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CTX-M-14和CTX-M-24编码基因的检测及其功能表达被引量：18: 2004年; 目的　了解上海华山医院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产生的超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)的基因型及其流行情况。方法　双纸片法和美国国家临床实验室标准委员会 (NCCLS)表型确定实验检测产ESBL菌株并对产ESBL菌株进行接合实验 ;提取产ESBL菌株及其转移接合子中的质粒 ,进行电泳分析 ;采用琼脂稀释法 ,测定各种菌株对多种抗菌药物的敏感性 ;TEM、SHV、CTX M 1组、CTX M 13组、Toho 1组通用引物检测产ESBL菌株及其转移接合子 ;编码框以外设计引物、聚合酶链反应 (PCR)扩增转移接合子中的CTX M 13组全编码基因 ,克隆入 pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序 ,分析其基因型 ;对这些产ESBL菌株进行脉冲场电泳 (PFGE)检测。结果　产ESBL菌株对多种 β 内酰胺类和非 β 内酰胺类抗生素耐药 ;产ESBL菌株可通过接合转移方式传递其耐药性 ,转移频率多为 10 -4～ 10 -5,多数非 β 内酰胺类抗生素的耐药性可以和ESBL耐药性发生共转移 ,琼脂糖电泳显示接合子从供体菌得到了一个 >2 3 1kb的质粒 ;转移接合子中仅CTX M 13组通用引物检测为阳性 ;4株转移接合子中CTX M 13组全编码基因序列与CTX M 14编码基因序列的同源性为 10 0 % ,其余 6株转移接合子中CTX M 13组全编码基因序列与CTX M 2; 熊自忠朱德妹汪复张婴元; 关键词：CTX-M-14 编码基因 Β内酰胺酶类头孢噻肟大肠杆菌克雷伯氏菌

检测超广谱β-内酰胺酶的简易方法: 2001年; 熊自忠朱德妹胡付品吴湜汪复; 关键词：超广谱Β-内酰胺酶 ESBLS NCCLS MIC

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究被引量：19: 2003年; 目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型 β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析 ;对产SHV型 β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳 (PFGE)检测。结果 :5 8株产ESBLs大肠埃希菌中 ,只有 3株细菌产生SHV型 β内酰胺酶 (5 .2 % ) ,其中 1株产生SHV 1 1(非ESBLs) ,另 2株产生SHV 1 2 (ESBLs) ;3株产SHV型 β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。结论 :临床分离产ESBLs大肠埃希菌中 ,SHV型 β内酰胺酶的基因型为SHV 1 1和SHV 1 2 ,SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型; 熊自忠朱德妹汪复张婴元; 关键词：大肠埃希菌超广谱Β内酰胺酶

肺炎克雷伯氏菌K99-1029中的ESBLs基因型分析被引量：11: 2003年; 目的　了解华山医院临床分离的肺炎克雷伯氏菌K99 10 2 9菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)的基因型。方法　编码框以外设计引物、PCR扩增K99 10 2 9转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序分析其基因型。结果　K99 10 2 9转移接合子所产生的三种酶编码基因序列分别与GenBank中TEM 1、SHV 12、CTX M 3编码基因序列的同源性为 10 0 % ;产SHV 12或CTX M 3克隆菌株对多数 β 内酰胺类抗生素耐药 ,SHV 12和CTX M 3对多数 β 内酰胺类抗生素具有水解作用 ,CTX M 3对头孢噻肟的水解能力明显强于头孢他啶 ;产TEM 1克隆菌株仅对青霉素类耐药 ,TEM 1对青霉素类有明显的水解作用。结论　临床分离的肺炎克雷伯氏菌K 99 10 2 9菌株同时产生TEM 1、SHV 12、CTX M 3型酶 ,可导致对大多数的 β 内酰胺类抗生素产生耐药性。; 熊自忠朱德妹汪复张婴元; 关键词：ESBLS 基因型肺炎克雷伯氏菌超广谱Β-内酰胺酶

CTX-M-14, CTX-M-24 and resistance in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae clinical isolates被引量：14: 2006年; Extended-spectrum β-lactamases （ESBLs） are the main cause of resistance to the third and forth-generation cephalosporins in Enterobacteriaceae, which are mediated by plasmids and can hydrolyze oxyiminoaminothiazolyl cephalosporins and monobactams. Most of ESBLs are mutants of the classical TEM and SHV types, with one or more amino-acid substitution（s） in the active site.; XIONG Zi-zhong ZHU De-mei WANG Fu ZHANG Ying-yuan; 关键词：CTX-M-14

临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中超广谱β-内酰胺酶的检测被引量：43: 2002年; 目的　检测临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)菌株的发生率、耐药性、流行性以及酶的基因型别。方法　采用双纸片法、琼脂稀释法、PCR、脉冲场电泳对 1 999年复旦大学附属华山医院临床分离的 559株肺炎克雷伯菌和 42 7株大肠埃希菌进行检测。结果　肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产ESBL菌株的发生率分别为 51 %和 2 3 .6 % ,产ESBL菌株主要分布于ICU和神经外科病房 ,对大多数的 β 内酰胺类和非 β 内酰胺类抗菌药物耐药 ;PFGE显示 ,产ESBL菌株 (尤其是产ESBL肺炎克雷伯菌株 )在ICU病房中存在同一菌株的克隆传播 ;PCR检测显示TEM型是最为常见的 β 内酰胺酶型别 ,CTX M型ESBL亦较为普遍。结论　产ESBL菌株在临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中较为普遍 ,而且为多重耐药菌株。; 熊自忠朱德妹张婴元汪复; 关键词：肺炎克雷伯氏菌大肠杆菌 Β内酰胺酶类

CTX-M-12编码基因的克隆、表达及序列分析被引量：16: 2003年; 目的　研究上海市华山医院临床分离的肺炎克雷伯菌K99 44 2菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)扩增K99 44 2转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入 pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序 ,分析其基因型。结果　K99 44 2转移接合子所产生ESBLs编码基因序列与GeneBank中CTX M 12编码基因序列的同源性为 10 0 %。结论　临床分离的肺炎克雷伯菌K99 44 2菌株产生CTX M 12型酶 ,可对多数的 β 内酰胺类抗菌药物产生耐药性。; 熊自忠朱德妹汪复张婴元; 关键词：基因克隆基因表达肺炎克雷伯菌肺炎

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国家自然科学基金(30070903)

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