国家自然科学基金(39970783)
- 作品数：8 被引量：63H指数：4
- 相关作者：许迅罗大卫胡宏慧顾青王晓珏更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院交通大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 糖尿病视网膜病变与非酶糖化终产物的关系被引量：7
- 2004年
- 目的建立非酶糖化终产物(AGEs)检测方法,研究糖尿病视网膜病变与AGEs的关系。方法以体外孵育的AGEs免疫新西兰大白兔获得抗体;ELISA法标记糖尿病大鼠视网膜上AGEs的沉积;HE染色观察其病理改变,spearman检验统计两者与糖尿病病程的相关性。结果多克隆抗体经免疫双扩散与竞争抑制性ELISA实验被证实与AGEs特异结合。糖尿病大鼠视网膜抗AGEs染色阳性,对照组为阴性(P<0.01);其微血管周细胞密度为4.68±0.528个/油镜视野,对照组为6.74±0.532(P<0.01);其AGEs沉积程度与周细胞密度负相关,两者异常度随糖尿病病程延长而逐步加重,P<0.01。结论糖尿病代谢紊乱导致AGEs在视网膜上沉积,后者和以周细胞丢失为代表的早期视网膜微血管病有密切关系。
- 李治平许迅黄宇峰朱剑锋王晓珏胡宏慧何志平
- 关键词：糖尿病视网膜病变微循环改变ELISA法
- 氨基胍干预实验性大鼠糖尿病视网膜病变被引量：3
- 2006年
- 罗大卫许迅曹晖胡宏慧顾青
- 关键词：糖尿病视网膜病
- 牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞的体外培养被引量：16
- 2004年
- 目的 探讨牛视网膜微血管内皮细胞 (BREC)和周细胞 (BRP)的体外选择性培养方法。 方法 结合视网膜微血管的消化分离 ,采用含 10 %人血清、10 0 μg/ ml肝素的 Dulbecco改良 Eagle培养基(DMEM)和含 2 0 %胎牛血清的 DMEM培养基分别选择性培养 BREC和 BRP。通过荧光显微镜观察乙酰化低密度脂蛋白 (Dil- Ac- L DL )吞噬情况 ,应用 Von Willebrand因子抗体通过免疫组织化学方法鉴定BREC,并通过α-平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学鉴定 BRP。结果 通过选择性培养获得的 BREC和BRP的纯度达到 98%以上 ,并能连续传代。BREC早期似小鲤鱼状聚集在微血管碎片周围 ,呈片状鹅卵石样单层生长 ,存在接触性抑制 ;BRP多散布在距血管碎片稍远处 ,形状不规则 ,呈无接触性抑制生长。BREC可吞噬 Dil- Ac- L DL,细胞浆内有荧光表达 ;消化传代后 ,BREC中 Von Willebrand因子表达阳性 ,而 α-平滑肌肌动蛋白表达阴性 ;BRP的α-平滑肌肌动蛋白表达阳性 ,而 Von Willebrand因子表达阴性。 结论 选择性培养基的应用和培养皿的处理可分别获得较高纯度的 BREC和 BRP,简单且具有良好的重复性 ,无需额外步骤来去除 BREC中混杂的 BRP。
- 夏欣许迅顾青
- 关键词：视网膜微血管内皮细胞周细胞BRP体外培养细胞形态学
- 氨基胍与糖尿病视网膜病变被引量：16
- 2002年
- 糖尿病视网膜病变是严重的致盲眼病 ,氨基胍通过抑制蛋白非酶糖基化终末产物形成、一氧化氮合酶活性、对半卡巴肼敏感的胺氧化酶活性、毛细血管内白细胞粘滞、血管内皮生长因子以及抑制醛糖还原酶。
- 罗大卫许迅
- 关键词：一氧化氮合酶糖尿病视网膜病变氨基胍
- 大鼠类糖尿病性视网膜病变模型的构建及对比研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察和比较不同血清蛋白来源的外源性非酶糖基化终末产物(AGEs)构建大鼠类糖尿病性视网膜病变模型的异同。方法分别利用鼠血清蛋白(RSA)和牛血清蛋白(BSA)体外孵育AGEs。28只SD大鼠随机分为AGE-BSA组、AGE-RSA组、BSA对照组和RSA对照组(n=7)。AGE-BSA组和AGE-RSA组大鼠,自尾静脉注射40 mg/kg体外孵育的相应AGEs,1次/d,连续2周。利用视网膜消化铺片技术结合HE染色和AGEs单克隆抗体免疫组化观察视网膜毛细血管内改变。结果2周后两AGE组大鼠视网膜毛细血管内出现AGEs沉积;AGE-BSA组大鼠视网膜血管出现周细胞丢失,而AGE-RSA组未出现此改变;各组内皮细胞均未发生改变。结论使用外源性AGEs能够模拟类似的糖尿病大鼠视网膜早期病变,并且建模时间短;与RSA比较,BSA结合的AGEs可能更易模拟类糖尿病视网膜早期病变。
- 罗大卫邹海东富名水许迅曹晖孙倩
- 关键词：外源性非酶糖基化终末产物糖尿病性视网膜病变动物模型
- 外源性非酶糖基化终末产物对大鼠视网膜血管短期作用观察被引量：3
- 2005年
- 目的观察外源性非酶糖基化终末产物(AGEs)在视网膜中对血管内皮生长因子(VEGF)受体(Flt-1)的表达和对视网膜血管的影响。方法应用鼠血清白蛋白(RSA)体外孵育AGEs,并于尾静脉注射至健康大鼠体内,每日1次,连续2周,随机分为AGEs组和RSA对照组。通过眼底荧光血管造影(FFA)观察视网膜血管有、无渗漏,采用Envision系统免疫组织化学法检测视网膜Flt-1的表达,通过视网膜超薄切片和透射电镜观察视网膜血管超微结构改变。结果2周后FFA显示大鼠视网膜均未出现荧光渗漏、积聚现象,未发现有毛细血管无灌注区。视网膜内核层中出现棕黄色Flt-1阳性染色细胞,AGEs组的阳性细胞[(25.18±3.44)个]较RSA对照组多50%[(18.74±4.11)个,P<0.05]。AGEs组大鼠视网膜毛细血管基底膜电子密度轻度增高,周细胞、内皮细胞胞浆内线粒体发生肿胀、膜破裂;RSA对照组未发生超微结构的改变。结论AGEs可作为独立因素参与视网膜血管及其细胞的损害过程,并与VEGF有一定的联系。
- 罗大卫王卫俊许迅
- 关键词：非酶糖基化终末产物血管内皮生长因子视网膜血管健康大鼠外源性眼底荧光血管造影
- 糖基化终末产物对牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞存活和形态的影响被引量：2
- 2006年
- 目的观察体外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化终末产物(AGEs)对牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)和周细胞(BRP)存活和形态的影响。方法取终浓度为50mg/ml的牛血清白蛋白(BSA)、500mmol/LD-葡萄糖,于37℃孵箱内避光孵育12周,制备外源性AGEs-BSA,经SephacrylS-300层析纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)蛋白电泳鉴定AGEs-BSA和coomassie蛋白质定量法测定蛋白浓度。分设不同浓度梯度的AGEs-BSA实验组和BSA对照组,以及空白对照组,分别观察体外孵育的AGEs-BSA对体外培养的BREC和BRP的毒性作用。相差倒置显微镜观察500μg/mlAGEs-BSA和BSA作用48h对BREC和BRP形态的影响。结果随着AGEs-BSA剂量的增加,细胞被抑制呈上升趋势。500μg/mlAGEs-BSA抑制BREC为空白对照组的(72.8±15.9)%,抑制周细胞为空白对照组的(64.8±9.0)%。低浓度AGEs-BSA对BREC有一定促增生作用,但与空白对照组比较无统计学意义(P=0.231)。相差倒置显微镜观察结果显示AGEs-BSA处理组细胞增殖受抑制,失去正常细胞形态,而BSA对照组细胞同空白对照组,细胞形态正常。结论AGEs-BSA在高浓度时,无论是对BREC还是BRP,都产生生长抑制作用,从而导致BRP的丢失,损伤血管功能。进一步证实了非酶糖化是糖尿病微血管并发症的一个重要原因。
- 夏欣许迅顾青
- 关键词：细胞培养周细胞血管内膜
- 体外孵育的非酶糖基化终产物诱导正常大鼠类糖尿病性视网膜血管病变研究被引量：22
- 2003年
- 目的 探讨外源性非酶糖基化终产物 (advancednon enzymaticglycationendproducts ,AGE)在血管壁的沉积与糖尿病性视网膜血管病变之间的关系。方法 将 16只健康两月龄SD大鼠 ,随机分为 4组 ,每组 4只鼠。正常对照组不做任何处理 ;糖尿病对照组应用AGE制作糖尿病模型 ;血清白蛋白 (ratserumalbumin ,RSA)组每日自鼠尾静脉注射RSA(4 0mg kg体重 ) ,连续注射 2周 ;AGE RSA组注射AGE RSA ,注射方法、剂量与RSA组相同。 2周后观察各组鼠视网膜毛细血管周细胞密度变化。结果 注射RSA组鼠视网膜毛细血管周细胞数平均为 (5 80± 0 4 8)个 每油镜视野 ,注射AGE组为(4 31± 0 34)个 每油镜视野 ,显示实验组毛细血管周细胞密度低于对照组 ,差异有显著意义 (F =7 16 4 ,P <0 0 1)。结论 外源性AGE注入正常大鼠会引起类糖尿病性视网膜血管病变 ,AGE可能是糖尿病性视网膜血管病变的独立致病因素之一。
- 李治平许迅黄宇峰朱剑锋王晓珏胡宏慧何志平
- 关键词：非酶糖基化终产物糖尿病视网膜血管病变血糖
