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广州市科技攻关项目(2010U1-E00531-7)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
罗道飞
李文适
陈姗
季爱民
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相关机构:
南方医科大学
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发文基金:
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2011
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BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及脑中分布
被引量:1
2011年
目的在大肠杆菌中表达并纯化BDNF.TAT融合蛋白,研究其靶向性及在脑中的分布。方法重组质粒PET-30(a)-BDNF—TAT转染至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导其表达后用SP-Sepharose阳离子交换柱纯化,纯化后蛋白用0.4m01/L精氨酸倍比稀释法复性。KM种小鼠采用随机数字表法分为给药组[尾静脉注射复性后BDNF.TAT融合蛋白4μg(适量生理盐水溶解)1、阴性对照组(尾静脉注射等体积生理盐水)和空白对照组(不进行任何处理),每组各3只。3h后提取小鼠脑组织全蛋白.Western blotting检测脑组织中BDNF-TAT表达,SABC免疫组化染色观察BDNF—TAT在脑组织中的分布。结果获得纯度约90%活性的BDNF—TAT融合蛋白。给药组BDNF-TAT蛋白的相对表达量为1.897±0.286,阴性对照组BDNF—TAT蛋白的相对表达量为0.615±0.234。空白对照组BDNF—TAT蛋白的相对表达量为0.335±0.154,比较差异有统计学意义(F=39.019,P=0.000)。免疫组化染色结果显示给药组BDNF-TAT主要分布于小鼠脑组织海马CA1、CA3和DG区.而阴性对照组和空白对照组中没有明显阳性染色。结论BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达,并能通过外周给药靶向至小鼠脑组织。
罗道飞
李文适
陈姗
季爱民
关键词:
脑源性神经营养因子
融合蛋白
靶向性
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