广东省肇庆市科技创新计划项目(2009E1826)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：谭海芳丁丽娜林凤朱颖梅谭翰清更多>>
- 相关机构：肇庆市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广东省肇庆市科技创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用被引量：2
- 2013年
- 目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝/反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0.183%。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌,16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99.5%以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。
- 谭翰清谭海芳林凤丁丽娜程洁萍朱颖梅苏乐斌陈华
- 关键词：香港海鸥形菌实时荧光PCRTAQMAN-MGB探针
