国家自然科学基金(30070858)
- 作品数：9 被引量：49H指数：5
- 相关作者：徐明郭宁胡美茹陈健钟国成更多>>
- 相关机构：军事医学科学院解放军第452医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省卫生厅科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HER-2/neu胞外配体结合区2在大肠杆菌中可溶性表达及纯化被引量：7
- 2004年
- 用PCR技术扩增HER 2 neu胞外配体结合区 2 (RLD2 )cDNA ,并将扩增的基因片段克隆于硫氧还蛋白 (TrxA)原核表达载体中 ,获得TrxA RLD2融合蛋白的可溶性表达 .通过插入偶联翻译序列 ,实现TrxA与RLD2蛋白在大肠杆菌中的共表达 .表达产物经免疫印记检测可被抗HER 2 neu特异性抗体识别 .经离子交换层析和钴亲和层析纯化 ,RLD2蛋白的纯度达 90 % .用质谱法分析RLD2蛋白的分子量 ,与预期值相符 .结果表明 ,利用TrxA表达体系在大肠杆菌中获得了HER 2
- 徐明郭宁胡美茹王嘉宁施明沈倍奋
- 关键词：HER-2/NEU原癌基因硫氧还蛋白大肠杆菌可溶性表达
- 增强树突状细胞抗原呈递功能的新进展被引量：8
- 2004年
- 钟国成郭宁
- 关键词：树突状细胞肿瘤抗原呈递疫苗
- HER-2/neu胞外配体第2结构域致敏的DC与CIK共培养对高表达HER-2/neu乳腺癌细胞杀伤作用的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨HER-2/neu胞外配体第2结构域(RLD2)作为肿瘤疫苗在抗乳腺癌免疫中的作用。方法纯化出目的蛋白HER-2/neu胞外配体第2结构域,同时选取10例经免疫组化证实为HER-2/neu阳性的乳腺癌,用RLD2分别负荷这10名患者外周血来源的树突状细胞(DC),再诱导抗原特异的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),将DC与C IK共培养,研究其对HER-2/neu阳性、阴性肿瘤细胞株和自体乳腺癌细胞杀伤活性的作用。结果RLD2诱导的特异性CIK对HER-2/neu阳性肿瘤细胞SKBR-3以及自体乳腺癌细胞的杀伤活性,较之单独CIK组更高,差异有统计学意义(P<0.01);RLD2诱导的特异性C IK对HER-2/neu阴性细胞MDA-435的杀伤活性与单独C IK组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论负载RLD2的DCs诱导的C IK对HER-2/neu阳性肿瘤细胞以及自体乳腺癌肿瘤有特异性杀伤能力,RLD2可能成为新型肿瘤疫苗应用于临床乳腺癌免疫治疗。
- 钟国成敬新蓉赵碧李硕徐明孙薏闵敏廖皓张鹤腾陈健
- 关键词：肿瘤抗原细胞因子诱导杀伤细胞肿瘤免疫
- HER-2/neu配体结合区2蛋白的甘露糖化修饰被引量：2
- 2004年
- 目的 :建立一种蛋白质甘露糖化修饰的方法。方法 :用离子交换层析和钴亲和层析法 ,纯化重组HER 2 /neu配体结合区2 (LBD2 )蛋白 ,并将纯化后的LBD2蛋白进行甘露糖化修饰。新合成的LBD2拟糖蛋白经质谱法检测后 ,用间苯二酚 硫酸法进一步鉴定。结果 :纯化后LBD2蛋白的纯度可达 90 %。新合成的LBD2拟糖蛋白在质谱图上呈现相应于甘露糖修饰后蛋白质分子量的预期峰形。经间苯二酚 硫酸法检测 ,结合于LBD2蛋白上的化学基团为糖分子。结论 :获得了LBD2拟糖蛋白 。
- 徐明郭宁王红霞李爱玲胡美茹沈倍奋
- 关键词：HER-2/NEU肿瘤疫苗
- HER-2/neu胞外配体结合区基因的克隆及原核表达被引量：7
- 2003年
- 目的 克隆HER 2 /neu胞外配体结合区基因 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。方法 用PCR技术扩增HER 2 /neu胞外配体结合区的cDNA片段 ,并将该片段插入pET 2 8a(+)原核表达载体中 ,实现插入基因的融合表达 ;用SDS PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定表达产物的相对分子质量及特异性。结果 构建的重组质粒在大肠杆菌中获得高效稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗HER 2 /neu的特异性抗体识别。结论 获得了HER 2 /neu胞外配体结合区基因在原核系统中的表达 ,为HER 2
- 徐明郭宁冯健男施明胡美茹沈倍奋
- 关键词：HER-2/NEU克隆原核表达原癌基因
- HER-2/neu配体结合区蛋白的表达、纯化及复性研究
- 2004年
- 目的 :将HER_2 neu配体结合区 (RLD)基因重组 ,并在大肠杆菌中表达 ,对以包涵体形式表达的融合蛋白进行变性和复性的研究。方法 :采用PCR技术将HER_2 neuRLD的两段基因分别扩增 ,并利用基因片段末端的共同酶切位点将两段基因相连接 ,连接产物插入原核表达载体 ,在大肠杆菌中实现融合蛋白的表达。表达产物经SDS_PAGE和Western印迹检测后 ,进行蛋白质的变性、纯化和复性等处理。结果与结论 :在大肠杆菌中实现了融合蛋白的高效表达 ,表达产物可被特异性抗体识别。经SDS_PAGE分析 ,表达产物以包涵体形式存在 ,通过变性、纯化和复性等处理 ,获得了含两个RLD的融合蛋白 ,从而为HER_2 neu肿瘤疫苗的研究打下了基础。
- 徐明郭宁施明胡美茹沈倍奋
- 关键词：HER-2/NEU基因表达复性
- 负载自体肿瘤抗原的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞在乳腺癌的临床研究被引量：23
- 2008年
- 目的:.探讨负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后,对CIK体外肿瘤细胞杀伤活性的影响,进一步观察负载自身肿瘤裂解物的DC联合CIK治疗乳腺癌患者的临床免疫学疗效、毒副反应。方法:选择20例乳腺癌患者,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF和IL-4诱导产生DC,并负载自体肿瘤细胞裂解物;悬浮细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK细胞。将负载抗原的DC与CIK共培养,观察CIK在体外对自身肿瘤细胞和乳腺癌细胞株SKBR-3的杀伤活性。此外,20例患者在切除原发病灶后,接受Ag-DC+CIK细胞的过继免疫治疗,观察临床免疫疗效。结果:①CIK细胞培养后可见CD3+、CD8+和CD3+CD56+细胞较培养前显著增加;②将负载自身肿瘤抗原的DC与CIK共培养后,CIK的体外特异性和非特异性杀瘤活性明显提高;③细胞治疗后患者外周淋巴细胞Ag-NORs的IS值明显增高;CD3+、CD8+、CD56+升高;PBMC对自身肿瘤细胞的杀伤活性增强(P<0.05);④除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应。结论:负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK细胞在体外能明显增强对乳腺癌细胞的杀伤作用,亦能增强乳腺癌患者的细胞免疫功能,取得较理想的临床免疫疗效。
- 钟国成敬新蓉李莉闵敏孙薏岳伦丽王跃蓉廖皓陈健
- 关键词：乳腺癌树突状细胞细胞因子诱导杀伤细胞肿瘤免疫肿瘤抗原
- 产生干扰素的杀伤树突状细胞(IKDC)被引量：2
- 2007年
- 钟国成陈健
- 关键词：IKDC树突状细胞肿瘤干扰素细胞毒
- 负载甘露糖化抗原的DC诱导的特异性杀伤被引量：4
- 2007年
- 目的探讨甘露糖化肿瘤疫苗在抗肿瘤免疫中的作用。方法纯化出目的蛋白HER-2/neu胞外配体第2结构域(RLD2),并对其进行糖基化修饰,自外周血单核细胞诱导产生CD83+的DC,利用DC表面的甘露糖受体,使DC负载甘露糖基化的目的抗原mRLD2(mL2),并致敏T淋巴细胞,观察CTL特异性杀伤SKBR-3细胞的效果。结果较之未进行糖基化修饰的目的蛋白RLD2(L2),mL2能促进DC的成熟,并能诱导出具有更强杀伤效力的CTL。结论本实验的结果为开展新型甘露糖化肿瘤疫苗的研制提供了理论依据。
- 钟国成徐明施明胡美茹闵敏陈健
- 关键词：树突状细胞肿瘤免疫
