国家自然科学基金(30500522)
- 作品数：7 被引量：30H指数：4
- 相关作者：赵洪洋姜晓兵靳峰朱贤立魏宇佳更多>>
- 相关机构：华中科技大学山东省济宁卫生学校中日友好医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 免疫磁珠法分离、培养人脑胶质瘤干细胞被引量：9
- 2008年
- 目的建立免疫磁珠法分离,并培养人脑胶质瘤干细胞的方法。方法将术中取得的脑胶质瘤标本,通过剪切、消化和吹打成单细胞悬液,筛网过滤,免疫磁珠分选试剂盒分选出CD133+细胞,用神经干细胞无血清培养法培养出具有单细胞克隆能力的细胞球,取第3代进行诱导分化,分化前后用免疫细胞荧光化学方法鉴定肿瘤干细胞及分化后细胞。结果免疫磁珠分选出的CD133+细胞,可悬浮生长并形成神经干细胞样细胞球,有较强的增殖能力,干细胞标志物巢蛋白(nestin)阳性,分化后细胞表达神经元小管相关蛋白-β3(-βtubulin 3)和星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)特异性抗原,而巢蛋白、CD133阴性,并具有肿瘤的核型。结论免疫磁珠分选法可避免原代培养中众多细胞混杂生长的发生,能够从大量肿瘤细胞中分离出只占极少比例的肿瘤干细胞,细胞结合磁珠后在体外可以长期培养和传代,进一步证实了肿瘤干细胞的存在,并为胶质瘤干细胞的研究奠定基础。
- 魏宇佳赵洪洋姜晓兵靳峰
- 关键词：肿瘤干细胞胶质瘤细胞分选
- 人脑胶质瘤中Livin、p53的表达及其与肿瘤恶性程度的关系
- 2008年
- 目的探讨Livin、p53在不同级别人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤恶性程度之间的关系，分析二者在胶质瘤细胞凋亡过程中的信号转导机制。方法应用免疫组织化学技术检测Livin、p53蛋白在41例人脑胶质瘤和10例正常脑组织中的表达。结果Livin、p53蛋白在10例正常脑组织中均不表达，在41例胶质瘤组织中表达率分别为87．8％和41．5％。Livin和p53蛋白在低级别胶质瘤中表达较低，在高级别胶质瘤中表达较高，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Spearman等级相关分析显示，Livin蛋白与p53蛋白表达呈正相关（r=1.000，P〈0.01）。结论Livin和p53在人脑胶质瘤组织中表达上调，细胞凋亡受到抑制，引起肿瘤恶性增殖，与胶质瘤病程发展、恶性程度明显相关，这可能是胶质瘤恶性增殖的一个机制。
- 靳峰赵洪洋朱红胜杨林冯军姜晓兵赵甲山朱贤立
- 关键词：神经胶质瘤LIVINP53
- 腺病毒载体介导的Polo样激酶1短发夹环RNA对胶质瘤体内外增殖的抑制作用被引量：5
- 2006年
- 目的探讨重组腺病毒载体介导的Polo样激酶1(PLK1)短发夹环RNA(shRNA)对人胶质瘤细胞株U251在体内外增殖的抑制作用。方法设计并合成针对PLK1的shRNA,并克隆至真核表达载体pEGFP-H1上,再将H1启动子和shRNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack上,通过在携带有pAdeasy-1质粒的BJ5183细菌内同源重组,生成针对PLK1的shRNA重组腺病毒载体pAD-H1／PLK1,经293细胞包装产生重组腺病毒AD-H1／PLK1,感染U251细胞。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测U251细胞PLK1 mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞G2／M期转变情况,以噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的增殖活性。同时制备裸鼠U251细胞移植瘤模型并注射重组腺病毒,观察肿瘤生长情况。结果成功构建针对PLK1基因的RNA干扰腺病毒表达载体,与AD-H1组比较AD-H1／PLK1组在转染24 h和48 h U251细胞PLK1 mRNA表达水平分别降低50．4％(P<0．01)和71．9％(P<0．01)。且感染AD-H1／PLK1病毒48 h后的U251细胞凋亡率从8．3％升至65．6％(P<0．01),而G2／M期的细胞从21．5％增至51．4％(P<0．01),细胞的增殖能力则下降50％(P<0．01)。体内实验表明重组腺病毒载体介导的PLK1 shRNA也明显抑制肿瘤生长(P<0．01)。结论腺病毒介导的RNA干扰技术可有效降低PLK1在胶质瘤细胞中的表达水平,抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性。
- 姜晓兵刘如恩张方成赵洪洋朱贤立
- 关键词：胶质瘤腺病毒
- 胶质瘤Polo样激酶1的表达与肿瘤细胞增殖活性及预后的关系被引量：1
- 2006年
- 目的探讨Polo样激酶1(PLK1)在人脑胶质瘤组织上的表达及其与胶质瘤细胞增殖活性、临床病理和预后的关系。方法应用免疫组化法检测47例胶质瘤和8例正常脑组织中的PLK1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并随访病人。结果正常脑组织未见PLK1明显表达。Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级脑胶质瘤中PLK1表达阳性率分别为64.3%、93.8%和100%,Ⅲ和Ⅳ级分别与Ⅰ～Ⅱ级比较差异有显著性意义(P<0.05)。PLK1表达与胶质瘤病理级别和PCNA表达均呈正相关(r=0.424,P<0.05;r=0.745,P<0.01)。PLK1高表达组和低表达组患者两年生存率分别为41.4%(12/29)和72.2%(13/18),差异显著(P<0.05)。结论PLK1在胶质瘤的发生发展和增殖中起重要作用,与肿瘤分化程度和患者预后密切相关。
- 程勇赵洪洋姜晓兵
- 关键词：PLK1胶质瘤增殖细胞核抗原预后
- 胶质瘤TJ905细胞及其干细胞抗凋亡与MRP基因的关系被引量：5
- 2008年
- 目的从人脑胶质瘤细胞TJ905中分离、培养肿瘤干细胞，并探讨其生物学特性及其抗凋亡和耐药基因的表达差异。方法TJ905细胞经免疫磁珠分离获取CD133^＋细胞，用无血清培养方法获得肿瘤干细胞球，用含有10％的胎牛血清培养基诱导分化，分化前后分别做兔抗人巢蛋白抗体（nestin）、鼠抗人微小管相关蛋白p（tubulin-β）、兔抗人胶质纤维酸性蛋白质（GFAP）、免疫细胞化学荧光染色，WST-8检测干细胞增殖活性，应用实时荧光定量RT-PCR技术检测Livin、Livinα、Livinβ、生存素和MRP1、MRP3的表达，并观察肿瘤干细胞形态学改变。结果TJ905细胞中含有少量CD133^＋细胞，约为0.21％，这些细胞具有典型的干细胞特性，nestin染色为阳性；在无血清培养基中呈悬浮球样生长，能够自我更新和增殖，在有血清培养基中能够分化，tubulin-β、GFAP染色为阳性。TJ905干细胞球Livin、Livinα、Livinβ、生存素和MRP-1、MRP-3mRNA表达量较TJ905单层培养细胞表达量都有不同程度的降低。结论TJg05细胞中含有少量肿瘤干细胞，TJ905干细胞球抗凋亡和MRP基因表达量较TJ905单层培养细胞表达量都有不同程度的降低，提示肿瘤干细胞在肿瘤耐药机制中发挥的作用不尽相同，也不总是造成肿瘤耐药的惟一因素。
- 靳峰李洪生赵雷魏宇佳张浩郭远瑾庞然姜晓兵赵洪洋
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞凋亡耐药
- Livin在人脑胶质瘤中的表达及生物学意义被引量：8
- 2006年
- 目的探讨Livin表达与人脑胶质瘤病理分级、分类和预后的相关性。方法采用免疫组化SP法,检测Livin在41例人脑胶质瘤和10例正常人脑组织中的表达。结果Livin在10例正常脑组织中均不表达,而在41例胶质瘤组织中表达阳性率为87.8%(P<0.01)。Livin表达与胶质瘤病理分级明显相关(P<0.05),与胶质瘤病理类型、是否复发无明显相关(P>0.05)。结论Livin在人脑胶质瘤组织中表达上调,提示Livin与胶质瘤病程发展、恶性程度明显相关,在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。
- 靳峰赵洪洋郭守刚姜晓兵赵甲山朱贤立
- 关键词：凋亡抑制蛋白LIVIN胶质瘤免疫组化
