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SD大鼠层粘蛋白受体基因的克隆与序列分析: 2009年; 以大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层粘蛋白受体基因,并将其克隆到pMD18-T Simple载体中进行测序,运用分子生物学软件对获得序列进行了分析。结果表明所克隆的SD大鼠层粘蛋白受体基因的ORF片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,共888个核苷酸,该基因内无内含子,编码295个氨基酸的前体蛋白,推测其相对分子质量约32.6 kD。与已报道的绵羊、家鼠、猪、牛、人相应序列作比较,发现其核苷酸序列和氨基酸序列具有较高的同源性。氨基酸序列分析表明,SD大鼠层粘蛋白受体的氨基酸点突变位点为V176M,G243E。研究结果为探讨层粘连蛋白受体基因的功能及其在疾病发生、发展过程中的作用提供了基础数据。; 宁章勇李建军罗敏意程艳芬潘家强于博; 关键词：SD大鼠

三黄鸡NHE1基因的克隆和序列分析: 2013年; 钠氢离子交换泵1(NHE1)是一种跨膜蛋白,作为已经被证明的J亚群白血病病毒受体在该病的进程中起着关键性的作用。为全面了解NHE1的基因及其编码蛋白的生物学信息,对三黄鸡NHE1基因进行了克隆和序列分析。参考原鸡NHE1基因序列设计引物,采用PCR技术分段克隆三黄鸡NHE1基因序列,并对其进行序列分析。结果表明,克隆得到的三黄鸡NHE1基因全长2 412 bp,含有1个2 412 bp的完整开放式阅读框,编码803个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与原鸡、鹌鹑、人、猪、鼠、牛、弓形虫的NHE1基因对应序列的同源性分别为99.8%、92%、78.1%、73.5%、80%、81.8%、40.9%,推导的氨基酸序列同源性分别为99.5%、93.2%、79.3%、79.6%、78.9%、78.7%、26.8%。进化树分析发现,物种内的核苷酸序列的同源性很高,种间同源性较低。生物信息学预测NHE1蛋白结构发现,NHE1蛋白多肽链N端含有12个跨膜结构,有37个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。; 黄志强安玉甫于梦童双刘荣昌王衡宁章勇; 关键词：NHE1 克隆

pIRES2-EGFP-LR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达: 2009年; 为探讨层黏蛋白受体的生理功能及其在疾病发生、发展过程中的作用,以培养的SD大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层黏蛋白受体基因。将其克隆到pMD18-T载体中,经酶切纯化后再将其亚克隆到带有加强型绿色荧光蛋白报告基因的pIRES2-EGFP真核表达载体中,对重组质粒pIRES2-EGFP-LR进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到293T细胞,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其表达情况。结果表明,真核表达载体pIRES2-EGFP-LR构建成功并可以在293T细胞中表达。该表达载体可以作为研究层黏蛋白受体生理功能的重要工具。; 宁章勇罗敏意亓文宝李小康程艳芬; 关键词：真核表达载体转染

SD大鼠层黏蛋白受体组织特异性的分布和表达: 2009年; 利用RT-PCR和SABC免疫组织化学染色的方法,对SD大鼠进行了层黏蛋白受体在mRNA和蛋白2个水平上分布和表达的检测。结果表明,层黏蛋白受体mRNA和蛋白在大鼠检测组织内均有表达,表达的细胞类型为大脑、海马和小脑的神经细胞及心肌细胞、肝细胞、淋巴细胞、支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肾小管上皮细胞。为探讨层黏蛋白受体的分布、功能及在信号转导途径中的作用提供数据。; 宁章勇罗敏意于博邓衔柏郭剑英潘俊斌; 关键词：SD大鼠

BALB/c小鼠Doppel蛋白的原核表达及其抗血清的制备: 2011年; 利用已克隆的BALB/c小鼠Doppel蛋白基因,将其成熟蛋白编码区亚克隆至表达载体pGEX-6P-1上,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-PRND。将重组蛋白表达载体转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot分析结果表明,BALB/c小鼠Doppel蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。对表达的蛋白进行提取和纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,初步建立了小鼠睾丸Doppel蛋白组织学分布的免疫组织化学方法。为进一步研究Doppel的结构、功能及其在TSEs发生发展中的作用提供基础材料和数据。; 程艳芬王衡宁章勇潘俊斌安玉甫吴新涛; 关键词：BALB/C小鼠原核表达多克隆抗体

三黄鸡α-2,3唾液酸转移酶Ⅲ基因的克隆及其在293T细胞中的表达: 2013年; 唾液酸转移酶催化机体唾液酸的形成,与流感病毒感染的种属特异性具有密切的关系。以三黄鸡法氏囊组织总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了三黄鸡α-2,3唾液酸转移酶Ⅲ(ST3GalⅢ)基因。将其克隆到带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的pIRES2真核表达载体中,对重组质粒pIRES2-EGFP-ST3GalⅢ进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到293T细胞,荧光显微镜和West-ern blot检测观察其表达情况。结果表明,转染pIRES2-EGFP-ST3GalⅢ质粒后的细胞,在荧光显微镜下检测到绿色荧光信号,并且通过Westernblot进一步验证了ST3GalⅢ在细胞中的表达。; 崔连成周飞黄志强童双黄冬妮袁远华宁章勇; 关键词：三黄鸡真核表达

SD大鼠和BALB/c小鼠PRND基因的克隆和序列分析: 2010年; 以睾丸总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠和BALB/c小鼠的叠朊蛋白(PRND)基因,并将其克隆到pMD18-T载体中进行测序,运用生物信息学软件对这些序列进行了分析。结果表明获得的SD大鼠和BALB/c小鼠PRND基因的完整ORF片段,基因无内含子,分别编码178和179个氨基酸的前体蛋白。与GenBank登录的其他同品种鼠相应序列进行比较,SD大鼠发生了G187C点突变,相应地引起了G63R的氨基酸改变;BALB/c小鼠发生了G12T、C13G和C528T点突变,但只发生了L5V的氨基酸改变,其余均为同义置换。氨基酸一级结构分析显示2种PRND编码的Dopple蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚定结合区组成。二级结构预测表明,Dopple蛋白由3个α-螺旋和2个β-折叠片层组成。研究结果为进一步研究Dopple蛋白的结构、功能及其在传染性海绵状脑病发生发展中的作用提供了基础数据。; 程艳芬宁章勇亓文宝于博; 关键词：SD大鼠 BALB/C小鼠

多肽PrP106-126对小脑颗粒神经元凋亡相关基因表达的影响: 2013年; 试验旨在研究多肽PrP106-126对小脑颗粒神经元凋亡相关基因表达的影响。本研究利用多肽PrP106-126作用于小脑颗粒神经细胞,对该多肽影响小脑颗粒神经细胞凋亡基因的表达进行了检测。结果表明:bax、caspase-3和myc基因在PrP106-126多肽作用后表达显著增加,而bcl-2基因表达明显下降,进一步验证了bax、caspase-3和myc基因具有诱导凋亡作用,而bcl-2基因则具有抑制凋亡作用。; 童双吴新涛黄志强于梦刘荣昌王衡宁章勇; 关键词：朊蛋白

SD大鼠层粘蛋白受体组织特异性的分布和表达: 层粘连蛋白受体是一个多功能蛋白,与数种类型疾病及其进程密切相关,因而引起了人们对它的巨大关注。SD大鼠是研究多种疾病发病机理的理想实验动物之一,它具有发病快、症状典型的特点,对于研究多种疾病的发生机理具有重要意义。但是,...; 宁章勇于博潘俊斌; 文献传递

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广东省自然科学基金(7300744)