国家自然科学基金(31270864)
- 作品数:2 被引量:0H指数:0
- 相关作者:李文哲刘红霞张向文孙世杰于蕊更多>>
- 相关机构:大连医科大学大连市中心医院延边州食品药品检验所更多>>
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- 相关领域:医药卫生更多>>
- B细胞受体核心岩藻糖基化调节成熟B细胞的信号转导
- 2016年
- 目的探讨核心岩藻糖基转移酶(Fut8)对成熟B细胞信号转导的影响。方法利用Fut8-siRNA逆转录病毒载体建立Fut8基因沉默成熟B细胞株(3-83-KD细胞),并将PLHCX-Fut8质粒导入3-83-KD细胞建立Fut8基因恢复成熟B细胞株(3-83-KD-Re)。用Real time-PCR、Western blot和HPLC法检测Fut8 mRNA、蛋白表达和Fut8酶活性,流式细胞仪和凝集素免疫印迹检测BCR的表达量和核心岩藻糖基化水平,Western blot技术检测细胞内酪氨酸磷酸化水平。结果与3-83细胞相比,3-83-KD细胞的BCR核心岩藻糖基化水平明显下降,而3-83-KD-Re细胞其表达得到恢复。Fut8基因沉默使3-83-KD细胞BCR介导的信号传导明显减弱,而3-83-KD-Re细胞的信号传导恢复正常。结论 Fut8修饰的核心岩藻糖基化在BCR介导的细胞信号转导过程中发挥重要的调节作用。
- 于蕊刘红霞孙世杰王惠国李文哲
- 关键词:SIRNA信号转导
- 阻断核心岩藻糖基化修饰对小鼠前B细胞信号传导能力的影响
- 2014年
- 目的 观察阻抑核心岩藻糖基化修饰对前B细胞信号传导的调节作用.方法 利用逆转录病毒包装技术建立核心岩藻糖转移酶Fut8基因沉默前B细胞株(70Z/3-Fut8-RNAi细胞).用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测Fur8 mRNA、蛋白表达和细胞内信号分子的酪氨酸磷酸化水平.结果 成功构建重组pSINsi-hU6-Fut8 siRNA质粒,逆转录病毒包装后病毒滴度可达2.1×10^5 CFU/ ml.Real-time PCR及Western blot检测结果表明70Z/3-Fut8-RNAi细胞的Fut8基因和蛋白表达明显下降,蛋白表达水平下调70% - 80%,mRNA水平下调70% -80%,以及pre-BCR介导的细胞信号传导,即CD79a及BTK磷酸化显著下降.结论 成功构建70Z/3-Fut8-RNAi细胞株,Fut8修饰的核心岩藻糖基化可能在早期B细胞的细胞信号传导过程中发挥重要的调节作用.
- 李志焦鑫艳杨岩徐莲花张向文金锦花李文哲
- 关键词:小干扰RNA细胞信号传导