【研究目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的快速鉴定检测是控制该潜在危险性有害生物蔓延的有效途径。【方法】通过汁液摩擦接种、透射电镜观察、双抗夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)和RT-PCR方法对该病毒进行鉴定;同时对RT-PCR反应体系及扩增程序进行优化,建立CGMMV免疫捕获RT-PCR(IC-RT-PCR)检测方法。【结果】血清学、生物学、电镜观察和分子生物学方法证明供试样本为黄瓜绿斑驳花叶病毒引致。IC-RT-PCR方法可以简化RNA的提取,降低对试验材料要求。【结论】IC-RT-PCR的建立为CGMMV的检测提供了操作更为简便、特异性更强的快速、准确的检测方法。
黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）是葫芦科重要种传病毒之一。本文建立了免疫捕获RT—PCR（IC—RT—PCR）的分子检测方法直接从带毒种子中检测出该病毒，扩增获得其CP基因，并克隆到pMD18-T载体中，经核苷酸序列分析表明，该分离物CP基因全长为486个核苷酸，编码由161个氨基酸组成的17．3kDa蛋白，与国内外已报道的CGMMV的CP基因相比，其核苷酸序列的同源性为91．4％～99．4％，其推导的氨基酸同源性为98．8％～100％。IC-RT—PCR方法的建立，为检疫部门提供了从带毒种子中快速、准确检测该病毒的方法，很有应用前景。
从感染黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的葫芦植株上收取种子,通过苗期症状观察法、双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)、免疫捕获反转录PCR(IC-RT-PCR)法测定葫芦种子的带毒情况,并用生物学接种方法测定葫芦种子携带病毒的侵染活性。苗期症状观察法结果表明,199株幼苗有2株表现花叶斑驳症状,种子传毒率为1.01%;而利用DAS-ELISA和IC-RT-PCR法随机检测30粒葫芦病株种子,CGMMV检出率为100%。种子各部位携带的CGMMV接种葫芦表现典型的花叶斑驳症状,表明葫芦种子携带的CGMMV具有侵染活性。DAS-ELISA检测葫芦种子CGMMV的灵敏度为1/5120种子研磨液。
