国家自然科学基金(81800812)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- DUSP6在TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞间质转分化及细胞外基质合成中的作用
- 2021年
- 目的探讨双特异性磷酸酶6(dual-specificity phosphatase 6,DUSP6)在转化生长因子β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)上皮间质转分化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成的调控作用。方法用10μg/L TGF-β2处理晶状体上皮B3(HLE-B3)细胞株不同时间(0、12、24、48 h)后,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测DUSP6、EMT标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)以及ECM主要成分纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)的表达。构建DUSP6过表达载体并转染HLE-B3细胞株后,加10μg/L TGF-β2处理24 h,分为3组:TGF-β2组、空载体(empty vector,EV)+TGF-β2组、DUSP6+TGF-β2组。RT-qPCR和Western blotting检测DUSP6过表达对α-SMA、Fn表达的影响,划痕实验和Transwell迁移实验用于评估DUSP6过表达对细胞迁移的作用。结果与对照组相比,10μg/L TGF-β2处理24 h时DUSP6 mRNA及蛋白表达均减少(P<0.05)。与EV+TGF-β2组相比,DUSP6+TGF-β2组抑制了α-SMA和Fn的表达与细胞迁移(P<0.05)。结论DUSP6能够抑制TGF-β2引起的晶状体上皮细胞EMT及ECM合成,靶向DUSP6可能为后发性白内障提供一种潜在的治疗策略。
- 齐甜甜王晓宇王鑫冯辉马波
- 关键词：晶状体上皮细胞平滑肌肌动蛋白纤维连接蛋白细胞迁移
- IL-2对视网膜色素上皮细胞外基质合成的影响被引量：3
- 2019年
- 目的探讨炎症因子白介素-2(IL-2)对视网膜色素上皮(RPE)细胞发生上皮间质转分化(EMT)和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法采用10 μg/L IL-2诱导RPE细胞,在相应时间点用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT特异性指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ECM主要成分Ⅰ型胶原纤维(COL-1)和纤维连接蛋白(Fn)、转化生长因子β2 (TGF-β2)mRNA及蛋白的表达和JAK/STAT3信号通路的激活。进而用WP1066特异性阻断JAK/STAT3信号通路,观察α-SMA、COL-1、Fn和TGF-β2 mRNA及蛋白的表达变化。结果 RPE细胞经10 μg/L IL-2诱导后,Fn、COL-1、TGF-β2 mRNA与蛋白的表达及p-STAT3/STAT3明显增高( P < 0.05 ),且这种作用随IL-2处理时间增加而增强,而α-SMA mRNA和蛋白表达则无明显变化。JAK/STAT3抑制剂WP1066能有效抑制IL-2诱导的RPE细胞中Fn、COL-1和TGF-β2 mRNA和蛋白的表达。结论 IL-2能通过 JAK/STAT3 信号通路促进RPE细胞ECM合成以及TGF-β2的表达,可能在增殖性玻璃体视网膜病变中起重要作用。
- 景瑞花齐甜甜岳嘉琦裴澄马波
- 关键词：白介素-2增殖性玻璃体视网膜病变转化生长因子Β2细胞外基质
- 骨形态发生蛋白-6对转化生长因子-β2所致视网膜色素上皮细胞迁移的影响
- 2021年
- 目的探讨骨形态发生蛋白-6(BMP-6)对转化生长因子-β2(TGF-β2)所致视网膜色素上皮(RPE)细胞迁移的影响。方法RPE细胞常规培养后,用5μg·L-1 TGF-β2处理48 h,Western blot检测细胞中BMP-6蛋白水平的变化,Transwell法检测细胞迁移能力变化。随后,筛选BMP-6 siRNA抑制率最高的片段用于后续实验,构建BMP-6过表达质粒并进行鉴定后用于后续实验,RPE细胞随机分组,即(1)对照组加入正常培养基培养48 h;(2)TGF-β2组培养基中加入5μg·L-1 TGF-β2培养48 h;(3)BMP-6 siRNA组转染BMP-6-homo-1087后培养48 h;(4)BMP-6过表达组转染BMP-6过表达质粒后培养48 h;(5)TGF-β2+BMP-6过表达组转染BMP-6过表达质粒24 h后,加入5μg·L-1TGF-β2继续培养48 h。Transwell法检测细胞迁移数的变化,倒置显微镜观察细胞形态的变化。结果TGF-β2组迁移细胞数为(122.00±5.57)个,与对照组(63.67±4.04)个相比差异有统计学意义(P=0.000)。TGF-β2组BMP-6蛋白表达水平为0.41±0.13,与对照组(0.70±0.08)相比差异具有统计学意义(P=0.031)。BMP-6 siRNA组迁移细胞数为(115.67±1.53)个,与对照组(57.00±7.00)个相比差异具有统计学意义(P=0.000)。BMP-6过表达组迁移细胞数为(44.33±5.51)个,与对照组(60.00±6.25)个相比差异无统计学意义(P=0.076)。TGF-β2+BMP-6过表达组迁移细胞数为(90.33±3.51)个,与TGF-β2组(112.00±9.64)个相比差异具有统计学意义(P=0.016)。结论BMP-6可以阻止TGF-β2所致的RPE细胞的迁移,为增生性玻璃体视网膜病变的防治提供新的视角。
- 吉梦刘明马波刘轩裴澄陈丽
- 关键词：转化生长因子-Β2视网膜色素上皮细胞增生性玻璃体视网膜病变细胞迁移
- 人骨骼肌成肌细胞体外分化的全程观察及INK4a信号通路对其衰老的诱导研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立人骨骼肌成肌细胞分离和纯化方法，展示人成肌细胞体外增殖分化至衰老的全过程；研究INK4a信号通路对其衰老的诱导。方法采用机械法和胶原酶消化法，结合差速贴壁技术，获得高纯度的人成肌细胞，结蛋白（desmin）抗体染色鉴定，β-半乳糖苷酶染色及倒置显微镜下观察人成肌细胞生长、分化及衰老全程。构建慢病毒载体pLVX—p16INK4a，感染第3代人骨骼肌成肌细胞（p16组），采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT—qPCR）法测定p16INK4amRNA水平，Westernblot法测定蛋白水平；用β-半乳糖苷酶染色及倒置显微镜下观察鉴定细胞衰老程度。结果desmin抗体着色表明分离得到的人成肌细胞纯度接近100％，获取了其增殖并分化为肌管、肌纤维以及最终转归为衰老细胞各阶段的实验图片。转染7d后，RT—qPCR法与Westernblot法证明p16组细胞p16INK4amRNA与蛋白表达水平明显高于对照组（P〈0．05）；p16组细胞镜下见明显衰老表型，细胞计数显著少于对照组（P〈0．05），胞质经β-半乳糖苷酶染色后有明显蓝染，而对照组胞质蓝染微弱。结论人成肌细胞体外分离培养获得的不同阶段实验图景与现象分析，为以其为靶点的研究奠定了基础。INK4a信号通路的上调直接诱导了人成肌细胞的衰老。
- 赵丽霞李蓉熊东林姚尚龙廖翔
- 关键词：骨骼肌成肌细胞分化衰老信号通路
- TGF-β2诱导晶状体上皮细胞凋亡的机制被引量：5
- 2019年
- 目的探讨晶状体后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)过程中转化生长因子-β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)诱导晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡的机制。方法用不同浓度TGF-β2(0、0.1、1、10μg/L)处理HLEC后,Western blot检测TGF-β2诱导的线粒体途径依赖的细胞凋亡相关蛋白表达;流式细胞仪检测5μg/L TGF-β2诱导细胞凋亡的具体形式,以及5μg/L TGF-β2处理细胞36h对细胞周期的影响。结果 TGF-β2可明显增加Caspase3的表达(P<0.001),促凋亡蛋白Bax与抑凋亡蛋白Bcl-2的表达比例失调(P<0.001)并呈浓度依赖性,激活内源性线粒体途径的Bax/Bcl-2-caspase3通路的凋亡。5μg/L的TGF-β2可以诱导HLEC发生凋亡(P<0.05),处理细胞36h后可导致G1/S周期阻滞。结论 PCO过程中伴随TGF-β2诱导的线粒体途经的细胞凋亡,可能参与了PCO的形成过程,将为PCO发病机理及药物开发提供新思路。
- 景瑞花齐甜甜张明岳嘉琦王光妍裴澄马波
- 关键词：后发性白内障转化生长因子-Β2细胞凋亡
- H2O2对体外培养视网膜色素上皮细胞中BMP-6及其相关受体的影响被引量：2
- 2020年
- 目的观察氧化应激对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的损伤作用以及对骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-6及其相关受体的影响。方法RPE细胞随机分为对照组正常培养的RPE细胞;H2O2组加入200μmol·L-1 H2O2处理的RPE细胞;实验组加入200μmol·L-1 H2O2和0.1 ng·L-1 BMP-6的RPE细胞。采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒运用流式细胞仪检测对照组与H2O2组RPE细胞内ROS的变化,运用PCR及Western blot法检查对照组与H2O2组BMP-6基因及蛋白水平的变化;TUNEL染色法观察三组细胞凋亡的变化,并运用PCR及Western blot法观察三组BMP受体及其共受体尤文素(Hemojuvelin,HJV)的变化。结果H2O2组ROS水平(99.25±0.28)%较对照组(70.55±7.71)%明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2组相对于对照组BMP-6 mRNA水平及BMP-6蛋白水平均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);H2O2组的TUNEL染色阳性细胞数显著高于对照组(P<0.05),而实验组TUNEL染色阳性细胞数明显减少,与H2O2组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,H2O2组BMP三种相关受体的BMPR1A、BMPR1B及HJV的表达水平显著降低,而实验组三种受体表达水平较H2O2组显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论H2O2导致RPE细胞ROS增加,氧化应激可在基因及蛋白水平抑制BMP-6的表达;BMP-6可减轻氧化应激引起的细胞凋亡,且可能是通过激活其相关受体起作用的,这为探索年龄相关性黄斑变性的发病机制提供了一定的理论基础。
- 刘明杨晓岗马波陈丽
- 关键词：骨形态发生蛋白视网膜色素上皮细胞年龄相关性黄斑变性
- G-CSF促进晶状体上皮细胞增殖和纤维化的影响
- 2022年
- 目的粒细胞集落刺激生长因子(G-CSF)近年来被证明在后发性白内障(PCO)晶状体后囊膜组织中表达。本研究旨在探讨G-CSF是否在PCO中发挥作用。方法采用浓度梯度重组G-CSF蛋白处理人晶状体上皮细胞(HLEC-B3),筛选有效、合适的作用浓度。Western blotting检测G-CSF处理HLEC-B3细胞后细胞外基质(ECM)合成、上皮间质转分化(EMT)标志基因的作用。划痕实验和Transwell实验检测G-CSF处理对HLEC-B3细胞迁移和侵袭的作用。结果80μg/L G-CSF可以促进HLEC-B3细胞增殖。G-CSF处理HLEC-B3细胞48 h后EMT和ECM合成标志基因的表达随时间明显上调。G-CSF处理HLEC-B3细胞48 h可以明显促进其侵袭,同样,G-CSF也可以明显诱导细胞迁移。结论G-CSF可以促进HLEC-B3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT和ECM合成,可能参与了PCO的发生,抑制G-CSF表达可能是控制PCO的新策略。
- 景瑞花王韵卿乔鑫利薛菲马波
- 关键词：后发性白内障粒细胞集落刺激因子上皮间质转分化细胞外基质
