国家自然科学基金(39970770)
- 作品数：13 被引量：34H指数：4
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- 相关机构：首都医科大学附属北京朝阳医院首都医科大学宣武医院吉林大学第一医院更多>>
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- 大鼠骨髓树突状细胞的分离和培养
- 2009年
- 目的:探讨体外分离和培养大鼠源性树突状细胞的方法,及其经卵巢肿瘤提取物致敏后在体内诱发抗肿瘤免疫效应。方法:(1)取大鼠骨髓悬液,经Tris-NH4Cl裂解红细胞后得到大鼠骨髓单个核细胞;(2)应用大鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、大鼠重组白细胞介素4(rrIL-4)、大鼠重组肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)进行体外培养;(3)培养第5天时加入NuTu-19 Fischer 344大鼠卵巢肿瘤细胞提取物,获得负载卵巢肿瘤提取物的树突状细胞;(4)体内实验检测DC诱发抗肿瘤免疫效力。结果:(1)大鼠骨髓来源的骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)在相关细胞因子作用下可培养出成熟的树突状细胞;(2)体内实验表明,预先免疫的大鼠肿瘤出现时间较晚,肿瘤生长速度较慢,与对照组有显著差异(P<0.05),抑瘤率59.4%;治疗组大鼠在实验过程中肿瘤体积小,最终肿瘤质量轻,与对照组有显著差异(P<0.05),与先行免疫组无明显差异(P>0.05),抑瘤率69.3%。结论:大鼠骨髓来源的BMMNC可培养出成熟的树突状细胞。DC可负载并提呈肿瘤提取物,体内实验显示肿瘤提取物致敏的树突状细胞可以杀伤肿瘤细胞。
- 杨贺勤张震宇
- 关键词：树突状细胞细胞培养
- 树突细胞疫苗诱发抗肿瘤免疫特异性的体内研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨卵巢肿瘤提取物负载的树突细胞(DC)体内诱发抗肿瘤免疫效应的特异性。方法:应用rrGM-CSF(终浓度40ng/ml)、rrIL-4(终浓度40ng/ml)及rrTNF-α(终浓度40ng/ml)体外培养Fischer344大鼠骨髓来源的单个核细胞,于培养第12天通过流式细胞仪检测细胞标志CD86、OX62抗原,用电镜观察细胞形态,证实获得树突细胞。分别利用NuTu-19卵巢肿瘤细胞和CBRH-7919大鼠肝癌细胞肿瘤提取物制备肿瘤抗原致敏Fischer344大鼠骨髓来源的树突细胞,得到两种肿瘤DC疫苗,即NuTu-DC和CBRH-DC。体内试验:Fischer344大鼠随机分为3组(1)对照组;(2)NuTu-DC治疗组;(3)CBRH-DC治疗组。于大鼠皮下接种NuTu-19细胞,5天后出瘤,开始于肿瘤接种对侧接种DC疫苗,每隔1周给予疫苗1次,共治疗2次。于第0天(未荷瘤时),第5天(出瘤后),第26天(治疗后1周),第40天(治疗后3周)天眼球取血分析各组动物外周血CD3/4/8表达水平;于荷瘤30,32,34,36,38,40天测量肿瘤体积,观察大鼠皮下肿瘤生长情况。于荷瘤40天处死各组实验动物,取肿瘤组织称重,评价治疗效果。结果:大鼠骨髓来源的骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclearcells,BMMNC)在相关细胞因子的作用下可以培养出成熟的树突细胞,负载肿瘤提取物后,高表达表面抗原OX-62,CD-86。流式细胞仪检测外周血CD3/4/8水平显示:各组大鼠CD4/CD8比值升高,与未荷瘤时(第0天)相比,差异有统计学意义(P<0.05);CD3+CD4+T细胞表达百分率及CD4/CD8在治疗后3周时(第40天)NuTu-DC治疗组明显高于另两组(P<0.05),而对照组与CBRH-DC比较无差异。通过测量肿瘤生长曲线可见NuTu-DC治疗组各大鼠肿瘤体积较其它两组小,荷瘤第40天时,NuTu-DC治疗组为106.57±56.65mm3,对照组为299.78±118.17mm3,CBRH-DC治疗组为299.12±85.61mm3,与对照组和CBRH-DC组比较差异有统计学意义(P<0.01);而且NuTu-DC治疗组肿瘤平均瘤重为0.197±0.039g,与对照组和CBRH-DC治疗组有显著差异(P<0.01
- 杨贺勤张震宇
- 关键词：树突细胞卵巢肿瘤免疫疗法
- S-100阳性树突状细胞在卵巢上皮癌组织中的分布及意义被引量：6
- 2004年
- 目的 :探讨S 10 0 ( +)树突状细胞 (dendriticcell,DC)在卵巢上皮癌组织中的分布及意义。方法 :用抗S 10 0蛋白抗体和免疫组织化学的方法检测人卵巢上皮癌患者肿瘤组织中DC的分布及数量。结果 :共检测 5 9例卵巢上皮肿瘤患者 ,肿瘤组织中见DC浸润 ,S 10 0 ( +)DC数与肿瘤临床分期(r =-0 3 10 ,P <0 0 1)和组织分级(r =-0 45 8,P <0 0 5 )呈负相关 ;S 10 0 ( +)DC数“大量组 (≥ 10 /HPF)”的 3、5年生存率 ( 5 8 3 %、41 7% )比“少量组 ( <10 /HPF)”( 3 1 4%、0 )明显提高 ;P <0 0 1。结论
- 刘崇东张震宇王淑珍夏成青
- 关键词：抗原提呈细胞
- 肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞用于大鼠卵巢上皮癌免疫预防的体内研究被引量：4
- 2008年
- 目的:通过负载肿瘤冻融抗原的树突状细胞(DC)预防大鼠卵巢上皮癌发生的体内试验,进行DC疫苗用于卵巢癌防治的可行性研究。方法:取大鼠骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)体外培养获得成熟DC,诱导BMMNC细胞分化的第3天加入大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19的冻融抗原,获得负载肿瘤抗原(TAA)的成熟DC;将致敏的DC制成DC疫苗经尾静脉注射大鼠体内,后于大鼠皮下接种NuTu-19细胞,观察大鼠皮下肿瘤的生长情况;注射生理盐水、NuTu-19冻融抗原、未致敏DC作为对照组。结果:大鼠骨髓来源的BMMNC在相关细胞因子的作用下可以培养出成熟的DC。TAA致敏的DC疫苗体内试验中肿瘤发生率较低,成瘤时间较晚,肿瘤生长速度缓慢,与对照组有显著性差别(P<0.01)。结论:大鼠骨髓来源的BMMNC可以培养出成熟的DC。DC可负载并提呈肿瘤抗原,体内试验证明负载癌抗原的DC可以杀伤肿瘤细胞,DC疫苗能够对肿瘤的发生起到主动免疫预防作用,在今后的肿瘤免疫防治方面有着广阔的前景。
- 翟妍张震宇王淑珍乔宝丽
- 关键词：树突状细胞免疫治疗
- 肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞对卵巢上皮癌疗效的体外研究
- 2009年
- 目的探讨肿瘤细胞裂解物致敏树突状细胞（DC）疫苗对卵巢癌治疗的可行性。方法采取随机对照研究方法，将大鼠分成实验组与对照组，每组20只，每组随机抽取10只大鼠进行DC体外培养，其余大鼠随后取脾脏淋巴细胞进行杀伤率试验，实验组于培养的第3天加入大鼠卵巢癌细胞系NuTu-19的冻融抗原，培养14d后将两组DC分别与各组剩余大鼠脾脏分离的T淋巴细胞共同培养，观察形态学。结果实验组DC在体外试验中可以有效地刺激T淋巴细胞的增殖，诱导生成杀伤性T淋巴细胞（CTL），在效靶比（SC：RC）为1：3、1：10、1：30和1：100时：淋巴细胞刺激指数（SI）实验组均高于对照组（P〈0．01）；在相同效靶比（SC：RC=3：1，10：1，30：1）时：对肿瘤细胞的杀伤率实验组分别为（40．9±1．2）％、（69．8±1．8）％及（89．0±0．4）％，对照组分别为（30．9±1．9）％、（34．4±2．1）％及（51．0±1．5）％，两者比较差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论肿瘤细胞裂解物致敏后的DC疫苗能够激活T淋巴细胞，对肿瘤细胞产生体外免疫杀伤作用。
- 翟妍张震宇王淑珍乔宝丽刘晋伟
- 关键词：树突状细胞卵巢癌
- 脐血树突状细胞的体外培养及免疫学特征被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨脐血树突状细胞 (DC)的体外诱导及其免疫学特征。方法 无菌条件下常规采集脐血 ,采用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞 ,去除悬浮细胞后获得单核细胞。将获得的单核细胞分为两组 ,组 1:在含白介素 4(IL 4 )和粒细胞巨细胞集落刺激因子 (GM CSF)的DMEM液中培养。组 2 :在上述培养液中孵育 5天后 ,加入肿瘤坏死因子 (TNF α)。收集培养 7天的贴壁细胞 ,分别用流式细胞仪检测CD83、CD86 、CD54、CD1α和CD1 4等免疫因子。结果 ①组 1培养 12～ 14天树突状细胞数含量约 2 0 %。组 2培养 7～ 10天即可见到明显树突状细胞达 30 %。②TNF α可明显增加干细胞早期增殖能力 ,两组相比P <0 0 5。③IL 4、GM CSF和TNF α可诱导脐血来源的单核细胞 (即DC前体细胞 )分化为成熟的DC ,两组均高表达DC特异性抗原CD83、CD86 、CD54、CD1α。结论 脐血中的DC前体细胞可在体外诱导成为功能性 (即成熟 )DC。GM CSF联合TNF α不仅可以促进细胞形态的生长 ,而且明显增加DC生成数量。故脐血有可能成为DC免疫治疗丰富的来源。
- 刘崇东王玫张震宇李琳
- 关键词：脐血树突状细胞肿瘤坏死因子
- 卵巢肿瘤树突细胞疫苗的研究
- 2008年
- 疫苗是治疗肿瘤的新方法之一。树突细胞是机体内的一种专职抗原提呈细胞,在肿瘤免疫中起重要作用。现对树突细胞在卵巢肿瘤的应用做一综述,重点介绍卵巢肿瘤树突细胞的类型。
- 杨贺勤张震宇
- 关键词：树突细胞卵巢肿瘤疫苗
- 卵巢癌细胞和脐血树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫效应的初步研究被引量：8
- 2007年
- 目的:将脐血来源的树突状细胞(DC)与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞相融合,获得SKOV3/DC融合细胞,分析其生物学特性及体外诱导抗卵巢癌肿瘤免疫的能力。方法:1)将用pKH26红色荧光染料标记脐血来源的DC后,聚乙二醇法(PEG)融合DC与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,流式细胞仪分选融合细胞。2)应用细胞培养技术、流式细胞术及光学显微镜检测SKOV3/DC的生长特性和形态学特征;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察融合细胞体外刺激混合淋巴细胞反应的能力及诱导特异性肿瘤免疫的能力。结果:1)DC和SKOV3按10:1比例融合,融合率约为8.5%。融合细胞可在体外缓慢增殖,CA125抗原及CD1a、CD80、CD86、HLA-DR、MHC-I分子表达阳性。2) SKOV3/DC在体外能有效的激发混合淋巴细胞增殖反应,可明显激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL),对卵巢癌细胞株SKOV3有特异性杀伤效应。结论:利用PEG法制备的SKOV3/DC融合细胞兼具两种亲本细胞的部分特性,在体外能够诱导特异性抗肿瘤免疫。本研究将SKOV3/DC作为肿瘤疫苗,为其在卵巢癌主动免疫治疗研究中的进一步应用打下了基础。
- 李金凤张震宇王淑珍刘晋玮
- 关键词：肿瘤疫苗树突状细胞融合细胞抗肿瘤免疫
- 卵巢癌细胞和脐血树突状细胞融合瘤苗的体外培养与免疫原性的研究被引量：2
- 2007年
- 目的将脐血来源的树突状细胞(DC)与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞相融合,获得SKOV3/DC融合细胞,分析其生物学特性及其免疫原性。方法①利用PKH26红色荧光染料标记脐血来源的DC,用聚乙二醇法(PEG)融合DC与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,用流式细胞仪分选融合细胞(SKOV3/DC)。②应用细胞培养技术、流式细胞术及光学显微镜检测SKOV3/DC的生长特性和形态学特征,并分析其免疫原性。结果①脐血来源的单核细胞(Mo)在相关细胞因子的作用下,可诱导分化为DC,其可表达表面抗原CD1a、CD80、CD86、HLA-DR及MHC-Ⅰ,不表达CA125。②人卵巢癌细胞株SKOV3细胞为CA125及MHC-Ⅰ双阳性细胞,不表达CD1a、CD80、CD86和HLA-DR分子。③树突状细胞和SKOV3按10∶1比例融合,融合率约为8.5%。SKOV3/DC形态与亲本肿瘤细胞相似,CA125抗原表达呈阳性,并且高表达CD1a、CD80、CD86、HLA-DR和MHC-Ⅰ分子。SKOV3/DC在体外能分裂增殖,但增殖活性明显低于SKOV3细胞。结论①脐血中的DC前体细胞(单核细胞)可在体外分化扩增为成熟的功能性DC。②SKOV3/DC融合细胞兼具两种亲本细胞的部分特性,但其体外增殖活性明显降低,失去亲本肿瘤的恶性生长特性。本研究为将SKOV3/DC作为肿瘤疫苗用于卵巢癌主动免疫治疗的研究提供了前期资料。
- 李金凤张震宇王淑珍刘晋玮
- 关键词：肿瘤疫苗树突状细胞卵巢癌融合细胞抗肿瘤免疫
- 大鼠骨髓树突状细胞的诱导与免疫学特性被引量：4
- 2007年
- 目的研究大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的培养扩增方法及用肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞(TAA/DC)的免疫学特性。方法用含重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重组大鼠白细胞介素-4(rrIL-4)和重组大鼠肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)的培养体系将近交系大鼠骨髓细胞诱导扩增为DC;用大鼠卵巢癌细胞的肿瘤细胞裂解物(TAA)致敏未成熟DC,获得TAA/DC;用流式细胞术分析DC、TAA/DC细胞的免疫表型。结果含rrGM-CSFr、rIL-4和rrTNF-α的培养体系可在体外诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为成熟的DC;TAA可促进DC的分化成熟,TAA/DC的细胞免疫表型显著增强。结论大鼠骨髓细胞可在体外诱导为成熟的DC;负载肿瘤全抗原的DC表达与抗原提呈相关的分子增高,提示其抗原提呈能力增强。
- 乔宝丽张震宇刘晋玮翟妍
- 关键词：肿瘤疫苗树突状细胞肿瘤相关抗原
