深圳市科技计划项目(200902090)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心广东药学院桂林医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同地理株间日疟原虫SSUrRNA基因序列比较
- 2011年
- 目的测定我国间日疟原虫不同地理株红内期SSUrRNA基因序列,比较分析其分子特征。方法收集深圳、海南、湖北和河南四地间日疟患者血样5份(其中海南2份),并提取核酸DNA,采用PCR从核酸提取物中扩增出间日疟原虫SSUrRNA基因片段,纯化后分别与pGEM-Teasy质粒连接构建重组子并转化大肠杆菌JM109;阳性克隆以双酶切鉴定后,双脱氧末端终止法测定序列,采用BLAST和MEGA4软件分析序列相互关系特征。结果 5株间日疟原虫SSUrRNA基因扩增片段大小一致,约为998bp;核酸序列测定结果显示,所克隆的SSUrRNA基因片段均含有998个核苷酸,不同地理株间SSUrRNA基因序列有9个位点存在变异的可能,两两比对的同源性均高于99.5%,其中河南与湖北株序列的同源性为100.0%;与GenBank中报道的国外6株间日疟原虫相同序列作分子系统进化分析,国内5株间日疟原虫SSUrRNA基因序列与Sal 1株遗传距离小,亲缘关系接近。结论测定的国内间日疟原虫SSUrRNA基因序列在不同地理株间相对保守,其间存在的单核苷酸多态性与地理变化有一定程度的关系。
- 高世同黄达娜张荣锦耿艺介张仁利李晓恒吴少庭
- 关键词：间日疟原虫
- 间日疟原虫海南株SSUrRNA编码基因的克隆及其序列分析
- 2011年
- 目的克隆间日疟原虫海南株红内期小亚基核糖体核糖核酸(SSUrRNA)编码基因片段,并进行序列特征分析。方法采用聚合酶链反应技术从海南间日疟患者血样DNA中扩增出间日疟原虫SSUrRNA基因片段,纯化后与pGEM-Teasy质粒连接构建重组子并转化大肠杆菌JM109;阳性克隆以双酶切和PCR鉴定后,进行序列测定,采用BLAST软件分析其特征。结果 PCR扩增出间日疟原虫红内期SSUrRNA基因特异性片段大小约为998 bp;阳性克隆重组质粒经双酶切及PCR鉴定与预期结果一致;核酸序列测定显示插入的SSUrRNA基因扩增片段,含有998个核苷酸,与GenBank中的间日疟原虫Sal 1株、Pv2008/TR/DEL株及El Salvador株相同序列进行比对,其同源性均大于99%。结论成功克隆间日疟原虫海南株红内期SSUrRNA编码基因序列,该序列在不同地理株间相对稳定保守。
- 黄达娜高世同张仁利张荣锦耿艺介李晓恒吴少庭
- 关键词：间日疟原虫
- 不同检材微量血间日疟原虫PCR检测模板制备方法的研究
- 2012年
- 目的探寻不同检材微量血间日疟原虫PRC检测模板制备的方法。方法全血标本采用酚/氯仿抽提法、洗涤沉淀法、Chelex煮沸法和洗涤水煮法;滤纸干血滴及厚血膜标本以Chelex煮沸法和洗涤沉淀法制备模板。以间日疟原虫特异性引物作PCR扩增检测模板制备的效果。结果采用上述4种不同的方法制备的全血间日疟原虫DNA模板与采用Chelex法和洗涤沉淀法制备的滤纸干血滴以及厚血膜疟原虫DNA模板均可被扩增出1条341bp的间日疟原虫特异性DNA条带,与预期的扩增片断大小一致;不同方法制备的10份间日疟患者血样DNA模板用于PCR扩增检测,结果无明显差异。其中,Chelex煮沸法和洗涤沉淀法对不同检材的疟原虫感染血样DNA模板均能有效制备,且可在同一离心管中进行,减少了交叉污染的机会。结论Chelex法和洗涤沉淀法简便、实用,适用于不同检材微量血疟原虫PRC模板的制备。
- 高世同张仁利李晓恒黄达娜耿艺介吴少庭
- 关键词：间日疟原虫DNA提取聚合酶链反应
- 基于SSUrRNA基因序列的间日疟原虫LAMP检测技术的建立被引量：5
- 2011年
- 目的克隆分析间日疟原虫小亚基亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)特异性基因序列,建立间日疟原虫环介导等温扩增(LAMP)检测技术。方法针对间日疟原虫SSUrRNA种特异性基因序列设计1对引物,采用聚合酶链反应(PCR)从血样核酸提取物中扩增SSUrRNA基因片段,纯化后与pGEM-Teasy载体连接,构建重组质粒并转化大肠埃希菌JM109,PCR与双酶切鉴定筛选阳性克隆并测序,设计6条寡核苷酸片段,LAMP检测感染血样中间日疟原虫DNA,扩增产物作琼脂糖电泳分析或直接荧光染色肉眼观察。结果间日疟原虫SSUrRNA基因扩增片段大小约为235 bp;阳性克隆重组质粒插入的SSUrRNA基因扩增片段含有235个核苷酸,与GenBank中的Sal-1株、Belem株间日疟原虫相同序列进行比对,同源性为100%,与PV2008/TR/DEL株、PVK1294株、E1 Salvador株的同源性均为99%,与三日疟原虫、卵形疟原虫及恶性疟原虫的序列同源性均低于95%。将含有SSUrRNA靶基因的重组质粒以蒸馏水倍比稀释后做LAMP,试验的灵敏度为10 copy/μl;特异性检验显示间疟原虫患者血样DNA呈阳性反应,恶性疟原虫、弓形虫、日本血吸虫、华支睾吸虫感染者及正常人血DNA为阴性。结论扩增、克隆的间日原虫SSUrRNA基因序列不同地理株间同源性高,以其为靶基因建立的间日疟原虫LAMP检测技术灵敏度高、特异性好,且无需昂贵的仪器设备,具有推广应用价值。
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- 关键词：核酸扩增技术
- 恶性疟原虫海南株子孢子期SSU rRNA编码基因的克隆及序列分析
- 2010年
- 目的克隆恶性疟原虫海南株子孢子期小亚基核糖体核糖核酸（SSUrRNA）编码基因片段，分析其序列特征。方法根据恶性疟原虫基因库相关核酸序列设计1对引物，采用PCR方法从海南恶性疟患者血样核酸提取物中扩增出恶性疟原虫SSUrRNA基因片段，纯化后与pGEM-Teasy质粒连接，构建重组子并转化大肠杆菌JM109；阳性克隆经双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列，采用BLAST软件分析其特征。结果恶性疟原虫子孢子期SSUrRNA基因扩增片段大小约为347bp；阳性克隆重组质粒双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；核酸序列测定显示插入的SSUrRNA基因扩增片段含有347个核苷酸，与GenBank中的恶性疟原虫3D7株相同序列进行比对，其同源性为100％，而与7G8株的同源性则为98．0％，其中第153位碱基发生了缺失，第184位碱基由C取代了T，而第188位T碱基与第189位A碱基为插入碱基，第243位碱基则由T取代了c。结论成功克隆恶性疟原虫海南株孢子期SSUrRNA编码基因序列，该序列相对保守，不同地理株间存在单核苷酸多态性。
- 高世同张仁利黄达娜黄晓燕耿艺介吴少庭
- 关键词：恶性疟原虫SSU
