湖北省自然科学基金(2000J104)
- 作品数：7 被引量：27H指数：4
- 相关作者：龙良启戴汉川伍晓雄曾翠平聂芬更多>>
- 相关机构：华中农业大学云南农业大学中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 鲤鱼肥胖基因的分子克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2005年
- 为了研究鲤鱼肥胖基因的结构特点和体外表达产物的生物学活性 ,利用RT PCR技术从鲤鱼肠系膜脂肪组织中扩增出鲤鱼肥胖基因的cDNA编码序列 ,分析表明该cDNA序列由 4 38个核苷酸组成 ,编码 14 6个氨基酸组成的多肽 ,鲤鱼肥胖基因与人、猪、鼠的相比 ,核苷酸同源性分别为 :84 %、 86 %、 95 % ;氨基酸的同源性分别为 84 %、 82 %、 96 %。构建了原核表达载体 pET 2 8a li,利用IPTG在大肠杆菌中进行了诱导表达 ,并对表达产物进行了初步纯化和生物活性检测 ,结果表明 ,鲤鱼肥胖基因在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达 ,融合蛋白质分子量约为 2 0kD ,经薄层扫描分析 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 2 0 3%。表达产物经过纯化和复性能够明显抑制小鼠的摄食和生长 。
- 戴汉川龙良启丁光
- 关键词：肥胖基因大肠杆菌肠系膜鲤鱼
- 人瘦素基因在胎盘中的分离鉴定及在大肠杆菌中的融合表达被引量：1
- 2007年
- 目的克隆人瘦素(leptin)基因,构建融合表达载体,实现在大肠杆菌中的高效表达。方法从人胎盘中提取RNA,利用反转录聚合链式反应(RT-PCR),克隆到人的leptin基因编码序列,对该基因片段进行T载体克隆、酶切和PCR鉴定,并且对其进行序列分析。将leptin基因插入到原核表达载体PET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,并利用脱氧胆酸钠对表达蛋白进行纯化。结果DNA序列分析表明,从胎盘中克隆的人leptin序列与文献报道的一致,酶切鉴定证实leptin基因正确地插入到了表达载体中,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳分析,人leptin基因在大肠杆菌中实现了高效融合表达,表达产物的分子量为20kD,经过纯化,得到了较纯的融合表达蛋白。结论从人胎盘中成功克隆了leptin基因,构建了原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究leptin的生物学功能奠定基础。
- 戴汉川龙良启曾翠平伍晓雄
- 关键词：瘦素胎盘克隆基因表达
- 蒙古鮊ob基因的克隆与组织表达特异性的初步研究
- 2006年
- 根据已知的人和鼠ob基因序列设计引物,通过运用RT-PCR技术首次从蒙古鮊脂肪组织的RNA中扩增获得ob基因片段,并经序列分析证实为ob基因编码区438 bp的序列.不同物种同源性比较表明ob基因序列具有很高的保守性:蒙古鮊与人、猪和鼠的ob基因核苷酸编码序列的同源性分别为82.9%、84.0%和99.1%;蒙古鮊ob基因编码的蛋白leptin氨基酸序列与人、猪和鼠氨基酸同源性分别为80.8%、78.8%和95.9%.用RT-PCR技术分析组织ob基因的表达特异性,结果表明:ob基因在脂肪和肝脏组织中的表达量最大,在心脏、脾脏、肌肉、脑、卵巢中的表达量次之,在肾脏中仅微量表达,而在精巢和肠道组织中则不表达.
- 潘庭双李海洋侯冠军龙良启
- 关键词：OB基因LEPTIN
- 鸭肥胖基因的分子克隆、序列分析及原核表达被引量：14
- 2005年
- 根据人、小鼠、猪等动物的肥胖基因编码区序列的保守性设计1对引物,利用RTPCR技术扩增出鸭肥胖基因的cDNA编码序列,将PCR产物插入pGEMT载体,经PCR和双酶切鉴定正确后进行序列测定,分析表明该cDNA序列由438个核苷酸组成,编码146个氨基酸组成的多肽,鸭与人、猪、小鼠、大鼠的核苷酸相似性分别为83%、84%、98%、94%;氨基酸的相似性分别为86%、83%、99%、96%。为了研究鸭肥胖基因体外表达的特点,构建了原核表达载体pET28aYa,在大肠杆菌中进行了诱导表达。结果表明,鸭肥胖基因在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达,融合蛋白分子量约为20ku,其中16ku为鸭肥胖基因表达的蛋白质,经薄层扫描分析,目的蛋白约占菌体总蛋白的30%。鸭肥胖基因的克隆和表达研究,为进一步研究鸭leptin的功能与应用奠定了基础。
- 戴汉川龙良启
- 关键词：OB基因基因表达LEPTIN
- 大口鲶ob基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2008年
- 聂芬戴汉川龙良启石小涛罗晓松邹世平
- 关键词：大口鲶OB基因毕赤酵母克隆
- 鸭leptin基因在大肠杆菌中的融合表达及生物学活性分析被引量：4
- 2007年
- 【目的】研究鸭leptin在体外高效表达特点,探讨表达产物的生物学活性及其功能。【方法】构建重组鸭leptin基因原核表达菌株,重组菌株经不同浓度IPTG和不同时间诱导后,对表达蛋白进行提取、纯化、复性和浓缩,经注射昆明小鼠后,对小鼠的体重﹑采食量和体脂含量进行分析。【结果】鸭leptin在大肠杆菌中实现了高效特异性融合表达,融合蛋白分子量约为20kD,其中16kD为鸭leptin基因表达产物,目的蛋白在0.2mmol·L-1IPTG的诱导下,表达量最高约占菌体总蛋白的57%。重组蛋白纯化﹑复性﹑浓缩后,能够明显降低小鼠摄食量、体重和体脂含量。【结论】鸭leptin基因在大肠杆菌中进行了高效融合表达,表达产物具有明显的生物学活性。
- 戴汉川张晓伟龙良启伍晓雄
- 关键词：LEPTIN基因基因表达生物学活性
