博士科研启动基金(BS050105)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：新疆大学中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家科技重大专项国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法
- 2008年
- 目的:为了分析SEREX抗原克隆在异体食管癌患者血清中和健康对照人血清中的反应情况,我们发展了一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法。方法:采用新发展的基于免疫印迹原理的抗原克隆微阵列检测方法与传统的噬菌斑检测法对食管癌患者血清中IgG的反应情况进行了比较,并采用两种方法分析了两个SEREX阳性克隆与40例食管癌患者血清和40例健康人血清中的IgG的阳性反应率。通过ELISA对两种方法得到的结果进行了验证。结果:两个阳性克隆在两种检测方法中均与同一例食管癌病人血清起反应,采用抗原克隆微阵列检测方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25%和37.5%,采用噬菌斑检测法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为27.5%和37.5%;ELISA方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25.0%和31.25%。结论:本研究采用两种方法检测患者血清IgG反应的结果是一致的,抗原克隆微阵列检测方法可以代替传统的噬菌斑筛选法。
- 李江伟苏幼红杨薇薇晏鹏飞赵银霞
- 关键词：ELISA体液免疫
- 采用亲和层析结合制备凝胶电泳获得高纯度的重组抗原蛋白用于制备蛋白质芯片被引量：1
- 2008年
- 为了得到制备抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白,需要建立一套适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线.采用了亲和层析结合制备胶电泳的方法,对16种用于构建蛋白质芯片的食管癌相关抗原基因进行了克隆重组并在大肠杆菌中进行了表达.对高表达的重组蛋白首先制备包涵体,然后采用Ni-Sepharose亲和层析得到初步纯化的蛋白质,最后使用SDS-PAGE制备胶电泳作进一步纯化.经过透析复性后,用于制备蛋白质芯片.采用亲和层析纯化重组蛋白,得率为71%,纯度约为70%;在SDS-PAGE制备胶进一步纯化后,得率为32%,纯度为95%,经过透析和复性后,最终得率为21%,纯度为95%.得到的重组蛋白RPS4在ELISA检测中可以和血清中识别RPS4的自身抗体起反应,并且,采用精纯抗原制备的蛋白质芯片,在检测抗原与抗体这一对反应中也具有较高的敏感性和特异性,适合大规模血清抗体的检测.研究表明,采用亲和层析结合制备凝胶电泳纯化抗原蛋白,是一条简便快捷,适合需要量不大,但对纯度要求比较高的蛋白质芯片制备的技术路线.
- 李江伟冉宇靓李国惠胡海刘军吕芳苏幼红孙立新杨治华
- 关键词：制备电泳肿瘤抗原蛋白质芯片
