国家高技术研究发展计划(2006AA03Z323)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：刘勇孙静霍烛傅晶晶郝彦玲更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国医学科学院北京协和医学院新疆医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国综合性艾滋病研究项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- R5嗜性的人类免疫缺陷病毒-1在疾病不同阶段的生物学特性
- 2008年
- 目的研究HIV-1感染者不同时期分离的R5毒株的生物学特性。方法采用传统的共培养方法分离并培养HIV-1，用表达CD4和CC趋化因子受体5（CCR5）或CXC趋化因子受体4（CXCR4）的GHOST细胞系，通过流式细胞仪测定病毒辅助受体的利用和感染性，从而判断所分离毒株的CCR5嗜型（R5型毒株）；使用2ng P24病毒量感染正常人分离的外周血单个核细胞（PBMC）．ELISA法检测第1、3、5、7、10、15天的HIV-1 P24抗原．反映病毒复制能力；采用HIV-1核酸荧光定量检测试剂盒测定血浆病毒载量。数据分析采用t检验。结果HIV-1B’亚型感染者22例，其中CD4^＋细胞〉0．2×10^9／I。和CD4^＋细胞≤0．2×10^9／L各11例；昕分离的病毒仅利用CCR5辅助受体，均为R5型毒株．感染性的结果显示．来自CD4^＋细胞≤0．2×10^9／L的11株R5毒株的感染性为（7．3927±d．5842）％，而CD4^＋细胞〉0．2×10^9／L的为（2．6136±1．6105）％，差异有统计学意义（t=3．262，P〈0．05）；两组病毒复制滴度在第7天开始明显上升，培养第7、10、15天，两组病毒复制动力学差异有统计学意义（t值分别为3．771、2．509和2．260；P〈0．05），CD4^＋细胞≤0．2×10^9／L的R5毒株的复制能力较CD4^＋细胞〉0．2×10^9／L的明显增强；CD4^＋细胞≤0．2×10^9／L R5型毒株的病毒载量的对数值为（5．6068±0．8151）拷贝／mL，CD4^＋细胞〉0．2×10^9／L的为（4．7298±0．4316）拷贝／mL，两组差异有统计学意义（t=3．771，P〈0．05）。结论疾病进展过程中。即使病毒的辅助受体利用未从CCR5转变为CXCR4，但病毒的感染性和复制能力已有明显改变。
- 郭艳芳马丽英张跃新袁林孙坚萍徐维四赵全壁屈水令黄洋邵一鸣
- 关键词：HIV-1
- 重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化被引量：3
- 2009年
- 目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。
- 孙静傅晶晶霍烛陈佩胡云章刘勇郝彦玲
- 关键词：HIV-1包涵体纯化
- HIV-1 Gag蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件的优化被引量：4
- 2008年
- 为探讨诱导温度对于HIV-1Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30oC和37oC诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复性的不同。将30oC诱导的目的蛋白分别用2mol/L和8mol/L尿素溶解后做层析分离,比较两者的分离效果。结果发现,与37oC相比,30oC诱导表达的蛋白能有效溶于低浓度尿素,并且更容易复性。与8mol/L尿素溶解相比,30oC诱导的包涵体用2mol/L尿素溶解后通过凝胶过滤和离子交换层析纯化能得到更好的分离效果。这提示低温诱导的Gag包涵体中可能含有更多类似天然态构象的蛋白,而低浓度尿素有利于保持包涵体中蛋白的天然态构象。从而为包涵体蛋白的诱导表达和分离纯化提供了参考。
- 傅晶晶孙静陈佩霍烛范文玲郝彦玲刘勇
- 关键词：HIV-1GAG包涵体变性剂
- 慢性HIV-1感染人群血浆不同中和能力及与有关因素的研究
- 2008年
- 目的探讨安徽省既往献血的HIV慢性感染人群血浆中和能力及其与CD4、病毒载量的关系。方法从安徽省既往献血的294位HIV慢性感染人群静脉抽血，EDTA抗凝后进行血浆和外周血单个核细胞（PBMC）的分离、CD4和病毒载量的检测，采用拥有共享序列的临床分离病毒1597株和实验室株SF33病毒两种病毒分别做血浆的中和试验。用200TCID50病毒感染TZM-bl细胞，通过加入不同稀释度血浆，用Luciferase Assay System检测血浆的中和能力并计算中和50％的病毒进入细胞的血浆浓度（EC50）。结果294位患者血浆针对HIV-1实验株SF33和临床分离株1597的中和能力间差异有统计学意义（P〈0．05），针对实验株的中和能力明显高于临床分离株，91％患者血浆对HIV-1实验株SF33具有一定的中和抗体，其中EC50〉500的抗体水平较高的血浆占33％，对临床分离株1597的中和抗体阳性率为79％，其中EC50〉500的占7％。方差分析显示，血浆中和能力在CD4不同水平之间没有显著差异。294位HIV-1B′亚型感染的血浆病毒载量（lg）平均为4．40（2．60～6．46）。方差分析显示，血浆对SF33的中和能力在不同病毒载量水平之间有显著差异，病毒载量不同的各组血浆针对1597病毒的中和能力之间差异无统计学意义。经Spearman’s相关分析，对SF33株的中和水平与病毒载量呈正相关，对1597株的中和水平与病毒载量的相关性没有统计学意义，在病毒载量lg〈4的患者中，10．53％血浆样品的EC50高于500；在病毒载量lg≥5的患者中，6．46％血浆样品的EC50高于500。结论HIV-1慢性感染人群的血浆对实验株SF33的中和能力随着病毒复制能力的提高而增加，但对临床分离株1597的中和能力未见相关性。
- 纪燕马丽英屈水令袁林孙坚萍马鹏飞赵全璧黄洋黄江虹邵一鸣
- 关键词：慢性感染病毒载量CD4
