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大鼠死后脑组织GAPDH mRNA多位点降解与晚期死亡时间的关系研究被引量：6: 2009年; 目的探讨看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)mRNA上不同位点降解速率的规律性及其用于晚期死亡时间推断的可行性。方法选取在死后较长时间内仍能检测出扩增产物的大鼠脑顶叶皮质,对GAPDH mRNA的6个不同位点进行不同时间点(死后即刻、1d、5d、9d、12d)的实时荧光定量RT-PCR监测,这些位点依次分布于GAPDH mRNA的5′～3′端。结果用Ct值表示,并将所得数据及其比值(GAPDH mRNA1～GAPDH mRNA5与GAPDH mRNA6的比值)与死亡时间(PMI)进行线性回归分析。结果各位点GAPDH mRNA均与死后经过时间有相关性,但不同位点的mRNA降解速率不同。GAPDH mRNA1～GAPDH mRNA3的斜率为1.577、1.596、1.553,这3个位点的降解速率基本相同。GAPDH mRNA4～GAPDH mRNA6的斜率为0.936、0.892、0.829,这3个位点的降解速率基本相同。但后3个位点mRNA的降解速率要慢于前3个位点(P<0.05)。以GAPDH mRNA6作为外标,GAPDH mRNA1～GAPDH mRNA3与其的比值同PMI之间有相关性(R2=0.898,0.871,0.879),而GAPDH mRNA4和GAPDH mRNA5与其的比值同PMI之间无相关性。结论同一组织中看家基因GAPDH的不同位点存在降解速率的差异性。选取降解速率慢的靠近3′端的位点作为引物,可能更适于研究晚期死亡时间的推断。; 任广睦王英元刘季; 关键词：法医病理学死亡时间推断 MRNA降解 GAPDH

死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性研究被引量：15: 2009年; 目的研究死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性,评价其用于死亡时间推断的价值。方法SD大鼠20只分为死后0、1、3、5、7d共5组,脊椎脱臼法处死大鼠,提取大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织,在相应时间段提取RNA,应用一步法RT-PCR技术检测各组织中看家基因GAPDH mRNA和β-actin mRNA的水平,Vilber凝胶图像分析系统测定扩增产物IOD值,SPSS 10.0统计软件对数据进行方差分析。结果GAPDH mRNA、β-actin mRNA扩增产物相对灰度与积分光密度值随死后经过时间的延长而逐渐减小,且与死亡时间显著相关,大鼠脾脏和脑组织GAPDH mRNA和β-actin mRNA在死后5d内可检出,心脏和肾脏在死后3d内可检出,而肝脏和肺脏GAPDH mRNA和β-actin mRNA降解较快,仅在死后1d内可检出。结论脑组织和脾脏中mRNA稳定性较好,适用于PMI特别是晚期PMI的推断。除环境温度外,环境湿度也是死亡时间推断中的重要影响因素。; 任广睦尉洁刘季王英元; 关键词：法医病理学死亡时间推断一步法RT-PCR

大鼠死后脑组织RNA降解与死亡时间推断的研究被引量：33: 2007年; 目的探讨SD大鼠死后脑组织中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)mRNA、18s rRNA含量的比值与死亡时间(PMI)的关系。方法SD大鼠处死后分别置于15℃、20℃环境中,采用TRIzol试剂提取SD大鼠在死后即刻、1、2、3、5、7d时脑组织中的总RNA,采用RT-PCR方法与凝胶图像分析技术检测18s rRNA和GAPDH mRNA的含量,并将二者的比值(GAPDHmRNA/18s rRNA)与PMI进行统计学回归分析。结果SD大鼠死后脑组织中GAPDH mRNA在2d时降解不明显,但到3、5、7d时降解程度显著增加,且随着温度的升高,降解速度增加;而18S rRNA降解缓慢,直到7d仍无显著性降解变化,且降解速度几乎不受温度的影响。对GAPDHmRNA/18s rRNA值(Y)与PMI(X)进行回归相关分析:20℃时,Y=0.62-0.004X(R=-0.981,P<0.001);15℃时,Y=0.965-0.001X(R=-0.709,P<0.001)。结论SD大鼠死后脑组织中GAPDHmRNA和18s rRNA基因的相对稳定性即GAPDHmRNA/18s rRNA值与PMI存在明显相关性。; 刘季宋贞柱谢润红任广睦王英元; 关键词：法医病理学 RRNA GAPDH

实时RT-PCR检测大鼠死后管家基因mRNA的时序性降解被引量：12: 2009年; 目的研究实时荧光定量RT-PCR方法检测死亡大鼠管家基因mRNA时序性降解的可行性,为死亡时间(postmortem interval,PMI)推断寻找新的研究手段。方法应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术,检测死后不同时间大鼠脑和脾中管家基因GAPDH mRNA及β-actin mRNA的水平,结果用循环阈值(简称Ct值)表示,分析死后经过时间与Ct值的线性关系,并建立死亡时间推断回归方程。结果GAPDH mRNA和β-actin mRNA的Ct值均与PMI之间存在显著的相关性。结论SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR在定量分析mRNA降解的研究中是一个较理想的技术手段。选用管家基因作为PMI推断的研究对象,可在法医检案中消除其他基因因为个体差异带来的误差,更具实用性。Ct值作为动态监测机体死后不同时间点的客观指标,与死后不同时间点的线性关系良好,推断死后经过时间尤其是晚期死亡时间较为理想。; 任广睦刘季王英元; 关键词：法医病理学逆转录聚合酶链反应死亡时间推断管家基因

甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量与死亡时间的相关性被引量：3: 2007年; 目的探讨甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化与死亡时间(PMI)的相关性。方法采用甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术,测定尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量随死后经过时间的延长而加速降解。平均DNA含量各指标(平均灰度、目标面积、目标面积比)与PMI之间的决定系数R2分别为0.960、0.987、0.988和0.990(P<0.001)。结论尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量与PMI之间具有明显相关性,甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术测定在研究甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量变化方面具有一定优势。; 任广睦荆彩亮刘季王亚方王英元; 关键词：死后经过时间 DNA降解

实时荧光定量PCR技术应用于核酸定量检测的研究进展及展望被引量：20: 2006年; 任广睦刘季王英元; 关键词：法医学 PCR 核酸定量

死亡大鼠组织中总RNA提取的质量控制及方法评价被引量：3: 2009年; 目的探讨不同商品化试剂盒在提取组织总RNA过程中的优劣与适用范围,为实验室的质量控制提供依据。方法采用以膜提取技术为基础(SV total RNA isolation system)和以异硫氰酸胍/苯酚法为原理(TRIzol总RNA提取试剂盒)的两种试剂盒对死亡大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织进行总RNA的提取与评价鉴定,并使用琼脂糖变性凝胶电泳和2100芯片生物分析仪对提取的总RNA进行完整性鉴定和质量控制评价。结果两种商品化试剂盒提取的总RNA纯度与得率均可满足实验要求。各组织脏器中总RNA得率依次为脾脏>肝脏>肾脏>大脑>肺脏>心脏。结论与TRIzol总RNA提取试剂盒相比,SV Total RNA Isolation System提取时对操作人员熟练度要求较低,2100芯片生物分析仪有望替代凝胶电泳技术用于总RNA提取时的质量控制。; 任广睦潘一民刘季孙俊红王英元; 关键词：法医病理学总RNA提取

实时荧光定量PCR技术的研究进展被引量：18: 2007年; 任广睦王英元; 关键词：实时荧光定量PCR技术核酸定量检测分子生物学灵敏性灵敏度

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山西高校科技研究开发项目(20051224)

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