中国博士后科学基金(20090450790)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：徐颖蒋朴刘杨邓世雄幸宇更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Toll样受体4在高氧暴露对小胶质细胞功能影响中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在高浓度氧暴露对小胶质细胞功能的影响。方法:体外培养N9小胶质细胞(TLR4野生型)和EOC20小胶质细胞(TLR4敲除型),给予950 mL/L高氧分别暴露不同时段,建立高氧损伤细胞模型。RT-PCR检测N9细胞TLR4 mRNA表达时序变化;Westernblot法检测N9细胞TLR4蛋白表达;通过抗氧化剂N-乙酰半胱氨(N-acetyl-L-cysteine,NAC)干预,观测950 mL/L高氧暴露后2 h及6 h的N9和EOC20小胶质细胞内的活性氧(ROS)含量、NF-κB核转录活性及细胞上清中TNF-α含量。结果:高浓度氧暴露的N9小胶质细胞TLR4的表达上调,并呈一定时间依赖性,同时ROS活性,核转录因子NF-κB活性,TNF-α表达明显增高(P<0.05)。抗氧化剂NAC干预后,ROS活性明显降低,核转录因子NF-κB活性明显降低,细胞上清内TNF-α水平亦显著下调(P<0.05)。与N9小胶质细胞相比,高氧暴露后各时间点EOC20细胞的ROS活性,核转录因子NF-κB活性以及TNF-α表达均较低(P<0.05)。结论:TLR4参与调控高氧导致的小胶质细胞ROS的形成及炎症因子的释放。
- 刘杨蒋朴徐颖
- 关键词：高浓度氧小胶质细胞TOLL样受体4活性氧
- 小胶质细胞在高氧暴露未成熟脑损伤中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察新生小鼠高氧暴露后,小胶质细胞功能变化及未成熟脑内NG2细胞的凋亡情况,以探讨小胶质细胞在高氧未成熟脑损伤中的作用。方法将新生3 d(PND3)小鼠持续90%高浓度氧暴露48 h,建立新生鼠未成熟脑高氧脑损伤模型,并腹腔注射小胶质细胞活化抑制剂米诺环素,将小鼠分为对照(A)组,空气+米诺环素(AM)组,高氧(O)组和高氧+米诺环素(OM)组,其中AM组和OM组给予45 mg/kg米诺环素。免疫组化观察小胶质细胞活化情况,real-time PCR检测TLR4(Toll样受体4,Toll-like receptor 4)、TNF-α(tumor necrosis factor-α)表达水平。免疫荧光双标检测凋亡蛋白Caspase-3表达及NG2细胞(未成熟少突胶质细胞)凋亡情况。结果与A组比较,O组激活状态的小胶质细胞明显增多,TLR4表达上调。免疫荧光结果显示O组脑组织中凋亡细胞明显增多,且免疫荧光双标可见NG2与Caspase-3共表达。而与O组相比,OM组TLR4和TNF-α的表达明显降低(P<0.05),且Caspase-3表达及NG2细胞凋亡明显减少。结论围生期常压高浓度氧暴露通过激活小胶质细胞上调TLR4表达引起炎症反应致未成熟脑细胞凋亡,凋亡细胞包括少突胶质祖细胞(NG2+);抑制小胶质细胞活化可明显减轻高氧未成熟脑损伤。
- 杜敏刘扬蒋朴彭玲珑郭冉刘光建徐颖
- 关键词：高氧小胶质细胞
- Toll样受体4在新生小鼠常压高氧脑损伤中的作用被引量：8
- 2012年
- 目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在新生小鼠常压高氧脑损伤中的作用。方法新生3 d(P3)的TLR4野生型(W)和TLR4突变型(M)小鼠各36只,随机分为:100%高氧暴露组(WO2组,MO2组)及空气对照组(WA组,MA组),每组18只。高氧暴露组置于100%高氧箱中2 d,以空气中常规饲养的同龄小鼠作为空气对照组。各组于P6随机取12只小鼠脑组织,用于检测TLR4 mRNA表达及石蜡切片,染色观测神经细胞密度,并检测细胞凋亡情况;其余小鼠饲养至28 d,Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力。结果 RT-PCR提示WO2组TLR4 mRNA表达较WA组明显增加(P<0.05);染色WO2组在前额叶皮质区平均光密度低于WA组(P<0.05)及MO2组(P<0.05),在海马CA1区小于WA组(P<0.05),在两区凋亡细胞指数均较WA组及MO2组增高(P<0.05);MO2组与MA组比较,各个脑区神经细胞密度及凋亡指数均无明显差异(P>0.05)。Morris水迷宫WO2组与WA组比较,逃避潜伏期延长(P<0.05),目标象限停留时间缩短(P<0.05),穿越虚拟平台次数减少(P<0.05)。MO2组与MA组比较,上述各项指标均无明显差异。结论 TLR4功能缺失可减少高氧导致的未成熟神经细胞凋亡,降低新生期高氧暴露对远期学习记忆能力的损害。
- 陈坤蒋朴徐颖幸宇邓世雄
- 关键词：TOLL样受体4高氧症脑损伤凋亡水迷宫
- 高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨常压高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响。方法体外培养N9小胶质细胞,分别在900 ml/L高浓度氧中暴露2、6、12、16、24、48 h后（1）流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率;（2）DCFH-DA荧光探针检测活性氧（ROS）含量的变化;（3）RT-PCR检测Toll样受体4（TLR4）mRNA表达变化;（4）ELISA检测N9细胞培养上清中IL-1β和TNF-α的含量;（5）免疫荧光化学染色检测TLR4蛋白的表达变化。结果流式细胞术结果示,细胞凋亡率在高氧暴露12 h后明显高于空气对照组（P〈0.05）,16 h达高峰（P〈0.01）;高氧暴露2 h后,细胞内ROS含量明显增加,呈一定时间依赖性;TLR4 mRNA及蛋白表达水平明显高于空气对照组（P〈0.05）;高氧暴露后细胞上清中TNF-α及IL-1β含量随暴露时间延长而增加,均在6 h开始升高,12~16 h达高峰（P〈0.05）,IL-1β增高较TNF-α更为明显。结论高氧暴露后N9小胶质细胞TLR4通路激活,产生大量神经毒性因子（ROS、IL-1β及TNF-α）,细胞凋亡增加。
- 蒋朴徐颖胡良安刘杨邓世雄
- 关键词：常压高浓度氧TOLL样受体4活性氧促炎症因子凋亡
- 脂多糖可致敏高浓度氧对新生小鼠未成熟脑的损伤被引量：1
- 2014年
- 目的探讨低浓度脂多糖(LPS)处理后高浓度氧对新生小鼠未成熟脑损伤的影响及其作用机制。方法 48只PND3C57新生小鼠随机分为空气组、LPS处理组、高氧组、高氧+LPS组,采用LPS腹腔注射0.3 mg/kg,30 min后95%高浓度氧暴露24 h,LPS处理组、高氧组给予相应单因素处理,PND5断头取脑:(1)Tomato lectin免疫组化染色观测脑室周围白质小胶质细胞形态变化;(2)检测脑组织内脂质氧化物MDA含量;(3)Real-time PCR检测TNF-αmRNA表达变化;(4)Western-blot检测capsase-3蛋白表达。结果 Tomato lectin染色显示LPS组、高氧组及LPS+高氧组均可见脑室周围白质内小胶质细胞由静息态转化为激活态,高氧组激活的小胶质细胞数、脑内MDA含量、TNF-αmRNA表达、caspase-3蛋白表达均高于空气组、LPS组(P<0.05),LPS处理后高氧暴露(LPS+高氧组)能显著增强高氧暴露后的小胶质细胞活化效应(P<0.05)。结论高浓度氧暴露诱导小胶质细胞活化致未成熟脑损伤,低浓度LPS处理后能致敏上述效应。
- 刘杨蒋朴徐颖
- 关键词：高浓度氧脂多糖新生小鼠未成熟脑小胶质细胞
- 高氧对脂多糖诱导N9小胶质细胞促炎症作用的影响被引量：5
- 2012年
- 目的:观察常压高浓度氧对脂多糖诱导N9小胶质细胞Toll受体4、TNF-α表达时序变化,初步探讨高氧对小胶质细胞促炎反应的作用及调控机制。方法:体外培养N9小胶质细胞,随机分为6组(n=3):空气组、sLPS组、hLPS组、高氧组、高氧+sLPS组、高氧+hLPS组。LPS浓度为100 ng/mL(sLPS)、1 mg/L(hLPS)。高氧(900 mL/L)暴露时间分别为2 h、6 h、12 h、16 h、24 h。RT-PCR检测TLR4的表达时序变化;Western blot检测处理12 h后各组TLR4蛋白表达;ELISA检测各组处理6 h、12 h、16 h、24 h培养上清中TNF-α的含量。结果:RT-PCR显示hLPS组在6 h后、sLPS组在16 h后TLR4 mRNA均表达上调,并随LPS浓度增加、暴露时间延长逐渐升高(P<0.05),24 h时hLPS组表达最高。6 h后在各个时间点高氧+hLPS组与hLPS比较TLR4 mRNA下调(P<0.05),在16 h、24 h最为明显(P<0.05)。Westernblot检测12 h高氧+sLPS组、高氧+hLPS组TLR4蛋白水平均低于相应浓度的LPS组(P<0.05)。ELISA结果示在各个时间点高氧+sLPS组、高氧+hLPS组与相应浓度的LPS组比较TNF-α均明显上调(P<0.05)。结论:高浓度氧暴露促进LPS诱导N9小胶质细胞的促炎症反应,TLR4可能参与此过程的负向调控。
- 蒋朴徐颖刘杨黄雪竹幸宇邓世雄
- 关键词：常压高浓度氧脂多糖TNF-Α
