cDNA片段,获取了转染外源性Id2基因的L6细胞。结论:我们成功构建了同时携带有G418筛选位点和增强绿色荧光蛋白的Id2真核表达载体。
- 张黎声邱小忠余磊秦建强陆云涛杨俊欧阳钧
- 关键词：真核表达载体
- 活性氧促使L6成肌细胞的分化被引量：9
- 2005年
- 目的探讨氧化应激对L6成肌细胞生长分化的影响。方法MTT法检测H2O2对L6细胞活力的影响;观察H2O2引起的细胞形态学变化,RT-PCR检测myogenin基因表达水平。结果在较短的处理时间内(1h),低浓度的活性氧(50μmol/LH2O2)有利于细胞的生长(P<0.05);H2O2处理12h后,50和150μmol/L的H2O2能够诱导成肌细胞分化的标记分子-myogenin基因的表达,形态学研究结果表明H2O2能够诱导肌管的形成,促使成肌细胞的分化。结论活性氧可能是细胞内诱导细胞生长与分化的信号分子。
- 邱小忠余磊廖华张黎声秦建强杨俊欧阳钧
- 关键词：H2O2细胞分化MYOGENIN
