卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放基金(WK009-001)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：陶志勇夏惠方强陈勇王雪梅更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院安徽省芜湖市第二人民医院南阳市中心医院更多>>
- 发文基金：卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),诱导表达带有His标签的重组蛋白,并对PvALD在E.coli中表达进行优化,观察诱导时间、诱导剂浓度、培养基种类对该蛋白原核表达的影响。采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。结果:PvALD的PCR产物分子量为1.1 kb,重组质粒pET32c-PvALD经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为100%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为60 kD。PvALD在LB中1 mmol/L IPTG诱导6 h条件下获得最佳的表达效果。亲和层析纯化后的PvALD经SDS-PAGE电泳检测,呈现单一条带,Western blot分析结果显示,该重组蛋白只能被间日疟患者血清特异性识别,而不能被恶性疟患者血清识别。结论:成功克隆了PvALD基因,表达了重组PvALD蛋白,为以PvALD作为靶标的间日疟快速诊断方法提供了基础。
- 高迎陶志勇夏惠陈勇王雪梅方强
- 关键词：间日疟原虫醛缩酶原核表达纯化
- PvMSP1-19重组蛋白体外对间日疟患者外周血T细胞免疫功能的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨PvMSP1-19重组蛋白对间日疟既往感染者外周血T淋巴细胞功能的影响。方法间日疟既往感染者外周血单个核细胞(PBMC),在体外分别以PvMSP1-19重组蛋白和IL-2(刺激组)及IL-2(未刺激组)培养,培养第7d时刺激组细胞再用PvMSP1-19重组蛋白刺激24h,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群分泌IL-4和IFN-γ的情况;并以CFSE标记法检测T淋巴细胞的增殖反应。结果在分泌IL-4的淋巴细胞中,CD8+T细胞所占的比例刺激组(8.04%)明显高于未刺激组(3.46%);而分泌IFN-(的CD8+T细胞在刺激组(0.82%)与未刺激组(1.05%)间并无显著性差别。分泌IL-4和IFN-(的CD4+T细胞比例在刺激组(1.81%,0.19%)与未刺激组(1.89%,0.05%)间并无显著性差异。此外,CD8+T细胞的增殖指数刺激组(5.65%)也明显高于未刺激组(3.69%)。结论 PvMSP1-19重组蛋白能显著诱导间日疟既往感染者外周血CD8+T细胞增殖和优先分泌IL-4。
- 李光友夏惠陶志勇陈勇方强
- 关键词：间日疟IL-4
- 中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区的克隆表达与初步鉴定
- 2012年
- 目的克隆中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区基因(PvDBPⅡ),体外表达和鉴定重组PvDBPⅡ蛋白。方法PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvDBPⅡ基因,将产物插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建pET28a PvDBPⅡ重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),异丙基βD硫代吡喃半乳糖苷诱导表达带有His标签的重组蛋白,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行分析鉴定。结果PCR扩增的PvDBPII基因为1.1 kb,重组pET28a PvDBPⅡ质粒经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为99%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为44 kDa,且能被间日疟患者血清特异性识别。结论成功克隆了PvDBPⅡ基因,表达了重组PvDBPII蛋白,为进一步研究基于PvDBPⅡ的红内期间日疟疫苗奠定了基础。
- 刘丹夏惠陶志勇陈勇方强王雪梅孙新高颖买月琴
- 关键词：间日疟原虫疟疾
