博士科研启动基金(2010XQD19)
- 作品数：14 被引量：34H指数：3
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- 稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建
- 2014年
- 为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达。经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系。和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1mRNA表达下降71.28%±1.45%(P<0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50%±2.63%(P<0.05)。提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型。
- 魏传杰肖双江岚谭琰黄波龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞克隆
- Wnt信号通路在神经系统发育中的作用研究进展被引量：4
- 2017年
- Wnt信号通路在调节生物体组织和器官的发育,对细胞的分化、增殖、凋亡、迁移、细胞极性有着重要的作用,Wnt信号通路在早期胚胎神经系统的发育中起着关键角色作用。本文总结了Wnt信号通路在神经系统发育中的神经发生、轴突导向、树突发育三个方面的研究进展,为今后研究Wnt信号通路在神经系统发育中的作用及机制提供基础。
- 刘丽龙鼎新
- 关键词：WNT信号通路神经发生轴突树突
- pGenesil-1-Atg7-shRNA真核表达载体的构建
- 2014年
- 目的利用RNA干扰技术,构建pGenesil-1质粒载体介导靶向自噬基因Atg7的shRNA真核表达载体。方法根据GenBank中Atg7基因的cDNA序列(NM-001136031),设计有小发卡结构的三条寡核苷酸序列,连接到空载体pGenesil-1中,转化到JM109菌株,选取阳性克隆,进行酶切鉴定和DNA测序分析。结果经双酶切结果显示合成的shRNA序列成功连接到pGenesil-1质粒载体中,DNA测序结果证实干扰序列和目的序列相同,重组载体pGenesil-1-Atg7-shRNA构建成功。结论成功构建干扰人Atg7基因的重组表达载体,为研究Atg7蛋白的生物学功能提供了研究基础。
- 魏传杰肖双夏炎龙鼎新
- 关键词：RNA干扰自噬
- 斑马鱼在发育毒理学研究中的应用被引量：3
- 2016年
- 斑马鱼作为一种标准模式脊椎动物以其独特的优势被广泛应用于发育毒理学研究,目前研究工作涉及到几乎斑马鱼所有器官系统的发育过程及在毒理学中的应用。本文从心脏发育毒性、血管和血细胞发育毒性、神经发育毒性、肝脏及肾脏发育毒性、体节、肌肉和骨骼发育毒性等方面综述了斑马鱼应用研究进展。
- 李盛龙鼎新
- 关键词：斑马鱼胚胎发育毒理学
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞形态分化的影响,为更全面的了解TOCP的毒性提供依据。方法选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型,以全反式维甲酸(ATRA)为诱导分化工具药物,在诱导中以及诱导后以不同浓度TOCP作用,动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化,台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。结果 ATRA对SH-SY5Y细胞作用7 d可导致细胞出现长出较长突起的分化特征,在诱导分化过程中及诱导分化后以不同剂量TOCP作用于细胞,各剂量组与对照组相比,无论是突起长度还是分化细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),其中,0.6 mmol/L组抑制效果最强。结论 TOCP可抑制SH-SY5Y细胞的分化,并呈现一定时间和剂量依赖关系。
- 呼丹李小玲龙鼎新
- 关键词：全反式维甲酸分化
- TOCP对人成神经瘤细胞SH-SY5Y的氧化损伤作用被引量：6
- 2011年
- 目的研究三邻甲苯基磷酸酯（TOCP）对人成神经瘤细胞（SH．SY5Y）的氧化损伤作用。方法常规方法培养SH-SY5Y细胞，经TOCP染毒，分别检测不同浓度（0～1．0mmol／L）TOCP作用48h以及相同浓度FOCP（0．5mm01／L）作用不同时间后（0、24、48、72h）细胞内丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）的含量变化，MDA舍量用硫代巴比妥酸法（TBA）检测，CAT含量用可见光分光光度法检测。结果TOCP染毒SH-SY5Y细胞48h均半数抑制浓度（IC50）为0．77mmol／L。随着TOCP染毒浓度的增高，细胞内MDA的含量逐渐增高，CAT含量逐渐下降，这种变化趋势呈现明显的剂量一效应关系（P〈0．05）。随着TOCP染毒时间的延长，细胞内MDA和CAT含量均呈明显的时间一效应关系。结论TOCP对SH-SY5Y细胞有明显的氧化损伤作用。
- 龙鼎新伍一军蒋伟
- 关键词：SH-SY5Y细胞丙二醛过氧化氢酶
- Notch信号通路在相关疾病中的研究进展被引量：11
- 2016年
- Notch信号通路在进化上高度保守的一条转导系统,调控细胞的发育、增殖和分化等。Notch信号通路参与多种疾病过程,如肿瘤发生,神经退行性疾病,遗传性疾病等,调控神经系统和免疫系统等生理功能。本文进一步阐述Notch信号通路在肿瘤,阿尔茨海默症,动脉粥样硬化等疾病中的作用。
- 唐凯玲龙鼎新
- 关键词：NOTCH信号通路神经系统免疫系统心血管系统遗传疾病
- 三邻甲苯磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞calpain活性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)calpain活性的影响。方法用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,用不同浓度的TOCP(0、0.25、0.5、1.0mM)染毒未分化或分化的SH-SY5Y细胞不同时间(12、24、48h),用20μM盐酸维拉帕米(verapamil)和100μM二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-APB)预处理细胞15min后染毒TOCP 1.0mM 48h,采用荧光分光光度法测calpain活性。结果随着染毒浓度和时间的增加,TOCP活化未分化与分化的SH-SY5Y细胞calpain活性(P<0.05),钙通道抑制剂verapamil和2-APB预处理细胞能抑制TOCP引起的calpain活性升高(P<0.05)。结论 TOCP通过SH-SY5Y细胞内钙紊乱而活化calpain活性。
- 肖双魏传杰唐凯玲李盛龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞钙蛋白酶盐酸维拉帕米
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。
- 江岚李小玲魏传杰肖双谭琰刘瑶龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞PKC
- 敌百虫对人成神经瘤细胞SH-SY5Y增殖与分化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察敌百虫(trichlorfon,TCL)的对神经细胞增殖与分化的影响。方法用敌百虫(0～500μmol/L)染毒SH-SY5Y细胞,分别作用24 h和48 h,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期;采用维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5Y细胞分化,并用100μmol/L敌百虫染毒处理,观察细胞神经突起长出的长度及其与细胞体的大小之比,来判定神经元分化程度。结果敌百虫对细胞的增殖有显著的抑制作用,且显现剂量依赖相关和时间依赖相关。染毒24 h和48 h测得TCL对SH-SY5Y细胞的半数抑制浓度(IC50)分别是225μmol/L和177μmol/L。细胞诱导分化实验结果显示,对照细胞突起较长较多,而敌百虫处理神经细胞的突起则较少较短,提示敌百虫具有抑制神经突起生长的作用。流式细胞术分析表明,100μmol/L和200μmol/L敌百虫染毒24 h或48 h对SH-SY5Y细胞的运行周期产生显著影响,使细胞周期阻滞在G2/M期,但并没有使细胞产生凋亡。结论敌百虫可抑制神经突起的生长;敌百虫对SH-SY5Y细胞的增殖抑制与其对细胞周期的影响(阻滞细胞周期于G2/M期)有关。
- 龙鼎新伍一军
- 关键词：敌百虫细胞周期细胞增殖细胞分化
