国家高技术研究发展计划(2001AA216091)
- 作品数：11 被引量：47H指数：3
- 相关作者：张思仲马用信孙岩肖翠英何国平更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院华西基础医学与法医学院福建医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 受精促进肽对哺乳动物精子受精能力的促进作用研究进展被引量：1
- 2003年
- 受精促进肽和腺苷酸一起调控腺苷酸环化酶 /cAMP信号通路 ,起初促进获能和随后抑制顶体的丢失 ,从而提高人及哺乳动物精子受精能力。现就受精促进肽在这一调控过程中的作用进行综述 ,并对其可能的作用机理进行讨论。
- 马用信张思仲
- 人睾丸特异表达蛋白RNF141与特定DNA序列结合的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的进一步证实RNF141的细胞核定位,初步筛选RNF141结合的DNA序列,了解其下游互作基因的信息。方法应用双重荧光免疫的方法,体外表达重组蛋白以及随机核苷酸序列筛选。结果发现了RNF141的细胞核定位,初筛得到RNF141结合的DNA序列,将此序列在人类启动子数据库比对后,发现1个候选基因。结论RNF141在生精调控中具有转录因子的某些特性。
- 卢攀张思仲刘运强
- 关键词：碱基序列荧光免疫测定
- 胆固醇酯转运蛋白基因突变及其与冠状动脉粥样硬化性心脏病易感性的关联研究被引量：12
- 2003年
- 目的 确定胆固醇酯转运蛋白 (cholesteryl ester transfer protein,CETP)基因 4种突变在中国人群中的频率 ,并探讨这些突变与脂代谢和冠状动脉粥样硬化性心脏病 (coronary atherosclerotic heartdisease,CHD)易感性的关系。方法 对 2 0 9名正常人和 2 0 3例 CHD患者 CETP基因相应片段进行了限制性片段长度多态性分析 ,用 HWE软件和 SPSS软件分别进行遗传平衡检验和统计学分析。结果 在正常对照组和 CHD患者组中均未检出 IVS14 A和 4 5 1Q突变基因。 4 0 5 V突变基因频率在正常人和 CHD患者中分别为 0 .4 4 3和 0 .4 13,4 4 2 G突变基因频率在两组中分别为 0 .0 0 7和 0 .0 2 5 ,I4 0 5 V和 D4 4 2 G突变的等位基因频率分布符合 Hardy- Weinberg平衡。CHD患者组 4 4 2 G突变基因频率显著高于正常人群 (P=0 .0 4 3)。与无 D4 4 2 G突变的 CHD患者相比 ,4 4 2 G突变杂合子 CHD患者的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇显著升高 (P=0 .0 17;P=0 .0 4 1)。结论 CETP基因 IVS14 A和 4 5 1Q突变在中国人群中非常罕见 ,4 4 2 G突变基因可能是中国人
- 郑克勤张思仲张克兰张立贺勇孔祥东孙岩苏智广
- 关键词：冠心病胆固醇酯转运蛋白基因单核苷酸多态性基因突变
- 短发夹RNA介导RNA干扰的时间和剂量效应研究被引量：20
- 2005年
- 用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术抑制哺乳动物细胞中外源报告基因的表达,以探讨该过程中RNAi作用的剂量和时间效应.应用Lipofectamine 2000将外源报告基因的表达载体与编码短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)的质粒共转染HEK293H细胞,观察shRNA载体对报告基因的抑制效应.转染后,shRNAs的瞬时表达可特异地抑制细胞内报告基因的表达.在共转染后12,24,48,60,72,96 h时检测EGFP(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因mRNA及蛋白质表达水平,结果显示,EGFPmRNA及蛋白质表达在12 h时略有降低,24～48 h时表达逐渐降低,48～72 h时降低最明显,其后EGFP表达水平逐渐恢复.提示该过程中RNAi效应呈现由弱到强、又由强到弱的逐渐消逝趋势.共转染一系列剂量比例的EGFP干扰载体与靶载体的结果表明,在一定剂量范围内,RNA干扰载体所介导的抑制效应与干扰载体剂量大小有关,当其剂量进一步加大足以抑制外源基因表达时,抑制效应则维持在一'平台期'.此外,通过RNAi抑制HeLa细胞、HEK293细胞中荧光素酶基因的表达,荧光素酶活性变化也表现出上述类似的效应.这些结果表明,在体外哺乳动物细胞中,基于表达载体的RNAi作用呈现剂量和时间依赖性效应.这为基于载体表达的RNAi技术应用研究提供了一定的理论参考及依据.
- 何国平张思仲王英成肖翠英马用信许文明丁兰陶大昌孙岩陈玉娟
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA报告基因共转染
- RNA干扰研究的新进展被引量：2
- 2004年
- RNA干扰技术(RNA interference,RNAj)诞生5年来,无论在技术本身的改进上还是应用上都有了很大的发展,尤其是siRNA的产生和引入方法有了一系列的改进,使siRNA的长期稳定表达成为可能。RNAi的生殖细胞传递现象的发现,进一步拓宽了RNAi的应用潜力。然而,除了对靶基因的沉默效应外,引入的siRNA还可以导致siRNA序列特异性、而非靶基因特异性的基因沉默现象(off-target效应)。这就提示,在注释特定siRNA产生的沉默效应时要特别注意,尤其是将siRNA用于疾病治疗时。
- 肖翠英张思仲
- 关键词：RNA干扰转录后基因沉默小干扰RNA
- 小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶载体的构建
- 2007年
- 目的构建用于小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶的载体,为产生Znf230基因敲除的小鼠模型准备条件。方法设计和合成引物,经PCR从小鼠的基因组中扩增出5′同源臂、3′同源臂及锚定序列,长度分别为4,4,1kb的片段,反向插入pBS载体的neo基因的两侧,从而构建小鼠Znf230条件基因打靶载体Znf230-pBS(5)。结果经过限制性内切酶及DNA测序鉴定,证实该条件基因打靶载体含有的同源序列与Genebank公布的基因序列一致,表明载体构建成功。结论PCR技术和定向克隆技术是构建条件基因打靶载体简单而可靠的方法。运用该技术可获得小鼠锌指蛋白基因Znf230的条件基因打靶载体。
- 刘英刘运强周钦陶大昌彭艳刘合焜张思仲
- 关键词：基因聚合酶链反应
- 人受精促进肽受体(TCPllc)基因的克隆、表达及选择性剪接
- 2003年
- 目的 分离、克隆人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc的全长cDNA,研究其表达的阶段性、组织特异性及TCPll基因3种转录本的剪接方式。方法 运用BLAST方法获得与TCPlla同源的ESTs,以逆转录的人睾丸cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR扩增片段克隆入pGEM-T easy载体并测序;采用BLAST、ClustalW及RT-PCR方法分析各转录本的基因组结构及剪接方式;RT-PCR方法分析其组织表达的特异性和阶段性。结果 获得1个新的全长cDNA,它编码440个氨基酸的蛋白质,与TCPlla、b相比,在基因组的5′-端存在复杂的外显子剪接现象。RT-PCR结果显示该转录本在正常睾丸中表达,而其他组织、无精症患者及胎儿睾丸组织中未见该基因表达。结论 从人睾丸组织中分离到人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc, 结合mTcp-11的功能提示,TCPll基因a、b、c这3种转录本对精子发生和人受精过程可能起重要作用。
- 马用信张思仲吴洽庆孙岩邱为民许文明
- 关键词：克隆
- 联会复合体——原发无精症发病中的重要角色被引量：8
- 2006年
- 联会复合体(synaptonemalcomplex,SC)是一种减数分裂特异性超分子蛋白质结构,与减数分裂Ⅰ中同源染色体的凝缩、配对、重组和分离密切相关。近年来,联会复合体的研究取得了一系列重要的进展,包括在其组成成分和功能上的一些新发现。在小鼠不育模型中联会复合体及其编码基因的异常可引起精子发生障碍。更重要的是,联会复合体编码基因之一SCP3单个碱基缺失导致的无精症已在人类原发不育患者中得到证实。对联会复合体基因SCP1的进一步研究也正在进行之中。
- 张炜张思仲阿周存
- 关键词：联会复合体减数分裂
- 小鼠Rnf141多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的获得小鼠Rnf141多克隆抗体,并对其功能进行初步研究。方法利用多聚酶链反应(PCR)扩增获得鼠Rnf141基因并且与原核表达载体pGEX-5X-3(含GST标签)进行重组,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L IPTG在25℃条件下诱导,用SDS-PAGE检测,获得GST-Rnf141融合蛋白高效表达后,通过Glutathione Sephorase4B纯化。纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,通过Western blot和免疫组织化学的方法检测抗体的特异性。结果成功构建了重组质粒pGEX-Rnf141,该质粒能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白GST-Rnf141,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的46%,制备的多抗效价达1∶128000,它可以与GST-Rnf141重组蛋白和小鼠不同脏器组织Rnf141蛋白发生特异的抗原抗体反应,在脾脏和脑组织中Rnf141蛋白表达量较高。结论成功制备小鼠Rnf141多克隆抗体,该抗体为研究Rnf141的表达与功能提供了有用的工具。
- 宋红霞张思仲杨季云
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- FKBP6基因278C/A单核苷酸多态性与原发无精症相关研究
- 2005年
- 目的对FKBP6基因第3、4外显子进行突变和多态性筛查,研究第3外显子278C/A位点及第2内含子C/T位点(rs7797242)在无精症患者和正常男性中的多态性,初步探讨与原发无精症的相关性。方法采用变性高效液相色谱和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对第3、4外显子进行突变和多态性筛查,对177例无精症患者和231名正常男性的278C/A和C/T(rs7797242)多态性进行基因分型。结果278C和278A等位基因频率符合Hardy-Weinberg平衡。无精症患者278A显著低于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。C/T多态性在两组中均未检出,第3、4外显子未筛查到新的变异。结论278A等位基因可能与原发无精症相关。C/T(rs7797242)及370G/A,430G/C,467T/C,468G/A在中国人群中非常罕见。
- 张炜张思仲肖翠英杨元马用信程丽阿周存何国平施佳军
- 关键词：无精症单核苷酸多态性外显子内含子基因变性高效液相色谱
