黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11551322)
- 作品数:8 被引量:23H指数:2
- 相关作者:于永忠崔玉东赵文博谭强包凯更多>>
- 相关机构:黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金:黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金黑龙江省教育科学“十二五”规划课题更多>>
- 相关领域:农业科学文化科学生物学更多>>
- 人羊膜上皮细胞对于生长因子和ORFV的敏感性研究被引量:2
- 2013年
- 研究人羊膜上皮细胞(hAEC)在不同生长因子存在时生长速度差异性及在羊口疮病毒(ORFV)作用下形态学变化特征。采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法分离获取hAEC并进行原代培养。分别向培养液中添加40 ng·mL-1表皮生长因子(EGF)和10 ng·mL-1的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况,以选择最适宜hAEC原代培养方法。体外实验用ORFV感染hAEC并记录。获得大量hAEC细胞。细胞培养时添加bFGF,hAEC生长和增殖速度显著加快。病毒感染出现明显细胞病变。胶原酶-胰蛋白酶联合消化及培养液中添加10 ng·mL-1的bFGF是hAEC较为适宜的原代培养方法;hAEC对于ORFV具有敏感性。
- 于永忠王欢谭强赵文博崔玉东
- 关键词:人羊膜上皮细胞细胞培养病毒感染敏感性
- 抗羊口疮B2L囊膜蛋白单抗的免疫学初步研究
- 2014年
- 探究一株抗羊口疮病毒B2L囊膜蛋白单抗的特异性识别毒株的能力,为后续利用单抗建立检测病毒的ELISA诊断试剂盒打下基础。通过将分离株OV/HLJ/04接种于牛睾丸细胞,并设立对照组,每天定时记录细胞病变过程。根据细胞病变情况选择最佳的免疫荧光时间,然后开展间接免疫荧光试验,并对产生病变的牛睾丸细胞进行PCR鉴定。病毒接种实验显示,细胞由接种病毒到产生病变的时间约3 d,3 d后接种细胞逐渐产生大规模的病变,实验选择2 d作为荧光实验的最佳时间。通过免疫荧光实验及PCR鉴定结果表明,所获单抗能够识别感染病毒的细胞。
- 谭强赵文博李朋娅王梦醒杨春华刘馨黄凤娟谭慧华于永忠
- 关键词:羊口疮病毒聚合酶链式反应间接免疫荧光
- 靶向ORFV-DNA ploymerase基因shRNA表达载体的构建被引量:3
- 2012年
- 羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(ORFV)引起的人畜共患的一种急性、接触性和具有高度嗜上皮性传染病,主要感染绵羊、山羊和人。由于该病缺乏全身性感染症状,因此在防治上也缺乏有效的疫苗或抗体。RNA干扰技术是目前较为成熟的抑制目的基因表达生物技术。ORFV的DNA ploymerase是病毒复制的关键酶。研究运用RNA干扰技术针对ORFV的DNAploymerase基因进行体外基因沉默研究,通过网络自动筛选平台设计并合成3个short-hairpin RNAs(shRNAs)片段,并与含U6启动子的pLL3.7质粒构建重组载体,结果表明pLL3.7-D596为重组阳性,进一步测序结果正确。研究可以为靶向ORFV-DNAploymerase基因的体内基因沉默提供参考数据。
- 于永忠郭雯吴欣媛王金珍崔玉东
- 关键词:羊口疮病毒DNA聚合酶
- 关于提高生物技术学科教育质量的思考
- 2012年
- 一抓好生物技术学科教育中的几个环节(一)抓好生物制品课的教材建设根据生物制品课特点,选取教材时应当有所侧重,尽量选用具备本学科代表性的教材,也可以将几部教材整合一处,为学生量身定做。例如,为避免内容重复、冗长,将微生物学、免疫学、生物化学、生物技术等基本理论和基本技能加以提炼,以时代进程和产品研发历程为轴线,贯穿以历史事件和社会影响,枚举阶段性新工艺和新成果,形成结构清晰、特色鲜明、
- 于永忠
- 关键词:生物制品生物技术专业学科教育教材建设社会责任感教材整合
- 羊口疮病毒OV/HLJ/04株对本体动物致病性的实验评价
- 2015年
- 利用本体动物感染发病的临床特征及外周血白细胞变化规律,探究羊口疮病毒(ORFV)致病性,为该病毒与宿主相互作用及其免疫逃逸机制的研究提供参考.将分离的毒株OV/HLJ/04进行初次和再次感染4月龄健康羔羊的处理,每天记录临床病理指标,运用血常规分析仪分析接种后0、3、7、14和21 d静脉血中白细胞组成含量的变化,然后通过间接ELISA方法测定血清中特异性抗抗体含量的变化,最后对痂皮进行PCR鉴定.本体动物实验初次感染病程包括潜伏期(前驱期0-4d)、发病期(5- 14 d)和转归期(15-21 d).血常规分析显示,发病羊外周血中的淋巴细胞呈现出“M”型的变化趋势,并于14d时达到峰值16.6×10^9/L.攻毒后14 d初次检出抗体,抗体效价为1∶200.再次感染显示,第14天的病灶大小由初次的18 mm×11 mm缩小至10 mm×4 mm,病程持续17d,较初次感染缩短4d.PCR鉴定结果证明痂皮样品中ORFV的存在.本研究结果表明病毒初次感染和再次感染本体宿主,临床症状相同,但后者病毒致病性有所减弱,此情况与宿主初次细胞免疫水平有关.
- 谭强于永忠赵文博李瑞航贺鹏亮宁鹏代建朱占波崔玉东
- 关键词:羊口疮病毒临床症状
- 羊口疮病毒感染对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响被引量:1
- 2013年
- 羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性、接触性和高度嗜上皮性人畜共患的动物传染病,主要感染绵羊和山羊,有时威胁人类。本研究将ORFV(OV/HLJ/04株)纯化后作为试验材料,采用巨噬细胞系RAW264.7作为病毒细胞宿主,RAW264.7在LPS体外激活的情况下,接种ORFV,研究ORFV感染对巨噬细胞凋亡的影响。结果表明,用LPS处理的试验组巨噬细胞形态学改变较大,凋亡量也较大;而没用LPS处理过的试验组巨噬细胞变化则相对较少。Westernblotting研究结果显示,细胞凋亡信号Caspase-3与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)在24h时对比,凋亡信号明显减弱,表明在24h的巨噬细胞凋亡水平有所下降。
- 于永忠柳婧孙虎男冯丽崔玉东
- 关键词:羊口疮病毒巨噬细胞细胞凋亡
- 羊口疮病毒黑龙江省分离株的分离鉴定被引量:17
- 2013年
- 为确定黑龙江大庆地区某羊场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原,本研究采用MDBK细胞培养途径从病羊的口唇部位的痂皮病料中分离出1株病毒。通过电镜观察和IFA鉴定证明该分离株为Orf病毒,命名为OV/HLJ/04。其F1L基因核苷酸序列测定和进化分析显示,OV/HLJ/04与国内报道的山西株(HQ221964)的遗传关系密切,同源性达到98.2%。将该病毒分离株进行回归本动物试验,接种羔羊发生严重的羊口疮。
- 于永忠谭强赵文博包凯崔玉东
- 关键词:羊口疮病毒进化分析
- 高校生物制品课发展式教学理念探讨被引量:2
- 2012年
- 本文提出"发展式"教学的核心理念,倡导师生淡化"固教固学"思想,以发展专业素质为主题开展教育活动,注重培养学生的主体性意识;倡导教师积极参与科研,发挥先进的学术思想对于教学实践的影响力,达到科研与教学相统一。采用多元化教学模式,适当增加生产实践比重,让学生学以致用,注重教学实效,从而培养更多生物技术应用型人才。
- 于永忠于立权张华
- 关键词:高校