广州市医药卫生科技项目(2009-ZPi-05)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：王晓红李罡李叶扬孙敬恩梁振文更多>>
- 相关机构：广州市红十字会医院合肥市第一人民医院暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省社会发展领域科技计划项目广州市医药卫生科技项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- QLT0267抑制整合素连接激酶对人皮肤成纤维细胞生物学特征的影响被引量：4
- 2013年
- 目的观察不同浓度的QLT0267抑制整合素连接激酶(ILK)的活性对成纤维细胞(Fb)生物学特征的影响。方法收集整形手术后剩余的皮肤标本,采用机械法加酶消化法分离培养Fb,随机分为空白对照组、5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组、DMSO组,其中空白对照组常规培养不做任何处理,5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组按培养基中QLT0267浓度分别为5、10、20、30 nmol/L加入QLT0267溶液[二甲基亚酮(DMSO)为溶剂],DMSO组加入与30 nM组中QLT0267溶液同体积的DMSO,分组处理12、24、48、72 h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态。CellTiter试剂盒检测分组处理24、48、72 h后各组Fb的增殖情况,并与空白对照组比较计算增殖抑制率;在48 h时间点,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及Western Blot法观察Fb表达磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、总蛋白激酶B(tAKT)蛋白的变化。对数据进行LDS-t检验和重复测量设计方差分析检验。结果经浓度大于10 nmol/L的ILK特异性抑制剂作用下,Fb膨胀,细胞核固缩或破碎,并出现细胞凋亡,随QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,细胞形态的改变更加明显。CellTiter试剂盒检测结果显示10 nmol/L以上的QLT0267能明显抑制Fb的增殖,且随着QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,增殖抑制率也升高(F处理组=94.242,P<0.05;F时间=240.490,P<0.05;F处理与时间=11.551,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示与对照组比较,10 nmol/L以上的ILK特异性抑制剂能诱导Fb凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示在各组tAKT的表达组间差异无统计学意义(P>0.05)的前提下,不同浓度QLT0267组pAKT的表达比空白对照组低,并随着QLT0267浓度的上升而pAKT蛋白生成下降(P<0.05)。结论 10 nmol/L浓度以上ILK特异性抑制剂QLT0267能刺激Fb发生形态改变,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。推测ILK可能通过影响Fb中pAKT的生成参与创面愈合过程的调控。
- 梁振文李叶扬林伟华李罡孙敬恩王仁坤王晓红
- 关键词：伤口愈合成纤维细胞整合素连接激酶
- 整合素连接激酶对含成纤维细胞胶原网格收缩的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨整合素连接激酶（ILK）对含成纤维细胞胶原网格（FPCL）收缩的影响和机制。方法（1）运用人皮肤成纤维细胞（Fb）构建FPCL，观察ILK-AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对FPCL收缩的影响。（2）运用Westernblot印迹法检测ILK小干扰RNA（siRNA）转染和LY294002对Fb中ILK和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。结果第24小时和第48小时LY294002组FPCL收缩率[（20．23±9．57）％、（22．47±10．93）％]明显低于对照组[（48．73±6．60）％、（54．33±12．88）％]（P〈0．05），第72、96和120小时FPCL收缩率为（25．58±7．40）％、（26．67±13．76）％、（28．82±3．48）％明显低于对照组（58．00±7．54）％、（59．67±11．29）％、（66．95±9．98）％和DMSO组（47．34±12．41）％、（52．26±10．90）％、（56．38±10．75）％（P〈0．05）。LY294002组和ILKsiRNA转染组α-SMA蛋白表达（0．992±0．255、1．225±0．323）与各对照组（2．009±0．820、2．190±0．577、1．758±0．732）比较均显著降低（P〈0．05）。结论阻断ILK信号通路可明显抑制Fb构建的FPCL收缩和F}）中α-SMA的表达。
- 李罡李叶扬戴丽冰米兰孙敬恩王仁坤
- 关键词：整合素连接激酶创面Α-平滑肌肌动蛋白
- 整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞VEGF的调控作用被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨整合素连接激酶（intergrin-linked kinase,ILK）在人瘢痕成纤维细胞中的表达及对成纤维细胞VEGF的调控作用.方法 8例人增生性瘢痕标本采用组织块法分离培养瘢痕成纤维细胞,选取第5～6代细胞备用.实验分为3组①对照组：不做任何处理,只用含10%FCS的DMEM培养液同步培养;②空质粒组：用空质粒转染人瘢痕成纤维细胞;③ILK cDNA表达质粒转染组：用ILK cDNA表达质粒转染人瘢痕成纤维细胞.首先通过免疫细胞化学染色法检测ILKcDNA转染前后成纤维细胞ILK、VEGF的表达变化;应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）及Western blot检测成纤维细胞ILK、VEGF的mRNA和蛋白水平变化;最后采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测3组成纤维细胞上清液中的VEGF蛋白含量.结果 免疫细胞化学染色结果显示瘢痕成纤维细胞胞浆中ILK表达阳性,VEGF表达不明显,经ILK cDNA转染细胞后ILK与VEGF表达均增强;RT-PCR显示ILK cDNA转染组VEGF mRNA表达（0.338±0.060）均高于对照组（0.022±0.001）和空质粒组（0.028±0.005,P＜0.05）;Western blot结果显示ILK cDNA转染组VEGF蛋白表达（0.819±0.019）显著高于对照组（0.607±0.033）和空质粒组（0.591±0.024,P＜0.05）;ELISA法检测ILK cDNA转染组的VEGF蛋白含量高于其他两组（P＜0.05）.结论 ILK可以上调VEGF mRNA及蛋白水平,并且促进成纤维细胞分泌VEGF,ILK可能通过提高瘢痕成纤维细胞合成分泌VEGF而促进增生性瘢痕血管生成.
- 米兰李叶扬林伟华李罡孙敬恩戴丽冰王仁坤
- 关键词：整合素连接激酶成纤维细胞血管内皮细胞生长因子血管生成
- 二氯化钴化学缺氧诱导瘢痕成纤维细胞整合素连接激酶的表达及其对细胞增殖的影Ⅱ向被引量：2
- 2013年
- 目的探讨二氯化铺（CoCL）化学缺氧对瘢痕Fli整合素连接激酶（1LK）表达的影响，以及其对细胞增殖的影响。方法体外培养7例患肯增生性瘢痕FL，取第5～6代细胞进行实验。7例患者的Fh各取6瓶，分别加入含6种终浓度为0、50、100、150、200、250txnlol／LCoCl，的DMEM培养液培养24h，采用实时荧光定量PCR法检测ILKmRNA表达。选择最适CoCl，浓度（100μmol／L）进行缺氧刺激，观察ILK蛋白于CoCI，作用0、1、2、4、12、24h的表达。将细胞分为正常对照组、阴性对照组、ILK小f扰RNA（siRNA）组，分别将con—siRNA及ILKsiRNA转染入后2组细胞，对照组仅以培养液培养，24h后弃堵养液，置于含6种浓度CoCI，的培养液中培养24h。各组各浓度4个复孑L。采剧3，3’-[1-（苯氨酰摹）-3，4-四氮唑]．二（4．甲氧基-6-硝基）苯磺酸钠（XTT）法检测各组细胞增殖水平。埘数据进行单因素方差分析以及重复测量方差分析，多重比较采用LSD法。结果100Ixmol／LCoCI，作用24h时ILKmRNA表达最高，与其他浓度CoCI，作用的Fl】相比差异有统计学意义（F=50．958，P〈0．001）。100μmol／LCoCl，作用时蛋白表达量（0．243±0．009）较0h（0．387±0．017）降低，2h（0．36l±0．010）开始增高，4h（0．584±0．028）、12h（0．730±0．029）、24h（0．785±0．031）ILK蛋白表达强度逐渐增强。其1、4、12、24h的ILK篮白表达艟与0h牛日比差异具有统计学意义（P值均小于0．05）。结果显示，正常对组在100μmol／I。CoCI2作用时细胞增殖水平最高（F=488．026，P〈0．001），从150μmol／I．起细胞增殖水平开始下降，250μmol／1．时细胞增殖水平显格低于0-μmol／[时水平（P值均小于0．05）。ILKsiRNA组细胞增殖水平在各浓度CoCI，作用下无明显变化（F=2．542，P=0.056）。ILKsiRNA纰的细胞增殖水平显著低于正常对照组及阴性对照组（F=2519．542，P〈0．
- 李叶扬李罡米兰林伟华孙敬恩汪锦伦梁振文王晓红
- 关键词：缺氧成纤维细胞整合素连接激酶增生性瘢痕
