国家自然科学基金(30500555)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：中山大学广东省计划生育科学技术研究所更多>>
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- SHH AND RA CANNOT ENHANCE NEURONAL DIFFERENTIATION EFFICIENCY OF RHESUS MONKEY BONE MARROW MESENCHYMAL STEM CELLS
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- Ying Qi Fengyan Zhang Ge Song Xuerong Kong Ruzhang Jiang Mengfei Chen Jian Ge State Key Laboratory of Ophthalmology
- 文献传递
- 音猬因子诱导恒河猴间充质干细胞向神经样细胞的分化被引量：1
- 2010年
- 背景:骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞,是神经系统疾病细胞治疗的有效手段,但目前的时效尚不完善。目的:应用神经发育音猬因子诱导恒河猴骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化。方法:应用经典的维甲酸方案与音猬因子方案两种方法诱导恒河猴骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞,采用密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓间充质干细胞,倒置相差显微镜观察生长情况,MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞仪鉴定细胞表型,免疫组织化学鉴定分化细胞标志,透射电镜和扫描电镜观察分化细胞超微结构。结果与结论:体外分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞,经流式细胞仪表型鉴定,具有较高均一性。通过音猬因子诱导方案诱导处理7d后,分化细胞多数表现为NSE、NF-M、Tau和Nestin染色阳性,经图像统计分析发现经音猬因子诱导方案神经干细胞标志物Nestin阳性率显著高于维甲酸诱导方案(P<0.01),另一方面经维甲酸诱导方案诱导的细胞表现GFAP阳性率高于音猬因子诱导方案,差异具有显著性意义(P<0.05)。提示音猬因子诱导方案是一种诱导恒河猴骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的有效途径。
- 宋革张阳刘炳乾郑炜炜孙雪融
- 关键词：音猬因子恒河猴神经干细胞骨髓间质干细胞
- 恒河猴骨髓源性神经样细胞分化分子机制的基础研究
- 2011年
- 目的探讨神经发育音猬因子（SHH）诱导恒河猴骨髓间质细胞（BMSCs）向神经样细胞分化的丝裂原活化蛋白激酶信号分子变化。方法密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞，应用Western—blot方法检测SHH诱导细胞内信号蛋白变化，免疫组化方法观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）特异性抑制剂对细胞诱导过程的影响。结果SHH诱导恒河猴BMSCs分化为神经样细胞分化过程，细胞内激酶p38在加入诱导液5min后即被激活，随着时间的延长持续升高，1h达到最高峰，诱导前、后p38的总量未见变化；而磷酸化的ERKI／2被抑制，5min时即开始减少，在2h内逐渐降低，诱导前、后ERKI／2的总量未见变化。结论MAPK激酶系统参与SHH诱导恒河猴MSCs分化为神经样细胞分化过程，p38被激活，而ERK被抑制。
- 宋革张阳郑炜炜江儒章刘炳乾孙雪融
- 关键词：音猬因子丝裂原活化蛋白激酶恒河猴骨髓间充质细胞
- 音猬因子诱导恒河猴骨髓间质干细胞向神经元样细胞的分化与维甲酸方案比较其信号分子表达变化的意义
- 2010年
- 背景:近来研究发现在神经发育过程中,神经干细胞的分化受到来自周围微环境中诸多调控因子的作用,其中音猬因子是神经胚胎发育过程中关键性的诱导信号,有望作为一种有效的诱导剂调节神经细胞的分化。目的:探讨音猬因子诱导恒河猴骨髓间质干细胞向神经元样细胞分化过程中的信号分子表达变化。方法:常规密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓间质干细胞,诱导组加入含FGF2、B27、胎牛血清的L-DMEM预诱导24h撤离血清后,分别加入含0.5μmol/L维甲酸或400μmol/L音猬因子的DMEM诱导8d,以未诱导的细胞作为对照组。经神经元烯醇化酶荧光标记后,流式细胞仪筛选阳性细胞,应用RT-PCR与Western-blot法检测音猬因子和维甲酸诱导的细胞膜受体、细胞内信号蛋白的变化。结果与结论:音猬因子特异性膜受体Ptc、维甲酸特异性受体RARα、信号蛋白分子ptch1及Smad在正常细胞均有表达。经音猬因子诱导的细胞其Ptc表达上调,且随着诱导时间延长持续高表达,明显强于维甲酸诱导组及对照组(P<0.01);其细胞内ptch1蛋白分子表达与此趋势一致,但不能引起RARα表达上调。经维甲酸刺激的细胞在诱导过程中没有激活Ptc通路,诱导4d后RARα表达出现小幅上调并持续至6d,但这一结果差异不具有显著性意义,ptch1的表达无明显变化。经音猬因子、维甲酸诱导的细胞Smad分子表达均上调,但无明显差异。证实音猬因子诱导方案通过持续激活其特异性受体途径参与细胞诱导分化过程,而维甲酸诱导方案和音猬因子诱导方案之间没有显著受体途径交叉。
- 宋革张阳刘炳乾郑炜炜孙雪融
- 关键词：音猬因子信号调控恒河猴骨髓间质干细胞干细胞
- 囊胚显微注射建立嵌合体动物进行表皮干细胞可塑性的初步研究
- 目的:我们前期工作发现给予特定的微环境,表皮干细胞在体外可以分化为结、角膜上皮样细胞。鉴于此,通过构建猴—鼠嵌合体模型,进一步研究表皮干细胞在体内胚胎微环境中是否具有多向分化的潜能,从而为成体干细胞可塑性研究提供良好的工...
- 江儒章葛坚黄冰宋革段永恒刘敬波孙雪荣贾秀华
- 文献传递
- 血管生成抑制因子METH-1腺病毒载体的构建被引量：2
- 2006年
- 目的:利用大肠杆菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度的病毒。方法:实验于2004-08/2005-08在中山大学眼科中心国家重点实验室完成。自真核表达载体pMD18-T-METH1中酶切出METH1基因,亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-METH1,在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-METH1。以pAd-METH1为模板,经DNA测序正确后,用PacI酶切线性化pAd-METH1,转染293细胞,包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察转染细胞增强型绿色荧光蛋白的表达,采用聚合酶链反应方法对重组腺病毒进行鉴定。结果:①构建了携带外源基因人血管生成抑制因子的穿梭载体pAdTrack-CMV-METH1。②制备了METH1重组腺病毒载体pAdEasy-METH1。③METH1重组腺病毒可感染293细胞并在293细胞中进行有效的复制。结论:应用细菌内同源重组能够快速构建腺病毒载体,制备高滴度重组病毒,为METH1基因功能研究奠定了基础。
- 宋革张阳葛坚张燕江儒章
- 关键词：腺病毒科绿色荧光蛋白质类血管生成抑制剂
