宁波市自然科学基金(2012A610137)
- 作品数：2 被引量：10H指数：1
- 相关作者：朱冬发邱锡尔汤洁谢熙更多>>
- 相关机构：宁波大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金宁波市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 日本蟳高血糖激素基因的克隆与表达分析被引量：1
- 2014年
- 通过RACE技术克隆获得日本蟳Charybdis japonica高血糖激素基因（CjCHH）全长cDNA序列;运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法分析该基因的组织差异性表达;利用原核表达技术获得CjCHH重组蛋白。序列分析表明：CjCHH cDNA全长1754 bp,包含111bp的5’末端非编码区（UTR）,423 bp的开放阅读框（ORF）,以及1236 bp的3’UTR,该基因可编码140个氨基酸。序列比对结果显示：CjCHH的成熟肽序列与其它甲壳动物CHH的一致性为41%~88%。系统进化树显示：CjCHH与其它梭子蟹科的CHH聚在一起,这与日本蟳所处的分类地位一致。组织差异性表达研究显示：CjCHH在检测的10个组织中均有表达,其中眼柄中表达量最高,肠和Y-器次之,其余组织表达量较低。成功构建了CjCHH重组表达质粒pET-CHH,并在大肠杆菌（Escherichia coli）中获得了高效表达,重组蛋白的相对分子量约11 kDa,与预测的相对分子质量大小相一致,表达水平在5 h的IPTG诱导过程中呈现上升趋势。
- 汤洁朱冬发崔晓雨谢熙邱锡尔
- 关键词：日本蟳CDNA克隆原核表达
- 三疣梭子蟹EcR基因的克隆及表达分析被引量：9
- 2013年
- 为研究蜕皮激素受体（EcR）在甲壳动物生长和生殖过程中的作用，采用反转录PCR（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增（RACE）技术，克隆了三疣梭子蟹蜕皮激素受体（PtEcR）基因全长cDNA序列（GenBank登录号：KC354381），运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法，分析该基因在不同组织、蜕皮时期和二次卵巢发育阶段的表达特征。结果表明，PtEcRcDNA全长2231bp，包含1269bpORF，编码422个氨基酸；推导的PtEcR氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物EcR进行比对，发现一致性达67％-97％；系统进化树分析PtEcR与其它甲壳动物EcR聚为一支，而昆虫EcR聚为另一支。PtEcR在检测的三疣梭子蟹10个组织中均有表达，其中在Y-器（YO）表达量最高。在蜕皮周期中，自蜕皮后期至蜕皮前期D2亚期PtEcR在YO中的表达量一直较低；至D3亚期和D4亚期，PtEcR表达量显著升高，这与血淋巴中20-羟基蜕皮酮（20E）浓度在D3／D4亚期显著升高相协同，表明PtEcR在三疣梭子蟹蜕皮过程中起着重要的作用。二次卵巢发育阶段，ptEcR在YO和肝胰腺（Hp）中的表达量自Ⅱ期逐渐升高至Ⅳ期达到最高；卵巢（Ov）中，则在Ⅰ、Ⅲ期较低，Ⅱ、Ⅳ期较高，表明PtEcR可能参与卵巢发育和卵黄发生。
- 崔晓雨朱冬发汤洁谢熙邱锡尔
- 关键词：三疣梭子蟹
