国家自然科学基金(30900688)
- 作品数：12 被引量：18H指数：3
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- 小凹蛋白-1在血管紧张素Ⅱ输注大鼠模型肾小球中表达及意义
- 2011年
- 目的观察血管紧张素Ⅱ输注大鼠模型肾小球小凹蛋白-1表达及分布，探讨小凹蛋白-1在肾小球损伤中的作用。方法18只雄性Wistar大鼠皮下埋置渗透性微泵，随机分为3组。A组为正常对照组，由生理盐水代替血管紧张素Ⅱ。B组用血管紧张素Ⅱ以400ng·kg^-1·min^-1持续输注28d。C组在B组基础上加用替米沙坦3mg·kg^-1·d^-1进行干预。每周末测量尾动脉收缩压、24h尿白蛋白定量，于28d处死大鼠。心脏采血，检测血肌酐。留取肾组织，光镜、电镜下观察肾组织病理学改变。免疫组织化学法、免疫荧光分别检测肾小球小凹蛋白-1表达及小凹蛋白-1磷酸化水平。结果（1）血管紧张素Ⅱ输注后，大鼠血压逐渐升高，尿蛋白持续增加，肾小球系膜区增生加重，替米沙坦治疗可以明显降低血压和减少尿蛋白，减轻肾小球系膜区增生。（2）血管紧张素Ⅱ输注大鼠肾小球小凹蛋白-1表达无明显改变，但其磷酸化水平明显增高，替米沙坦干预后小凹蛋白-1磷酸化水平明显降低。结论小凹蛋白-1在血管紧张素Ⅱ诱导肾损伤中可能发挥重要作用。
- 周敏王志龙梁伟陈铖丁国华
- 关键词：肾小球
- 醛固酮对肾小球系膜细胞凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究醛固酮（Aid）对大鼠肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响并探讨其可能机制。方法24只SPF级SD大鼠，腹腔埋置渗透性微泵，随机分为对照组（Con组，生理盐水代替Ald处理28d；n=8）、Ald输注组（Ald组，1．5μg／h，28d；n=8）、依普利酮干预组（Epl组，Ald 1．5μg／h＋依普利酮100mg·kg^-1·d^-1，28d；n=8）。药物处理0d、7d、14d、21d、28d时，分别测量大鼠尾动脉收缩压并收集24h尿液，测定尿白蛋白排泄率（UAER）；于28d时心脏采血并分离大鼠双侧肾脏，检测血肌酐、血钾及血Ald水平；PAS染色观察肾小球病理改变；TUNEL法检测MC凋亡。体外培养大鼠MC，Annexin V—PI双染流式细胞仪检测MC凋亡；实时定量PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达，Western印迹检测Bad磷酸化水平。结果Ald组大鼠血压及UAER自7d时起显著高于同期Con组（P〈0．05），28d时Ald组大鼠血浆Ald水平约为Con组的6倍（P〈0．05），血钾显著低于Con组（P〈0．05），血肌酐与Con组差异无统计学意义（P〉0．05）。PAS染色显示Ald组大鼠肾小球系膜区增宽，基质增多，部分出现节段硬化。TUNEL检测发现，Ald组大鼠MC凋亡显著高于Con组及Epl组（均P〈0．05）。体外实验发现，随着Ald作用时间的延长，MC凋亡数明显增加（P〈0．05）；Aid组Bcl-2mRNA表达下降（P〈0．05），Bax mRNA表达升高（P〈0．05）；Ald组Bad蛋白磷酸化水平显著低于Con组（P〈0．05）。依普利酮能显著逆转Ald诱导的上述作用。结论Ald能促进大鼠MC凋亡，依普利酮干预可以明显降低Ald的促凋亡效应。Bad蛋白的去磷酸化作用可能是Ald致MC凋亡过程中的重要环节。
- 任志龙梁伟丁国华胡凤琪杨红霞
- 关键词：醛固酮系膜细胞细胞凋亡
- 抑制酪氨酸激酶Src对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞损伤的保护作用被引量：1
- 2016年
- 目的:通过调控足细胞Src激酶的表达,观察足细胞表型的改变;并探讨Src激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞损伤中的作用。方法:体外培养条件永生化小鼠足细胞(MPCs),并分组如下:A:正常对照组;B:Src激酶干扰RNA(siRNA)组;C:PP2(Src激酶抑制剂)组;D:AngⅡ组;E:AngⅡ+Src激酶siRNA组;F:AngⅡ+PP2组。采用免疫印迹法检测Src激酶及其磷酸化水平;AnnexinⅤ-FITC/PI双染及Hoechst染色法检测细胞凋亡;荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架;划痕实验进行细胞运动性分析。结果:1免疫印迹法示:应用Src激酶siRNA或PP2干预MPCs后,Src激酶表达较A组下降(P<0.05);AngⅡ处理后,MPCs内Src激酶生成与A组相比明显增多(P<0.05);Src激酶siRNA或PP2干预MPCs可减少AngⅡ上调的Src激酶表达(P<0.05)。2 AngⅡ诱导MPCs内Src激酶及其磷酸化形式表达的升高,在一定范围内呈时间及浓度依赖性。3Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst染色法两种方法显示:A组、B组与C组MPCs凋亡无明显差异(P>0.05);AngⅡ干预后,MPCs凋亡较A组增加(P<0.05);Src激酶siRNA或PP2可减轻AngⅡ诱导的MPCs凋亡(P<0.05)。4荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架:A组、B组与C组MPCs的F-actin呈微丝样结构,聚集成束,沿细胞长轴分布,形成应力纤维;D组F-actin发生重组,微丝样结构消失,排列紊乱,F-actin沿胞体外周分布,形成F-actin环;E组及F组较D组骨架重组有所减轻。5B组及C组与A组相比,MPCs运动性降低(P<0.05);D组MPCs运动性较A组增加(P<0.05);E组及F组较D组MPCs运动性降低(P<0.05)。结论:AngⅡ刺激MPCs胞内Src激酶和p-Src(Tyr 416)激酶表达增加,并在一定范围内呈时间及浓度依赖性。AngⅡ诱导MPCs凋亡增加、骨架改变、运动性增强;该过程与AngⅡ引起Src激酶和p-Src(Tyr 416)激酶生成增加有关。降低细胞内Src激酶浓度,可减轻AngⅡ诱导的MPCs损伤。降低对照组MPCs胞内Src激酶浓度,MPCs运动性降低,但�
- 王思远苏可严苗陈铖
- 关键词：足细胞细胞骨架SRC激酶
- 血管紧张素Ⅱ对足细胞nephrin磷酸化水平的影响被引量：6
- 2012年
- 目的通过建立血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）输注大鼠模型及体外足细胞培养，观察AngⅡ刺激对足细胞nephrin磷酸化水平的影响。方法30只SPF级Wistar大鼠皮下埋置渗透性微泵，随机分为AngⅡ组（AngⅡ400ng·kg-1·min-1，n=12）、替米沙坦（Tel）组（AnglI＋Tel3mg·kg-1·d-1，n=12）和正常对照组（生理盐水代替AngⅡ，n=6），于实验0、7、14、21、28d测量大鼠尾动脉收缩压，收集24h尿液，检测尿白蛋白。分别在14、28d处死动物，收集血液标本，检测血肌酐；收集肾脏标本，透射电镜观察肾小球足细胞形态，放免法检测血浆及肾组织AngⅡ水平；Western印迹检测nephrin表达及其磷酸化水平。体外培养小鼠永生化足细胞，AngⅡ（10μmol／L）刺激不同时间，并行洛沙坦（10μmol／L）干预，Western印迹法检测足细胞nephrin表达及其磷酸化水平。异硫氰酸荧光素（FITC）．鬼笔毒环肽（phalloidin）染色标记足细胞F-actin，用外周F—actin环评分系统（CFS）半定量分析足细胞骨架运动。结果（1）与正常对照组同时间点相比，AngⅡ组大鼠自7d起尾动脉收缩压开始升高（P〈O．05），随着作用时间的延长，血压持续升高。AngⅡ输注7d大鼠开始出现蛋白尿，并持续增加。各组大鼠血肌酐、尿肌酐及内生肌酐清除率无明显变化。AngⅡ输注大鼠血浆及肾组织AngⅡ浓度明显增高（均P〈0．05）。（2）与正常对照组相比，AngⅡ输注组大鼠肾小球足细胞nephrin表达明显减少，其磷酸化水平亦显著下降（P〈0．05）。（3）与正常对照组相比，AngⅡ刺激早期（3～6h），足细胞nephrin磷酸化表达即明显下调（P〈0．05），刺激12—24h维持低水平表达。（4）AngⅡ刺激后，F-actin排列紊乱，逐渐向细胞外周分布形成F-actin环，CFS评分显著高于正常对照组（P〈0．05）。结论正常状态下足细胞nephrin维持一定水平磷酸化状态，An
- 任志龙梁伟丁国华陈铖周敏徐婉杨红霞
- 关键词：足细胞
- 替米沙坦对糖尿病大鼠肾脏缺氧诱导因子1α表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察糖尿病肾脏病大鼠肾脏缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达变化及替米沙坦对其表达的影响。方法18只雄性Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病。肾脏病模型，随机分为对照组（A组）、糖尿病肾脏病组（B组）和替米沙坦治疗组（C组）。C组给予替米沙坦（5mg·kg^-1·d^-1）灌胃8周。建模成功后第8周末检测各组大鼠24h尿蛋白定量；心脏采血，留取血标本测血糖、血肌酐、血钠、血钾。PAS染色观察肾脏病理改变。免疫组织化学检测各组HIF-1α蛋白在肾脏组织中的表达和分布；RT-PCR检测各组大鼠肾脏组织中HIF-1αmRNA水平。结果①第8周末B组大鼠24h尿蛋白定量较A组显著升高（P〈0．05），C组24h尿蛋白定量较B组明显降低（P〈0．01）。②B组第8周末肾间质损伤指数明显高于A组（P〈0．05），而C组则低于B组（P〈0．05）。③免疫组织化学显示HIF-1α主要表达于肾小管细胞胞浆和胞核，肾小球系膜细胞可见少量表达。与A组比较，B组HIF-1α蛋白及mRNA水平显著升高（P〈0．05），而C组与B组相比显著降低（P〈0．05）。结论糖尿病肾脏病大鼠存在缺氧状态，替米沙坦通过减轻肾小管细胞HIF-1α表达，从而减轻肾脏病变。
- 武丽娟张静静胡凤琪梁伟陈铖丁国华
- 关键词：糖尿病肾脏病替米沙坦缺氧诱导因子1Α
- 血管紧张素Ⅱ诱导足细胞c-Abl的表达改变被引量：2
- 2012年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导下大鼠肾脏及条件永生性小鼠足细胞c-Abl的表达变化。方法采用AngⅡ泵（400ng·kg^-1·min^-1）植入sD大鼠皮下的方法建立AngⅡ输注模型，24只大鼠成模后被随机分为AngⅡ输注2周组、AngⅡ输注4周组、AngⅡ输注＋替米沙坦（ARB，3mg·kg^-1·min^-1）干预2周组及4周组，同时设生理盐水输注组和健康对照组，每组6只。分别于成模后2周末、4周末处死大鼠取肾。电镜下观察。肾脏足细胞超微结构的改变；免疫荧光法检测肾脏c-Abl表达；实时PCR及Western印迹检测c-AblmRNA及蛋白水平的改变。对于体外培养条件永生性小鼠足细胞，免疫荧光法检测足细胞肾脏c．Abl的表达，实时PCR及Western印迹法检测足细胞在AngⅡ不同作用浓度（10^-9mol／L-10^-6mol／L）及不同作用时间点（0h、3h、6h、12h、24h）c-AblmRNA和蛋白水平的变化。结果（1）免疫荧光检测结果显示肾脏足细胞有c．Abl表达；实时PCR及Western印迹结果显示AngⅡ输注2周组和4周组大鼠肾脏c-Abl表达增加（P〈0．05），ARB干预组大鼠肾脏c-Abl表达较同期AngⅡ输注组均有降低（P〈0．05）。（2）体外培养的条件永生性小鼠足细胞胞质及胞核有c-Abl表达。AngⅡ可诱导培养的小鼠足细胞c-AblmRNA及蛋白表达增加（P〈0．05），且呈时间和剂量依赖性。结论c-Abl在肾足细胞及体外培养足细胞均有表达，AngⅡ可诱导c-Abl表达上调。c-Abl可能参与了AngⅡ诱导的足细胞损伤。
- 陈星华任志龙马特安查冬青陈铖丁国华
- 关键词：足细胞C-ABL
- 血管紧张素Ⅱ诱导肾小球IQGAP1表达改变及细胞凋亡被引量：4
- 2013年
- 目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）输注对大鼠肾小球rasGTP酶活化蛋白（IQGAP1）表达及细胞凋亡的影响，探讨IQGAP1在AngⅡ诱导肾小球细胞凋亡中的作用。方法36只雄性Wistar大鼠按随机数字法分为正常对照组、生理盐水输注组和AngⅡ输注组，每隔7d测量大鼠血压及尿蛋白量。分别于实验第14天、第28天处死动物取。肾，PAS染色观察肾组织病理学改变；免疫组化、免疫荧光法观察IQGAP1在肾小球的表达及分布；Western印迹法检测。肾组织IQGAP1、半胱氨酸蛋白酶3（caspase．3）及细胞外调节蛋白激酶1／2（ERK1／2）蛋白表达；TUNEL法检测肾小球细胞凋亡。结果AngⅡ输注组大鼠血压升高，实验第14天达峰值并维持在较高水平；第7天出现蛋白尿，且随时间的延长尿蛋白量持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。AngⅡ输注组出现轻度系膜细胞增殖和系膜基质增加，生理盐水输注组和正常对照组均未见明显病理改变。TUNEL检测结果显示，AngⅡ输注后肾小球细胞凋亡显著增加；Western印迹发现，AngⅡ输注组大鼠肾小球caspase．3活化明显增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。正常对照组IQGAP1呈低水平表达并沿毛细血管袢线性分布，AngⅡ输注后IQGAP1表达量显著增加（P〈0．05），且其蛋白表达量与caspase-3活化量呈正相关（r=0．689，P〈0．05）。与对照组比较，AngⅡ输注组磷酸化的ERK1／2（p-ERK1／2）表达量显著增加（P〈0．05），且与IQGAP1蛋白表达呈正相关（r=0．658，P〈0．05）。结论IQGAP1表达上调可能通过激活ERK1/2信号通路参与AngⅡ诱导肾小球细胞凋亡的病理过程。
- 刘以鹏梁伟杨倩陈铖杨红霞丁国华
- 关键词：FAS肾小球细胞凋亡细胞外
- 血管紧张素Ⅱ对小鼠足细胞小窝蛋白1表达的影响
- 2012年
- 目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激及氯沙坦干预对足细胞小窝蛋白1（caveolin-1）表达的影响,探讨caveolin-1在足细胞损伤中的作用.方法 体外培养永生化小鼠足细胞（MPC）,AngⅡ（10-6mol/L）刺激不同时间（3 h、6h、12 h和24 h）；Losartan（10-6 mol/L）提前预处理3h后与AngⅡ（10-6 mol/L）共孵育6h,Hoechst-33342检测足细胞凋亡率,Western-blot法检测各组细胞caveolin-1蛋白表达,免疫荧光检测caveolin-1及其磷酸化水平.结果 ①AngⅡ刺激3h,足细胞即开始发生凋亡,随着刺激时间的延长,足细胞凋亡明显增多（P＜0.05）.②AngⅡ刺激不同时间caveolin-1表达总量无明显改变（P＞0.05）,从3h开始,caveolin-1磷酸化水平明显增高（P＜0.05）.③Losartan干预后caveolin-1磷酸化水平明显降低（P＜0.05）.结论 caveolin-1可能在AngⅡ诱导的足细胞损伤中发挥着重要的作用.
- 徐婉任志龙梁伟陈铖陈星华丁国华
- 关键词：蛋白足细胞
- 淋巴毒素β受体在肾脏炎症中研究进展
- 2016年
- 在人慢性肾脏疾病中可以发现肾小管间质中有淋巴细胞浸润,对人肾脏活检组织中的淋巴毒素(LT)、淋巴毒素-β受体(LT-βR)的表达情况,以及抑制LT-βR信号在肾脏炎症模型中的保护作用进行综述。LT-βR的活化可以发挥明显的促炎作用,并且抑制LT-βR信号通路,可以改善肾功能和减轻肾脏病理改变。因此,抑制LT-βR信号通路将成为治疗肾脏疾病的新靶点。
- 韩琦陈铖
- 关键词：肾脏炎症淋巴毒素细胞因子趋化因子信号通路
- 黏着斑分子α-parvin在大鼠嘌呤霉素肾病模型中的表达及其意义
- 2011年
- 目的研究大鼠嘌呤霉素肾病模型中α-parvin的表达变化，探讨其在蛋白尿发生中的作用。方法通过建立嘌呤霉素肾病模型，应用光镜、电镜观察肾脏病理改变，免疫组织化学法检测α-parvin在肾脏的表达与分布。结果（1）嘌呤霉素肾病4d组大鼠24h尿蛋白含量较对照组即已升高（P〈0．01），嘌呤霉素肾病7d组达高峰（P〈0．001）。（2）透射电镜显示嘌呤霉素肾病4d组大鼠足突部分融合，嘌呤霉素肾病7d组大鼠足突广泛融合，嘌呤霉素肾病28d组大鼠足突形态有所恢复。（3）免疫组织化学显示随着α-parvin于肾小球的表达，嘌呤霉素肾病4d组α-parvin的表达较对照组即已升高（P〈0．05）。嘌呤霉素肾病7d组表达明显高于对照组（P〈0．01）。嘌呤霉素肾病28d组α-parvin的表达明显低于嘌呤霉素肾病7d组（P〈0．01）。结论大鼠嘌呤霉素肾病模型中，盯parvin的表达增加可引起足突融合，并与蛋白尿产生密切相关。
- 张静静武丽娟陈铖任志龙梁伟丁国华
- 关键词：嘌呤霉素蛋白尿免疫组织化学
