国家教育部博士点基金(200806981027)
- 作品数：4 被引量：23H指数：2
- 相关作者：张静王亭忠魏峰马爱群倪雅娟更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院环境与疾病相关基因教育部重点实验室新疆医科大学附属中医医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导GFP标记大鼠骨髓间充质干细胞被引量：9
- 2010年
- 目的探究慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)的理想条件,以获得稳定高表达GFP的MSCs亚群。方法慢病毒载体介导GFP以25、50、100、200和400的感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别作用12 h和24 h感染MSCs,倒置荧光显微镜及流式细胞术检测各组的感染效率和荧光强度,MTT法评价感染对MSCs增殖的影响,从而确定理想的感染条件。平皿克隆套环法挑选理想条件下感染的MSCs单克隆。结果MOI为100、200和400作用24 h时,感染效率较高,分别为88.94%、99.65%、99.42%;MOI为100和200时,感染对MSCs增殖无影响,MOI为400时,感染的MSCs增殖减慢。挑选MOI为200、作用24 h感染组的单克隆细胞,其1月时感染效率为99.95%,且荧光均一、强度很强。结论MOI为200作用24 h是慢病毒载体介导GFP标记MSCs的理想条件;通过细胞单克隆技术可获得稳定高表达GFP的MSCs亚群。
- 魏峰马爱群王亭忠张静
- 关键词：间充质干细胞慢病毒载体绿色荧光蛋白单克隆
- 体内心肌缺血微环境下大鼠骨髓间充质干细胞钾离子通道的表达被引量：1
- 2013年
- 目的动态观察在体内心肌缺血微环境下,大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞分化过程中主要钾离子通道的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=60),将绿色荧光蛋白(green fluorescent pro-tein,GFP)标记的MSCs,心外膜下注射移植到心肌梗死周边区;免疫荧光染色观察移植后3d(MI-3d组)、5d(MI-5d组)、7d(MI-7d组)、9d(MI-9d组)MSCs的存活情况及其主要钾离子通道(Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3、Kca1.1)蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离以上各组心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用Real-time PCR测定其Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3、Kca1.1的mRNA表达。结果免疫荧光染色观察到移植的MSCs于移植后第3天开始持续表达Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3,不表达Kca1.1,于移植后第9天几乎未观察到MSCs;Real-time PCR结果显示移植后3、5、7d,移植的MSCs上Kv1.4和Kir2.1表达呈逐步增多趋势,差异具有统计学意义(P<0.05),Kv4.3的表达无此变化趋势,但高于未移植MSCs,未见明显差异。结论移植的MSCs在大鼠体内心肌缺血微环境下向心肌细胞分化的过程中能够表达部分钾离子通道表型,但其不能长时间、有效的存活。
- 张静魏峰王亭忠倪雅娟马爱群
- 关键词：骨髓间充质干细胞钾离子通道KIR2.1
- 非人工通气下大鼠急性心肌梗死模型的建立被引量：11
- 2010年
- 目的在非人工通气条件下,以较小的创伤且简单、快速地建立大鼠急性心肌梗死模型。方法 30只成年SD大鼠麻醉后,在自主呼吸条件下,于胸骨左缘第4肋间钝性分离肋间肌,暴露心脏,迅速结扎左冠状动脉前降支(LAD)建立心肌梗死模型。同时记录术前、术中及术后1、3 d,1、2周的心电图变化;术后2周开胸,观察心脏大体形态的改变,LAD供血区出现明显发白的梗死区即为模型建立成功;同时取8只模型的心脏标本行组织病理学HE染色以证实模型建立。结果 25只大鼠成功建立心肌梗死模型,模型存活率为83.33%。心电图监测显示LAD结扎后出现R波峰减低,随即出现ST段抬高和ST-T融合,30 min后可见病理性Q波。术后2周开胸,可见缺血区心肌颜色发白,室壁运动减弱。HE染色可见心肌梗死区心肌细胞消失,代之大量纤维和胶原组织增生,梗死周边区残存心肌排列紊乱、肌丝断裂,间质结构破坏、纤维组织增生。结论本方法可在非人工通气条件下,快速、简单、有效地建立大鼠急性心肌梗死模型。
- 魏峰张静韩克刘昱王亭忠倪雅娟马爱群
- 关键词：心肌梗死动物模型
- 非人工通气下建立大鼠心肌内干细胞移植模型被引量：2
- 2010年
- 背景:小动物心肌内干细胞移植术较多采用气管插管呼吸机辅助通气和剪断胸骨或肋骨而开胸造模,其损伤大、操作复杂、且影响模型存活率。目的:在非人工通气条件下,以较小创伤,简单快速建立正常及心肌梗死大鼠心肌内干细胞移植模型。方法:将SD大鼠随机均分2组:心肌梗死移植组建立心肌梗死模型后接受骨髓间充质干细胞移植,在心肌梗死周边区分5点迅速注射骨髓间充质干细胞;正常移植组于左心室前壁心外膜下进行注射,方法及注射量同心肌梗死移植组。移植后4d,取大鼠心脏行冰冻切片,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞存活与分布,免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞心肌特异性蛋白的表达。结果与结论:心肌梗死移植组模型存活率为80%,正常移植组存活率为93%。移植后4d,移植区可见大量骨髓间充质干细胞,呈带状分布,排列方向与心肌纤维一致,并表达缝隙连接蛋白Connexin43和肌球蛋白重链MYH。结果提示:在非人工通气条件下,快速、简单、有效地建立了大鼠心肌内干细胞移植模型。
- 魏峰张静王亭忠倪雅娟马爱群
- 关键词：细胞移植心肌梗死动物模型
