国家质检总局科技计划项目(2012IK157)
- 作品数：9 被引量：44H指数：6
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- 相关机构：海南出入境检验检疫局东北林业大学辽宁医学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：5
- 2014年
- 本试验针对肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7高度保守的rfbE基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测EHEC O157∶H7实时荧光定量PCR方法。结果显示,该法灵敏度约为7.3CFU/mL,对310份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出阳性样本20份,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。表明建立的实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳李一经
- 关键词：H7荧光定量PCR
- 应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7被引量：11
- 2014年
- 利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法,其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。
- 徐义刚李丹丹崔丽春刘忠梅李苏龙
- 基于双启动引物特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的PCR方法被引量：7
- 2014年
- 以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因，利用一新型PCR引物设计方法——双启动引物（Dual-primingoligonucleotide，DPO），建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO—PCR方法，测试了DPO—PCR方法退火温度不敏感性、特异性及灵敏度，并在实践检测中进行了初步应用。结果显示：该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为1．51×10^2CFU／mL；退火温度不敏感性测试中，与常规PCR引物相比，DPO引物在48～68℃退火温度范围内均能够高效率地扩增靶基因；特异性测试中，DPO—PCR方法能特异地检测出目标菌，与其他菌株无非特异性扩增反应，比常规PCR方法显示出更强的特异性。实践应用证明，利用DPO—PCR方法对130份样本进行检测，共计检出9份单核细胞增生李斯特氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．30—2008）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性，为单核细胞增生李斯特氏菌的快速准确检测提供了新方法。
- 徐义刚李丹丹张柏棋刘忠梅魏冬旭刘新亮李苏龙
- 关键词：单核细胞增生李斯特氏菌
- 产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2013年
- 双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide，DPO）是一种新型的引物设计方法，具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因，设计了一对DPO引物，经过对TaqDNA聚合酶、Mg2＋、dNTP反应体系因子的优化，建立了产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法，测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示，该方法检测灵敏度为1．24×10^2CFU／ml，在45℃～65℃退火温度范围内，均可实现靶基因的高效扩增。该方法特异性强，测试菌株中4株产肠毒性大肠杆菌均为阳性结果，其余菌株为阴性结果，且无非特异性扩增发生。与常规PCR方法相比，DPO—PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度反复优化，同时DPO引物的特殊结构又增强了检测特异性，为致病性微生物的快速准确检测提供了新方法。
- 徐义刚李丹丹刘忠梅崔丽春李苏龙
- 基于DNA环介导等温扩增技术快速检测溶藻弧菌的研究被引量：4
- 2013年
- 溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以溶藻弧菌胶原酶基因为靶基因,建立了溶藻弧菌LAMP快速检测方法,45～60min内即可完成检测。试验结果显示,该LAMP方法可特异性检测溶藻弧菌,且灵敏度高,对纯培养溶藻弧菌的检测灵敏度约10CFU/mL,对污染水产品中溶藻弧菌的检测灵敏度为19CFU/mL。本研究建立的溶藻弧菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。
- 徐义刚吴岩刘忠梅李丹丹崔丽春李苏龙
- 关键词：溶藻弧菌环介导等温扩增
- 基于环介导等温扩增技术水产品中副溶血弧菌快速检测方法的建立与应用被引量：4
- 2013年
- 本试验基于环介导等温扩增(LAMP)技术,以副溶血弧菌toxR基因为靶基因,设计两对LAMP引物F3/B3和FIP/BIP,建立了副溶血弧菌LAMP检测方法,60min内即可完成检测。该LAMP方法特异性强、灵敏度高,对纯培养副溶血弧菌的检测灵敏度为42CFU/mL,对污染食品中副溶血弧菌的检测灵敏度为67CFU/mL。实践应用证明,本试验建立的副溶血弧菌LAMP检测方法操作简单、检测结果准确,具有良好的实用性。
- 徐义刚李丹丹刘新亮刘忠梅崔丽春李苏龙
- 关键词：副溶血弧菌
- 应用DPO-PCR方法特异性检测志贺氏菌被引量：9
- 2014年
- 本研究利用一种高特异性PCR引物设计方法——双启动寡核苷酸引物（dual-primingoligonucleotide，DPO），以志贺氏菌属侵袭性质粒抗原（ipaH）基因为靶基因，设计DPO引物，建立了特异性检测志贺氏菌属的DPO—PCR方法。结果显不，所建立的DPO-PCR方法检测灵敏度为1．65×10^2CFU／mL；与常规PCR引物相比，DPO引物设计简易，简化了PCR引物设计；DPO引物退火温度范围宽，在50-70℃退火温度内均可对靶基因进行高效扩增；DPO引物结构特殊，具有比常规PCR引物更高的特异性，反应中无非特异性扩增产生。实践检测结果显示，利用该方法对133份冻／鲜肉类、果蔬类、鲜牛奶、鸡蛋和熟食样本进行检测，共检出15份志贺氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．5-2012）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性和可靠性，为志贺氏菌快速、准确的检测提供了新手段。
- 徐义刚李丹丹刘忠梅吴岩李苏龙魏冬旭
- 关键词：志贺氏菌
- 动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 根据志贺氏菌属高度保守的ipaH基因序列,设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物源性食品中志贺氏菌的快速检验。结果表明,该法灵敏度约为2.8 cfu·mL-1,经对205份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出13份阳性样本,与国标(GB 4789.5-2012)方法的检测结果一致。表明建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好实用性。
- 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳李一经
- 关键词：志贺氏菌IPAH基因荧光定量PCR
- 动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：8
- 2014年
- 根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳马广鹏
- 关键词：沙门菌实时荧光定量PCR
